石蒜碱对胃癌AGS细胞恶性生物学行为的影响及机制研究

目的探讨石蒜碱对胃癌AGS细胞恶性生物学行为的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的盐酸石蒜碱(LH)(0μmol/L、0.015μmol/L、0.0625μmol/L、0.25μmol/L、1μmol/L、4μmol/L、16μmol/L)干预AGS细胞0 h、24 h和48 h,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)试验计算干预48 h时药物半数抑制浓度(IC50),以确定后续试验的LH浓度。将AGS细胞分为对照组(0.1%二甲基亚砜处理)、LH-L组(0.125μmol/L LH处理)、LH-M组(0.5μmol/L LH处理),LH-H组(2μmol/L LH处理),以及微小RNA(miRNA)-675-nc组(转染慢病毒空白载体)、miRNA-675-mimic组(转染慢病毒miRNA-675过表达载体)和LH+miRNA-675-mimic组(转染慢病毒miRNA-675过表达载体+2μmol/L LH处理)。应用CCK-8试验、平板克隆试验、细胞划痕愈合试验和Transwell试验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力;应用实时荧光定量PCR检测miRNA-675和糖原合成酶激酶(GSK)-3βmRNA的相对表达水平;应用蛋白质印迹法检测GSK-3β和β-联蛋白(β-catenin)蛋白相对表达水平。结果在0.015~16μmol/L范围内,LH可时间-浓度依赖地抑制AGS细胞的增殖能力(P<0.05),干预48 h时,药物IC50为(0.81±0.13)μmol/L。对照组、LH-L组、LH-M组、LH-H组干预14 d后细胞克隆数,干预24 h、48 h后划痕愈合率,干预24 h后侵袭细胞数、迁移细胞数,干预48 h后miRNA-675相对表达水平均依次降低;干预48 h后LH-M组细胞的GSK-3βmRNA相对表达水平高于对照组,LH-H组细胞的GSK-3βmRNA相对表达水平高于对照组、LH-L组、LH-M组;干预48 h后LH-M组GSK-3β蛋白相对表达水平高于对照组,LH-H组GSK-3β蛋白相对表达水平高于对照组和LH-L组;干预48 h后LH-H组β-catenin蛋白相对表达水平低于对照组和LH-L组(均P<0.05)。miRNA-675-mimic组的光密度值(48 h)、细胞克隆数(14 d)、细胞侵袭数(24 h)、细胞迁移数(24 h)、β-catenin蛋白相对表达水平(48 h)均高于miRNA-675-nc组、LH+miRNA-675-mimic组;miRNA-675-mimic组GSK-3β蛋白相对表达水平(48 h)低于miRNA-675-nc组、LH+miRNA-675-mimic组(均P<0.05)。结论石蒜碱能有效地抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移能力,该作用可能通过调控miRNA-675/GSK-3β/β-catenin轴实现。

miR-30a-5p靶向JAK1调控人胃腺癌AGS细胞自噬的机制研究

目的探究miR-30a-5p靶向JAK1调控人胃腺癌AGS细胞自噬的机制。方法体外培养人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃腺癌细胞(AGS)。RT-qPCR检测miR-30a-5p表达水平,Starbase数据库预测miR-30a-5p的表达水平及其与JAK1的潜在结合位点,双荧光素酶报告实验验证miR-30a-5p对JAK1基因的靶向调控作用,免疫荧光检测自噬标志物LC3阳性细胞水平,WB检测JAK1和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3 Ⅱ/Ⅰ和p62)的表达水平。结果与GES-1组相比,AGS组细胞中miR-30a-5p表达水平显著降低;过表达miR-30a-5p后,AGS细胞中自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3 Ⅱ/Ⅰ)表达水平以及自噬标志物LC3阳性细胞水平显著降低,p62蛋白的表达水平显著升高;miR-30a-5p与JAK1存在结合位点且靶向负调控JAK1;与miR-30a-5p过表达+oe-NC对照处理,miR-30a-5p过表达同时过表达JAK1处理后观察到AGS细胞中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平明显增加,p62蛋白水平明显降低,进一步的免疫荧光也观察到miR-30a-5p过表达+过表达JAK1后LC3荧光强度明显增加。结论miR-30a-5p靶向负调控JAK1蛋白的表达,抑制人胃腺癌AGS细胞自噬。

胃祺饮全方挥发油对AGS细胞增殖活性的影响(英文)

目的:胃祺饮是对慢性萎缩性胃炎具有良好临床疗效的中药复方。本实验研究胃祺饮挥发油的主要成分及其对AGS细胞增殖的抑制作用。方法:采用气相色谱-质谱联用法测定胃祺饮全方挥发油的化学成分,采用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞活性,流式细胞分析检测细胞周期分布,使用Hoechst33342和碘化丙啶双染法测定细胞凋亡和坏死。结果:化学分析显示胃祺饮挥发油的主要成分是冰片烯和3-正丁基苯酞。当归的有效成分藁本内酯在胃祺饮挥发油中没有检测到。胃祺饮挥发油能呈剂量和时间依赖性地抑制胃癌细胞的增殖,阻滞细胞周期于G2/M期,并能够诱导细胞的凋亡和坏死。结论:胃祺饮挥发油含有多种对于慢性萎缩性胃炎和功能性消化不良具有良好疗效的化学成分,具有显著的抗AGS细胞增殖的作用,其作用通过细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡实现。因此在胃祺饮的煎煮过程中,应尽量避免挥发油的损失。

沉默dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响

背景与目的:DNA甲基转移酶1(DNAmethyltransferase1,dnmt1)基因在多种肿瘤细胞中表达量相当高,而在正常成人细胞中则低表达,因此dnmt1基因的高表达与肿瘤的发生有密切的关系。本研究观察以dnmt1基因为靶基因的重组质粒对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法:设计短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的寡核苷酸片段,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体pshRNA-dnmt1,转染胃癌细胞株AGS。实验分为空白对照组(仅予脂质体)、pTZU6+1组(予空质粒pTZU6+1)和pshRNA-dnmt1组(予以重组质粒pshRNA-dnmt1)3组。Westernblot检测dnmt1蛋白水平变化;RT-PCR法评估mRNA水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT法检测细胞生长情况;吖啶橙/溴乙锭双染色(AO/EB)法、电镜和TUNEL观察细胞凋亡情况。结果:成功构建重组质粒pshRNA-dnmt1,并经序列分析得到确认。pshRNA-dnmt1转染AGS细胞后24h出现dnmt1蛋白表达量减少,24、48、72h抑制率分别为28.24%、68.54%、81.47%。转染pshRNA-dnmt1后24、48、72h对AGS细胞中dnmt1mRNA的抑制率分别为21.63%、52.97%、72.06%。转染后72hS期细胞由空白对照组的(36.58±1.76)%降至pshRNA-dnmt1组的(18.54±6.59)%;G2/M期细胞由空白对照组的(6.18±0.32)%升至pshRNA-dnmt1组的(18.53±1.42)%,均有显著性差异(P<0.05)。转染后24、48、72h细胞存活率分别为79.49%、51.63%和39.16%。AO/EB法、电镜和TUNEL均可见大量典型的凋亡和坏死细胞。结论:重组质粒pshRNA-dnmt1能特异有效地抑制AGS细胞内dnmt1的表达、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供依据。

七叶皂苷钠阻断JAK-1/STAT-1信号诱导BGC-823及AGS细胞凋亡

目的:探讨七叶皂苷钠诱导胃腺癌BGC-823细胞及胃癌AGS细胞凋亡的机制。方法:采用CCK-8法检测七叶皂苷钠作用后胃癌细胞活力的变化;倒置显微镜下观察胃癌细胞的形态变化;荧光倒置显微镜观察DAPI单染后细胞核形态的改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western bloting检测JAK-1、STAT-1磷酸化情况;激光共聚焦显微镜观察STAT-1核转位情况。结果:七叶皂苷钠可浓度依赖性抑制胃癌细胞增殖,使胃癌细胞形态及细胞核形态呈现凋亡变化,显著升高癌细胞凋亡率,并下调JAK-1、STAT-1信号蛋白磷酸化及抑制STAT-1的核转位。结论:七叶皂苷钠能抑制BGC-823细胞及AGS细胞增殖并诱导其凋亡,该过程可能是通过抑制JAK-1/STAT-1信号级联来实现的。

榄香烯乳联合顺铂抑制胃癌AGS细胞生长的实验研究

目的:研究榄香烯乳(elemene)单独或联合顺铂(cisplatin)对人胃癌AGS细胞增殖和周期的影响,并探讨两药是否有协同作用及其可能的分子机制。方法:榄香烯乳单独或联合顺铂作用人胃癌AGS细胞。MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;BrdU掺入标记增殖的AGS细胞,免疫荧光细胞染色法测定增殖细胞数;Western印迹检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达。结果:榄香烯乳(10-160μg/ml)对AGS细胞生长的抑制作用呈现浓度和时间依赖性,与对照组比较,除10μg/ml作用12h外,其它各组差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例增加,DNA合成期(S期)细胞比例下降。榄香烯乳作用AGS细胞后,降低BrdU的渗入率,减少cyclinD1的表达。榄香烯乳(80μg/ml)联合顺铂(4μg/ml)对细胞增殖和周期的抑制明显强于单独用药(P<0.05)。结论:榄香烯乳可抑制人胃癌AGS细胞的增殖并阻滞细胞于G0/G1期,与顺铂联合具有协同作用,其机理可能与降低cyclinD1的表达有关。

七方胃痛颗粒对H.pylori感染的AGS细胞TFF1表达及ERK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨七方胃痛颗粒对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的人胃腺癌AGS细胞三叶因子1(trefoil factor family1,TFF1)的表达及其细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/核因子κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)信号通路的调控机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)法检测TFF1 mRNA的表达,Western blot法检测TFF1、磷酸化ERK及NF-κB蛋白的表达水平;同时采用U0126抑制ERK信号通路后,观察AGS细胞TFF1蛋白表达的变化.结果:10%、20%、30%浓度七方胃痛颗粒药物血清作用H.pylori感染的AGS后,TFF1mRNA表达量为271±33、305±23、327±13,显著高于实验对照组的187±30,(P<0.05);TFF1、p-ERK及NF-κB蛋白表达量分别为271±22、358±31、428±34;175±9、141±3、107±15;116.0±2.6、83±2、53.0±6.6;与实验对组的210±13比较,差异具有统计学意义(均P<0.05).加入U0126阻断ERK信号通路后,TFF1蛋白表达量为115±6,与实验对照组的210±13比较,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:七方胃痛颗粒可能通过抑制ERK/NF-κB信号通路参与调控H.pylori诱导的AGS细胞TFF1表达,促进上皮修复,是其防治H.pylori诱发胃癌可能的机制之一.

EGFR表达抑制对胃癌AGS细胞生物学行为及化疗敏感性的影响

目的:观察表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)表达抑制对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期及化疗药物敏感性的影响。方法:设计3条EGFR-siRNA,转染胃癌AGS细胞,CCK-8方法测定细胞增殖,Transwell方法检测细胞侵袭和转移能力,流式细胞术测定细胞凋亡与周期,RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达,Western blot方法检测EGFR、ERK、p-ERK、AKT和p-AKT蛋白表达。结果:EGFR干扰能有效抑制胃癌AGS细胞中EGFR的基因和蛋白表达水平(P<0.05)。与对照组、阴性siRNA转染组相比,EGFR-siRNA转染组AGS细胞增殖抑制显著增加,迁移、侵袭能力显著下降,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性显著增加(P<0.05)。EGFR表达抑制后,处于S期的细胞比例明显减少,G_2/M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR表达抑制后,AKT和p-AKT表达下调。结论:抑制EGFR表达可抑制胃癌AGS细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,增加细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性,其机制可能与AKT、p-AKT的表达下降有关。

AGS细胞系中12-LOX的表达及其抑制剂对细胞增殖的影响

目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12- lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响. 方法:AGS在含100 mL/L小牛血清+100 kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-PCR 检测12-LOX在AGS中的表达情况,分别以20,40, 80 μmol/L baicalein干预细胞,用四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法在24,48,72 h 测量细胞吸光度,检测baicalein对细胞增殖的影响:用倒置显微镜和电子显微镜进行形态观察;通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡指数. 结果:AGS细胞中存在12-LOXmRNA表达;MTT显示baicalein大致呈时间、剂量依赖性抑制细胞增殖(各组间P<0.01,除外40 μmol/L 24 h组与48 h组);AGS细胞存活率最高为82.1%,最低为38.4%.倒置显微镜下可见baicalein干预后的细胞皱缩,部分细胞胞体变圆,脱离贴壁状态,成为悬浮细胞;电镜下可见baicalein干预后的细胞出现了凋亡的特征性改变:核染色质边集及凋亡小体形成;AO-EB染色法显示除0μmol/L组不同时间点细胞凋亡指数无显著差异外(P>0.05),其余各干预组细胞凋亡指数均有显著差异(P<0.01);TUNEL染色法显示48 h时,baicalein 80μmol/L细胞调亡指数为38.37±0.36%而0 μmol/L组细胞调亡指数为7.27±0.21%,两组间存在显著差异(P<0.01). 结论:人胃癌细胞AGS中存在12-LOXmRNA表达,其特异性抑制剂baicalein能抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.

ATF5蛋白表达水平与胃癌AGS细胞药敏水平的相关性

目的:探究ATF5蛋白表达水平与胃癌AGS细胞药敏水平的相关性。方法:采用脂质体载体转染技术转染ATF5 pc DNA3.1质粒、ATF5 si RNA空质粒,构建ATF5蛋白高、中、低表达水平的AGS细胞组。Western blot实验检测AGS细胞中ATF5蛋白表达水平,MTT实验检测AGS细胞对紫杉醇、顺铂药物敏感性,平板克隆形成实验探讨AGS细胞集落形成差异,分析ATF5蛋白表达水平与胃癌AGS细胞药敏水平的相关性。结果:ATF5蛋白过表达组AGS细胞在紫杉醇、顺铂影响后存活率较对照组高,均P<0.05,IC50值较对照组也明显升高,均P=0.00;而低表达组存活率较对照组低,均P<0.05,IC50值较对照组也明显降低,P顺=0.00,P紫=0.002。过表达组细胞在药物影响后克隆形成数较对照组高,而低表达组克隆形成集落较对照组低,均P<0.05。结论:ATF5蛋白的过表达能降低胃癌AGS细胞对紫杉醇、顺铂的药物敏感性,而ATF5蛋白的低表达则能增加胃癌AGS细胞对紫杉醇、顺铂的药物敏感性,提示胃癌AGS细胞药敏水平可能与ATF5蛋白表达水平相关。

雷公藤红素对AGS细胞迁移的影响

目的观察不同浓度雷公藤红素在不同时间对AGS细胞形态及细胞迁移的影响,探索雷公藤红素对AGS细胞迁移较佳抑制作用浓度及时间。方法将AGS细胞铺于6孔板并培养,待贴壁细胞密度达到70%~80%后,采用划痕法制造细胞迁移模型,分为DMSO及雷公藤红素5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、0.01μM浓度组,并分别于0 h、6 h、12 h、24 h观察细胞的形态及细胞的迁移情况,且拍照记录,计算细胞迁移速度及细胞迁移抑制率并进行各组之间的比较。结果高浓度雷公藤红素使AGS细胞形态发生改变;雷公藤红素能够抑制AGS细胞迁移,且终浓度为1μM时抑制作用最明显。同一浓度不同作用时间其对AGS细胞迁移的抑制作用差异有统计学意义（P〈0.05）;同一时间不同浓度雷公藤红素对AGS细胞迁移的抑制作用差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高浓度雷公藤红素能够使AGS细胞形态发生改变并凋亡;雷公藤红素抑制了AGS细胞的迁移,且该抑制作用与浓度、时间相关,且在终浓度为1μM作用于AGS细胞12 h时,其对AGS细胞迁移的抑制作用最明显。

沉默PROX1表达对胃癌AGS细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨沉默PROX1表达对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:胃癌AGS细胞分别感染PROX1siRNA和阴性对照慢病毒(设置为干扰组和阴性对照组),以没有感染慢病毒的AGS细胞为空白对照组。采用qRT-PCR和Westernblot法检测细胞中PROX1mRNA和蛋白的表达,MTT方法测定细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Westernblot检测细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白上皮性钙黏附素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和侵袭迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平。结果:干扰组细胞中PROX1mRNA和蛋白表达水平均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。与阴性对照组和空白对照组比较,干扰组细胞增殖能力降低,细胞侵袭和迁移数目减少,细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:沉默PROX1表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭和EMT。

lncRNA MAFG-AS1通过调控miR-11181-3p/GLG1轴促进胃癌AGS细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解

目的:探讨lncRNA MAFG-AS1/miR-11181-3p/GLG1分子轴对胃癌(gastric cancer,GC)细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的影响及其可能的机制。方法:选取MAFG-AS1相对高表达的GC细胞系AGS作为研究对象,采用qPCR法检测其MAFGAS1、miR-11181-3p、GLG1的RNA表达水平,Transwell实验、糖酵解分析等检测细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的变化,利用生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证MAFG-AS1、miR-11181-3p、GLG1之间的相互作用关系。结果:敲减MAFG-AS1显著上调miR-11181-3p及下调GLG1的表达(均P<0.01),并可显著抑制GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解(均P<0.01);荧光素酶报告基因证实MAFG-AS1竞争性吸附miR-11181-3p(P<0.01);抑制miR-11181-3p或过表达GLG1可部分逆转敲减MAFG-AS1对GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的抑制作用(均P<0.05或P<0.01)。结论:MAFG-AS1通过miR-11181-3p/GLG1分子轴增强GC迁移、侵袭和有氧糖酵解,可能是GC诊疗的潜在分子靶点。

安氏隐孢子虫在HCT-8和AGS细胞中增殖效果的研究

目的比较安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)在人结肠腺癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞和人胃腺癌(human stomach adenocarcinoma,AGS)细胞中的增殖。方法取培养至对数生长期的HCT-8细胞和AGS细胞,接种于6孔培养板中,待细胞生长融合至60%～70%时,加入2.5×105个安氏隐孢子虫卵囊,培养至24 h和48 h,以Giemsa染色法和Real-time PCR技术检测虫体在细胞中的增殖。结果 Giemsa染色法观察24 h和48 h HCT-8细胞中虫体数量均高于AGS细胞(P<0.05)。Real-time PCR技术测得24 h和48 h HCT-8细胞中安氏隐孢子虫卵囊COWP基因拷贝数均高于AGS细胞(P<0.05)。结论与AGS细胞相比,以HCT-8细胞作为体外感染模型更利于安氏隐孢子虫的增殖。

CAC1对胃癌细胞系AGS细胞周期的调控作用

目的研究新基因CAC1对胃癌细胞系AGS的细胞周期和细胞周期相关基因表达的调控作用。方法将AGS细胞分为空白对照组、阴性对照组和干扰组,分别给予细胞培养液、阴性对照siRNA和有效的CAC1-siRNA处理,用流式细胞仪检测细胞周期的变化,实时定量PCR和Western blot法检测细胞周期相关基因(p53、cyclin A、cyclin E及CDK2)在mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 CAC1沉默后,流式细胞仪检测发现,RNA干扰组的AGS细胞G1期细胞比例[(73.23±3.04)%]较对照组[(45.33±0.82)%]明显增加(P<0.05),S期细胞比例[(5.40±5.83)%]较对照组[(41.07±1.07)%]显著减少(P<0.05)。CAC1沉默后,与对照组相比,干扰组无论是cyclin E的mRNA表达水平(1.000±0.000 vs 0.294±0.011,P<0.05),还是cyclin A的mRNA表达水平(1.000±0.000 vs 0.886±0.039,P<0.05),均出现了明显的下降,p53 mRNA表达水平显著上升(1.000±0.000 vs 2.233±0.122,P<0.05),CDK2mRNA表达水平无明显变化(1.000±0.000 vs 0.952±0.007,P>0.05)。类似地,CAC1沉默后,与对照组相比,干扰组的cyclin E蛋白表达水平(0.667±0.236 vs 0.165±0.046,P<0.05)和cyclin A蛋白表达水平(0.607±0.284 vs 0.208±0.029,P<0.05)均出现了明显的下降,P53蛋白表达水平出现了显著的上升(0.326±0.054 vs 0.656±0.106,P<0.05);而CDK2蛋白表达水平无明显变化(0.864±0.175 vs 0.717±0.100,P>0.05)。结论 CAC1可促进胃癌AGS细胞的G1/S期转换,下调p53的表达,上调cyclin E和cyclin A的表达。

土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡机制的研究

目的:研究土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡的作用机制。方法:采用Hoechst33342/PI核荧光双染色法,DNA片段化分析技术检测细胞凋亡的变化;FCM分析细胞周期的变化;Western印迹法和RT-PCR法检测与细胞凋亡和细胞周期相关的蛋白及mRNA的表达。结果:土槿乙酸明显诱导人胃癌AGS细胞的凋亡,细胞周期被阻滞在G2/M期;10μmol/L土槿乙酸作用AGS细胞12h后p53表达增加,在36h时达到峰值,24h后可见p21WAF1/CIP1表达明显增加。土槿乙酸作用于AGS细胞后,增加了Fas/APO-1蛋白表达和促凋亡蛋白Bax mRNA的表达,降低了抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,提高了caspase-3活性。结论:土槿乙酸可通过p53激活Bcl-2介导的线粒体途径和Fas/APO-1介导的死亡受体途径诱导人胃癌AGS细胞凋亡。

不同疾病来源的幽门螺杆菌菌株对AGS细胞动力学的影响

背景:体内外研究发现,幽门螺杆菌(H.pylori)感染可促进胃黏膜上皮细胞增殖或触发细胞凋亡,从而引起细胞动力学改变,而菌株的差异可导致不同的结果。目的:通过体外实验观察不同疾病来源的H.pylori菌株对人胃癌细胞株AGS的细胞活力、细胞凋亡和细胞周期的影响,以确定不同疾病来源H.pylori菌株的细胞毒性是否存在差异。方法:采用聚合酶链反应(PCR)鉴定分离自胃癌和胃炎患者的H.pylori菌株的毒力基因和相关亚型。将AGS细胞分别与H.pylori菌株共培养,采用四唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果:cagA、vacA、iceA和babA2基因和相关亚型在胃癌和胃炎H.pylori菌株中呈均匀分布。不同菌株抑制AGS细胞活力和促进细胞凋亡的能力虽有强弱差别,但胃癌菌株与胃炎菌株之间不存在整体上的差别。多数H.pylori菌株能抑制AGS细胞周期的G1/S期转换。结论:不同H.pylori菌株对共培养的AGS细胞动力学的影响存在差异,但胃癌菌株与胃炎菌株的细胞毒性无整体上的差别。

吡咯喹啉醌对γ射线照射后AGS细胞抗氧化力的影响

目的:探讨吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone,PQQ)对60Coγ射线照射细胞清除自由基能力。方法:培养AGS细胞至对数期,实验分为6组:正常培养未照射组、单纯照射组、PQQ培养12 h未照射组、PQQ培养4 h未照射组、PQQ培养12 h后照射组、PQQ培养4 h后照射组。60Coγ照射,剂量8Gy。照射后6,12,24 h测定细胞总抗氧化力(T-AOC),SOD,MDA含量。结果:与正常未照组比较,照射后6,12,24 h单纯照射组SOD,T-AOC显著降低(P<0.05),MDA显著升高(P<0.01);与单纯照射组比较:PQQ培养的照射组SOD,T-AOC显著升高(P<0.01),除照射后6 h外MDA显著降低(P<0.05)。结论:PQQ可通过增强细胞抗氧化能力,降低氧化水平,从而对辐射细胞起保护作用。

幽门螺杆菌对AGS细胞蛋白激酶C同工酶表达的影响

目的研究PKC同工酶在H.pylori感染引起胃癌发生中起作用。方法将幽门螺杆菌和人胃上皮腺癌细胞系AGS细胞共培养(细菌∶细胞=200∶1),在幽门螺杆菌攻击AGS细胞后的0h、0.5h、1h、4h、6h、12h、24h时间点分别提取AGS细胞的总RNA,同时提取相对应时间点平行培养的未受幽门螺杆菌攻击的AGS细胞的总RNA作为对照组,以Beta-actin为内参照,应用Taq-Man实时荧光定量RT-PCR技术研究这些样品的PKC同工酶的mRNA变化情况。结果与对照组相比,PKCε、PKCγ、PKCι、PKCζ、PKCα mRNA水平呈现增高趋势;PKCθ mRNA水平呈现持续下降趋势;PKCδ mRNA水平与对照组呈现一致表达趋势。结论H.pylori可能通过上调具有肿瘤增殖活性的PKCα、ε、γ、ι、ζ,下调了具有凋亡活性的PKCθ,参与H.pylori引起胃癌的发生过程。H.pylori对PKCδ mRNA水平没有影响。

Claudin在幽门螺杆菌和AGS细胞相互作用不同时间点表达分析

目的研究Claudin家族成员在Helicobacter pylori(H.pylori)和AGS相互作用的不同时间点表达谱变化。方法TRIzol方法提取H.pylori26695攻击AGS细胞0、0.5、2、4、6 h时间点的细胞总RNA样品,对样品mRNA进行线性扩增后,应用IlluminaHuman-6芯片检测基因表达量,以Detection Score≥0.99;|DiffScore|≥13;方差分析(ANOVA)P≤0.05作为筛选差异基因的标准;比较Claudin家族成员的表达量。结果Claudin家族有4个成员存在差异表达,其中在早期Claudin 15下调,4 h后无差异,Claudin 2、23早期上调后于4 h和6 h分别恢复至无差异水平,而Claudin 6在0.5 h后持续上调。结论Claudin蛋白家族2、6、15、23成员参与H.pylori感染过程,并且呈现时序性变化,为H.pylori感染能引发胃癌机制研究提供线索。