AGS细胞系中12-LOX的表达及其抑制剂对细胞增殖的影响

目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12- lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响. 方法:AGS在含100 mL/L小牛血清+100 kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-PCR 检测12-LOX在AGS中的表达情况,分别以20,40, 80 μmol/L baicalein干预细胞,用四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法在24,48,72 h 测量细胞吸光度,检测baicalein对细胞增殖的影响:用倒置显微镜和电子显微镜进行形态观察;通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡指数. 结果:AGS细胞中存在12-LOXmRNA表达;MTT显示baicalein大致呈时间、剂量依赖性抑制细胞增殖(各组间P<0.01,除外40 μmol/L 24 h组与48 h组);AGS细胞存活率最高为82.1%,最低为38.4%.倒置显微镜下可见baicalein干预后的细胞皱缩,部分细胞胞体变圆,脱离贴壁状态,成为悬浮细胞;电镜下可见baicalein干预后的细胞出现了凋亡的特征性改变:核染色质边集及凋亡小体形成;AO-EB染色法显示除0μmol/L组不同时间点细胞凋亡指数无显著差异外(P>0.05),其余各干预组细胞凋亡指数均有显著差异(P<0.01);TUNEL染色法显示48 h时,baicalein 80μmol/L细胞调亡指数为38.37±0.36%而0 μmol/L组细胞调亡指数为7.27±0.21%,两组间存在显著差异(P<0.01). 结论:人胃癌细胞AGS中存在12-LOXmRNA表达,其特异性抑制剂baicalein能抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.

毛蕊异黄酮通过调节线粒体通路抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭

【目的】探讨毛蕊异黄酮对人胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭机制。【方法】培养人胃癌细胞系AGS,使用毛蕊异黄酮或/和MHY1485[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激活剂]处理胃癌细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力,JC-1免疫荧光染色法检测线粒体膜电位变化,Western Blot法检测自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达。【结果】毛蕊异黄酮抑制AGS细胞的增殖与迁移、侵袭能力,上调线粒体膜电位,促进细胞自噬发生,下调Beclin-1与LC3-Ⅱ的表达,抑制p-mTOR的表达。MHY1485共处理部分逆转毛蕊异黄酮对AGS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制。【结论】毛蕊异黄酮可通过抑制p-mTOR表达,促进AGS细胞自噬发生,进而抑制AGS细胞的增殖、迁移与侵袭。

不同疾病来源幽门螺杆菌菌株对人胃癌细胞系AGS基质金属蛋白酶表达影响的比较研究

背景：幽门螺杆菌(H．pylori)是胃癌的Ⅰ类致癌原,但H．pylori感染与胃癌发生的分子机制仍不明了。目的：在体外观察不同疾病来源的H．pylori菌株对人胃癌细胞系AGS基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响是否存在差异。方法：将AGS细胞分别与5株分离自胃癌和5株分离自轻度非萎缩性胃炎患者的H．pylori共培养,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测MMP-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白的表达,以肠道致病性大肠杆菌作为细菌对照。结果：胃炎H．pylori菌株和大肠杆菌基本不影响AGS细胞MMP-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白的表达,而所有胃癌菌株均能上调MMP-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结论：分离自胃癌和胃炎患者的H．pylori菌株对AGS细胞MMP-2、MMP-7和MMP-9表达的影响有所不同,说明不同疾病来源的H．pylori菌株在促细胞恶变能力上存在差异。

miR-106a通过调控PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调节胃癌细胞生物学行为的研究

目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。观察各组细胞存活率、细胞周期、细胞侵袭、迁移及caspase活性、Bax、Bcl-2、Casepase-3蛋白相对表达量、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达量。结果与miR-NC组比较,miR-106a inhibitor组AGS细胞活性降低[(分别为15.01±0.97)、(69.82±2.31)%](P<0.01);miR-106a mimics组AGS细胞G0/G1期细胞比例降低(P<0.05)(分别为17.33±1.04、58.24±0.82),G2/M和S期细胞比例升高(分别为50.11±1.12、35.64±1.07和31.56±0.92、9.24±0.25);miR-106a inhibitor组AGS细胞G0/G1期细胞比例升高(分别为78.43±1.12、58.24±0.82)(P<0.05),G2/M和S期细胞比例降低(分别为33.65±0.99、35.64±1.07和19.78±0.84、9.24±0.25)(P<0.01)。与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞的迁移、侵袭能力增强,miR-106a inhibitor组AGS细胞的迁移、侵袭能力减弱(P<0.01);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性降低,miR-106a inhibitor组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(P<0.05);miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞Bax(分别为0.69±0.07、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为0.37±0.04、0.91±0.09)相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(分别为1.53±0.12、0.94±0.09),miR-106a inhibitor组AGS细胞Bax(分别为2.07±0.21、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为1.23±0.12、0.91±0.09)相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)(分别为0.65±0.07、0.94±0.09);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞p85β(分别为1.24±0.12、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为2.13±0.23、1.01±0.10)、p-AKT蛋白(分别为1.14±0.11、0.72±0.06)相对表达量升高,miR-106a inhibitor组AGS细胞p85β(分别为0.69±0.07、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为0.75±0.07、1.01±0.10)、p-AKT(分别为0.53±0.05、0.72±0.06)相对表达量降低(P<0.05)。结论miRNA-106a表达能通过调控宫颈癌细胞PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控其细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导癌细胞细胞周期停滞,抑制miRNA-106a表达可能是胃癌患者治疗的新靶点之一。

多发性骨髓瘤细胞系中ANGPT1/2基因的表达

目的检测ANGPT1/2基因在多发性骨髓瘤细胞系中的表达。方法应用实时荧光定量(RQ)-PCR方法检测两种多发性骨髓瘤细胞株U266和P3X63Ag653(653)中ANGPT1/2的表达。结果以人脐静脉内皮细胞为对照,ANGPT1在U266和653中的表达升高,与人脐静脉内皮细胞相比差异无统计学意义。ANGPT2在U266中表达降低,与人脐静脉内皮细胞相比差异无统计学意义;而ANGPT2在653中明显高表达,与人脐静脉内皮细胞相比差异有统计学意义。结论应用RQ-PCR检测ANGPT1/2在2株多发性骨髓瘤细胞系中表达,为下一步在体内外研究ANGPT-TIE在多发性骨髓瘤中的作用机制奠定基础。

VEGF抑制剂阿西替尼对人胃癌细胞周期及凋亡的影响

目的研究VEGF抑制剂阿西替尼(Axitinib)对人胃癌细胞AGS细胞周期和凋亡的影响。方法采用流式细胞仪检测0μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L的阿西替尼作用AGS细胞24 h后对细胞周期的影响;采用同样方法检测该药对AGS细胞凋亡的影响。结果阿西替尼将AGS细胞抑制在G2/M期,并呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。阿西替尼引起AGS细胞的凋亡,随着给药浓度增加,AGS细胞凋亡率也随之增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿西替尼通过把胃癌AGS细胞阻滞在G2/M期而抑制细胞的增殖,并促进胃癌AGS细胞凋亡。

miR-144在胃癌细胞系AGS中的表达及与KLF12表达相关性

目的研究miR-144在胃癌细胞系AGS中的表达及与KLF12表达的相关性。方法应用RPMI1640培养液培养人胃癌细胞系AGS和正常胃上皮细胞系GES-1,应用qRT-PCR法检测两种细胞系中miR-144的表达,qRT-PCR和Western blot法检测KLF12的表达;在AGS细胞系中分别转染miR-144模拟物和miR-144抑制物,qRT-PCR法检测miR-144的表达,qRT-PCR和Westernblot法检测KLF12的表达。通过在线预测工具(TargetscanHuman 7.2,micro RNA.org,miRDB)预测KLF12是否为miR-144的靶基因。结果miR-144在AGS细胞系表达水平低于GES-1细胞系,而KLF12在AGS细胞系表达水平高于GES-1细胞系。AGS细胞miR-144模拟物组,miR-144的表达水平明显升高,KLF12则下降;miR-144抑制剂组中,miR-144的表达水平明显降低,而KLF12则升高。在线预测网站预测结果显示,在KLF12基因的3’UTR区域,有三处miR-144的结合位点。结论miR-144在胃癌AGS细胞系的表达与KLF12的表达呈负相关,miR-144可能通过作用于KLF12的3’UTR区域影响其表达。

丝裂原活化蛋白激酶激酶1在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶激酶1(MAP2K1)在胃癌中的表达及其临床意义。方法免疫组织化学及Western blotting检测MAP2K1在胃癌组织和细胞中蛋白水平的表达;免疫荧光染色观察细胞形态及MAP2K1的表达位置;StarBase及Oncomine数据库对MAP2K1进行数据挖掘,分析MAP2K1 mRNA在胃癌组织中的表达情况;UALCAN数据库分析MAP2K1 mRNA的表达与临床病理特征的相关性;Kaplan Meier-Plotter在线分析工具进行生存分析;GEPIA2数据库挖掘MAP2K1与胃癌干细胞相关因子和耐药相关因子的关系。结果免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting结果表明,在胃癌组织和细胞中MAP2K1蛋白为高表达,且MAP2K1表达在胃癌细胞质中。由多种数据库分析得出,MAP2K1 mRNA在胃癌组织的表达量高于正常胃组织,其表达量与胃癌分期、分级、淋巴结转移和患者性别密切相关,MAP2K1高表达组的胃癌患者总体生存率明显低于低表达组,其原因可能与胃癌干细胞特性和耐药性相关。结论MAP2K1在胃癌中高表达,其表达水平可能通过调控干细胞相关因子与耐药相关因子影响患者不良预后。MAP2K1或可成为判断胃癌患者预后的新型诊断标志物。

miR-596在胃癌组织中的表达和临床意义

为了研究micro RNA-596（miR-596）在人胃癌组织中的表达情况和临床意义。本研究选用80例癌症患者,通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测技术,比较miR-596在胃癌组织以及相对应的癌旁组织中的miR-596含量差异,并分析其表达水平与胃癌患者临床病例特征的相关性。此外还通过CCK-8实验和Transwell穿孔实验比较正常胃癌细胞系AGS和转染过表达miR-596的AGS细胞的增殖水平和侵袭能力。发现通过CCK-8实验检测细胞的增殖水平,使用Transwell穿孔实验检测细胞的侵袭能力。相比于癌旁组织,miR-596在胃癌组织中的表达量显著降低（p〈0.05）。miR-596的表达量与患者的淋巴结是否转移（p〈0.05）、癌组织大小和TNM分期这几个因素具有显著相关,而与患者的年龄、性别、分化程度这几个因素无显著相关性。与阴性对照组细胞相比,AGS转染了miR-596 mimics后,细胞增殖能力显著下降（p〈0.01）,同时细胞的侵袭能力显著降低（p〈0.01）。说明miR-596在胃癌组织中具有非常重要的作用,且与患者的不良临床病理特征相关。过表达miR-596可以抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力,从而达到抑制胃癌发展的效果,该发现对于胃癌的早期诊断和预后估计以及制定更加有效的手术方案均具有较大的临床意义,此外还可为进一步研究miR-596靶向药物的研究与开发奠定理论基础。