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拟南芥细胞膜质子泵对硝酸盐吸收利用的影响
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作者 潘婷 张雅琳 +4 位作者 周博阳 成元 喻敏 张茂星 朱毅勇 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期666-676,共11页
[目的]硝态氮(NO_(3)^(-)-N)是多数植物吸收利用的主要氮素形态之一,NO_(3)^(-)-N的跨膜运输需要耦合质子共转运,质子运转需要细胞膜上的质子泵提供质子驱动力。本研究通过分析拟南芥细胞膜质子泵AHA1和AHA2对硝态氮吸收的信号网络,以... [目的]硝态氮(NO_(3)^(-)-N)是多数植物吸收利用的主要氮素形态之一,NO_(3)^(-)-N的跨膜运输需要耦合质子共转运,质子运转需要细胞膜上的质子泵提供质子驱动力。本研究通过分析拟南芥细胞膜质子泵AHA1和AHA2对硝态氮吸收的信号网络,以明确硝态氮吸收过程中的分子调控机制。[方法]以野生型Col-0、质子泵基因突变体aha1-9、aha2-5以及恢复系AHA1/aha1-9、AHA2/aha2-5为试验材料,在不同NO_(3)^(-)-N浓度(1、10和20mmol/L)培养基上培养10天,观察其表型,记录根系生长以及生物量变化,测定根系细胞膜质子泵蛋白及其磷酸化水平变化,检测根系中参与NO_(3)^(-)-N响应与转运相关基因(NRT1.1、NRT2.1、NRT2.2、NRT2.4和NLP7)和生长素响应与转运相关基因(ARF11、IAA6、PIN7和SAUR57)的相对表达量。[结果]20 mmol/L NO_(3)^(-)-N处理下各材料之间的生长无显著差异。在1和10 mmol/L NO_(3)^(-)-N条件下,与野生型相比,aha1-9和aha2-5的主根长度、侧根数量、根部和地上部生物量均显著降低。1 mmol/L NO_(3)^(-)-N时,aha1-9的上述指标与野生型的差异显著大于aha2-5。恢复系AHA1/aha1-9、AHA2/aha2-5在各个NO_(3)^(-)-N供应水平下均与野生型差异不显著。通过分离根系细胞膜发现,在1、10 mmol/L NO_(3)^(-)-N条件下,相比野生型,aha1-9和aha2-5的细胞膜质子泵蛋白水平分别降低了68%、19%和36%、53%,质子泵蛋白磷酸化水平分别降低了83%、43%和16%、42%;在20 mmol/L NO_(3)^(-)-N条件下,aha1-9和aha2-5的质子泵蛋白水平与野生型差异不显著,但磷酸化水平显著降低。通过RT-qPCR测定发现,在1 mmol/L NO_(3)^(-)-N条件下,aha1-9、aha2-5根系中的NRT1.1、NRT2.1、NRT2.2、NLP7表达量相比野生型显著下调,10和20 mmol/L NO_(3)^(-)-N条件下均没有显著差异。此外,在1和10 mmol/L NO_(3)^(-)-N条件下aha1-9、aha2-5中的ARF11、IAA6、PIN7和SAUR57表达量显著上调,然而在20 mmol/L NO_(3)^(-)-N条件下其表达量没有显著差异。[结论]低氮条件下,敲除细胞膜质子泵基因不仅降低其自身蛋白的合成和磷酸化水平,同时也影响硝酸盐转运蛋白基因和生长素相关基因的表达,进而抑制植物的生长。 展开更多
关键词 拟南芥 硝酸盐 细胞膜质子泵 AHA1 aha2
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拟南芥AHA2基因的生物信息学分析
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作者 靳娟 鲁晓燕 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2014年第1期73-78,共6页
利用生物信息学方法对拟南芥AHA2(H+-ATPase 2)基因编码蛋白的理化性质、保守结构域、疏水性/亲水性、信号肽、跨膜结构域、磷酸化修饰、二级结构和系统进化等进行了预测和分析。结果表明:AHA2属于拟南芥H+-ATPase家族成员;拟南芥AHA2... 利用生物信息学方法对拟南芥AHA2(H+-ATPase 2)基因编码蛋白的理化性质、保守结构域、疏水性/亲水性、信号肽、跨膜结构域、磷酸化修饰、二级结构和系统进化等进行了预测和分析。结果表明:AHA2属于拟南芥H+-ATPase家族成员;拟南芥AHA2基因编码的蛋白与荠菜的亲缘关系最近,具有较高的相似性。本研究的结果将为进一步研究其生物学功能提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 拟南芥 aha2 生物信息学
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重组植物AHA2蛋白的真核表达及纯化
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作者 吴兴翰 陈敏 李硕 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1119-1124,共6页
AHA2蛋白位于植物细胞质膜上,该蛋白在原核蛋白表达体系中无法重组表达.已经报道的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系操作复杂,成本高昂.本文将拟南芥aha2基因(全长2984bp)插入真核表达载体pPICZαA中,线性化质粒pPICZαA-ah... AHA2蛋白位于植物细胞质膜上,该蛋白在原核蛋白表达体系中无法重组表达.已经报道的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系操作复杂,成本高昂.本文将拟南芥aha2基因(全长2984bp)插入真核表达载体pPICZαA中,线性化质粒pPICZαA-aha2,电转化毕赤酵母X33细胞,通过同源重组获得工程菌.以0.5%甲醇诱导表达72h后,收获细胞.冷冻研磨细胞,离心并收集上清进行亲和层析和分子筛纯化.SDS-PAGE分析结果显示,目的蛋白为97kD的条带.本研究成功的在毕赤酵母X33细胞中实现了拟南芥AHA2蛋白的表达和纯化. 展开更多
关键词 aha2 基因克隆 重组蛋白表达 蛋白纯化
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CCaP1/CCaP2/CCaP3 interact with plasma membrane H^(+)-ATPases and promote thermoresponsive growth by regulating cell wall modification in Arabidopsis
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作者 Jing-Jing Wang Juan Gao +1 位作者 Wei Li Jian-Xiang Liu 《Plant Communications》 SCIE CSCD 2024年第7期90-105,共16页
Arabidopsis plants adapt to warm temperatures by promoting hypocotyl growth primarily through the basic helix-loop-helix transcription factor PIF4 and its downstream genes involved in auxin responses,which enhance cel... Arabidopsis plants adapt to warm temperatures by promoting hypocotyl growth primarily through the basic helix-loop-helix transcription factor PIF4 and its downstream genes involved in auxin responses,which enhance cell division.In the current study,we discovered that cell wall-related calcium-binding protein 2(CCaP2)and its paralogs CCaP1 and CCaP3 function as positive regulators of thermo-responsive hypocotyl growth by promoting cell elongation in Arabidopsis.Interestingly,mutations in CCaP1/CCaP2/CCaP3 do not affect the expression of PIF4-regulated classic downstream genes.However,they do noticeably reduce the expression of xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase genes,which are involved in cell wall modification.We also found that CCaP1/CCaP2/CCaP3 are predominantly localized to the plasma membrane,where they interact with the plasma membrane H^(+)-ATPases AHA1/AHA2.Furthermore,we observed that vanadate-sensitive H^(+)-ATPase activity and cell wall pectin and hemicellulose contents are significantly increased in wild-type plants grown at warm temperatures compared with those grown at normal growth temperatures,but these changes are not evident in the ccap1-1 ccap2-1 ccap3-1 triple mutant.Overall,our findings demonstrate that CCaP1/CCaP2/CCaP3 play an important role in controlling thermo-responsive hypocotyl growth and provide new insights into the alternative pathway regulating hypocotyl growth at warm temperatures through cell wall modification mediated by CCaP1/CCaP2/CCaP3. 展开更多
关键词 AHA1/aha2 CCaP1/CCaP2/CCaP3 cell wall modification hypocotyl growth thermomorphogenesis warm temperature
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