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自噬相关基因在HIV/AIDS肺脾气虚证中的表达及意义
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作者 王娟 张淼 +4 位作者 潘万旗 陈晓宇 马素娜 谢世平 许前磊 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 2024年第9期1540-1544,共5页
目的探讨自噬相关基因在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)/艾滋病(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)肺脾气虚证中的表达及意义。方法选取河南驻马店市20例HIV/AIDS肺脾气虚证患者作为研究对象,同地区20例... 目的探讨自噬相关基因在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)/艾滋病(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)肺脾气虚证中的表达及意义。方法选取河南驻马店市20例HIV/AIDS肺脾气虚证患者作为研究对象,同地区20例健康人为对照,HIV/AIDS肺脾气虚证患者用益艾康胶囊进行干预治疗。采用基因芯片技术,检测分析两组人群外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中自噬相关基因的表达。结果HIV/AIDS肺脾气虚证组患者中DDIT4、IRS2、CXCR4表达下调,PDPK1表达上调,经益艾康治疗后差异基因发生转归,差异有统计学意义(P<0.05)。应用KEGG分析发现DDIT4、CXCR4、PDPK1、IRS2与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PI3K/PKB,又称Akt/mTOR)信号通路相关。结论HIV/AIDS肺脾气虚证人群中自噬相关基因差异表达,益艾康可能通过调节DDIT4、CXCR4、IRS2的表达影响HIV/AIDS肺脾气虚证患者的自噬过程。 展开更多
关键词 艾滋病 肺脾气虚证 自噬 基因
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Application of the New Gene Gm6 Against Rice GallMidge in Resistance Breeding Through PCR-BasedMarker Aided Selection 被引量:1
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作者 LIHong XIEZhen-wen +7 位作者 ZHOUShao-chuan S.K.Katiyar S.Constantino J.Bennett HUANGBing-chao XIAOHan-xiang LULi-hua ZHANGYang 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2003年第8期875-880,共6页
The research results of marker aided selection(MAS)for resistant varieties and lines against rice gall midge Orseolia oryzae Wood-Mason successfully in 1999 - 2002 were reported in the present paper. The molecular mar... The research results of marker aided selection(MAS)for resistant varieties and lines against rice gall midge Orseolia oryzae Wood-Mason successfully in 1999 - 2002 were reported in the present paper. The molecular markers linked to the gene Gm6 against rice gall midge were used to select and breed the resistant varieties and lines. The RAPD marker OPM06 was used to verify the existence actually of gene Gm6 in ten developed varieties resistant to gall midge such as Duokang1, Duokang2, Kangwen2, Kangwen3, Kang-wen5, Duokangzaozhan, Kangwenqinzhan, which were derived from Daqiuqi. For resistance breeding through PCRbased marker aided selection(MAS), the polymorphisms in the resistant and susceptible parents were i-dentified by RG476/Alu I and RG476/Sca I respectively. The RAPD marker OPM06(1.4 kb)was used to i-dentify 15 new resistance lines from F3 lines of Fengyinzhan1/Daqiuqi in 1999. 21 and 7 resistance lines were selected from F4 and F6 lines of KWQZ/Gui99(restored line of hybrid rice)using RG476/Alu I in 2000-2001 respectively. The Gm6 gene was transferred into the restored line of hybrid rice. In 2001 - 2002, RG214/ Hha I and G214/Sca I were used for selecting 11 and 5 resistance lines from F3 lines of KWQZ/IR56 and AXZ/KWQZ successfully. The application of the resistance gene through PCR-based marker aided selection is a new and effective approach in resistance breeding. 展开更多
关键词 RICE Rice gall midge Orseolia oryzae Wood-Mason Insect resistance gene Gm6 Marker aided selection(MAS)
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T-SPOT.TB、Gene Xpert MTB/RIF检测技术在AIDS/TB人群中的诊断价值 被引量:8
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作者 姚正钢 陈勇毅 蓝梦颖 《中国卫生标准管理》 2021年第12期75-78,共4页
目的探讨结核感染T细胞检测(tuberculosis T cell spot detection, T-SPOT.TB)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Gene Xpert MTB/RIF)在艾滋病(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)合并继发性肺结核(tuberculosis,TB)人群... 目的探讨结核感染T细胞检测(tuberculosis T cell spot detection, T-SPOT.TB)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Gene Xpert MTB/RIF)在艾滋病(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)合并继发性肺结核(tuberculosis,TB)人群中的诊断价值。方法选取2019年1月—2020年9月在我院进行就诊的疑似肺结核患者323例资料进行分析,所有纳入病例均进行T-SPOT.TB、Gene Xpert MTB/RIF、痰涂片找抗酸杆菌、痰结核菌培养、抗HIV、CD4+淋巴细胞检查。以临床诊断结果为参考标准,比较T-SPOT.TB、Gene Xpert MTB/RIF、痰涂片、痰培养在艾滋病合并继发性肺结核人群中诊断的敏感性、特异性。结果综合临床症状、实验室检查及影像学检查结果,将符合条件的患者分两组:艾滋病合并继发性性肺结核(AIDS/TB)组77例,继发性肺结核(TB)组132例,比较2组患者T-SPOT.TB、Gene Xpert MTB/RIF、痰涂片、痰培养的敏感性、特异性。AIDS/TB组与TB组在T-SPOT.TB、Gene Xpert MTB/RIF、痰涂片检测阳性率方面差异无统计学意义,两组患者痰培养阳性率差异有统计学意义(P <0.05)。T-SPOT.TB诊断艾滋病合并继发性肺结核中检测的敏感性和特异性分别为79.22%、89.29%,Gene Xpert MTB/RIF诊断艾滋病合并继发性肺结核中检测的敏感性和特异性分别为54.55%、100%。不同CD4^(+)T淋巴细胞计数患者T-SPOT.TB、Gene Xpert阳性率差异无统计学意义。结论 T-SPOT.TB、Gene Xpert MTB/RIF在艾滋病合并继发性肺结核的早期诊断中有一定的诊断价值。 展开更多
关键词 结核感染T细胞检测 gene Xpert MTB/RIF 艾滋病 肺结核 检测技术 诊断
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牛早期胚胎发育中AID基因的表达及其调节区DNA甲基化的动态变化 被引量:1
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作者 奥旭东 萨如拉 +2 位作者 王杰 王会敏 于海泉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期242-249,共8页
以具有DNA主动去甲基化作用的活化诱导胞苷脱氨酶(Activation-induced cytidine deaminase,AID,亦称为AICDA)基因为研究对象,检测其在牛卵母细胞及体外受精胚胎发育不同阶段的表达变化及其调节方式,揭示细胞重编程分子机制。应用Real-ti... 以具有DNA主动去甲基化作用的活化诱导胞苷脱氨酶(Activation-induced cytidine deaminase,AID,亦称为AICDA)基因为研究对象,检测其在牛卵母细胞及体外受精胚胎发育不同阶段的表达变化及其调节方式,揭示细胞重编程分子机制。应用Real-time PCR、BSP(Bisulfite Sequencing PCR)和免疫荧光化学等方法分析DNA甲基化对牛早期胚胎发育中AID基因表达的影响。结果显示,AID基因在牛早期胚胎发育中受DNA甲基化的调控,AID基因的T-DMR(tissue-dependent and differentially methylated region)位于其转录起始位点-88 bp--431 bp。在牛卵母细胞成熟过程中,T-DMR第2和第3号Cp G位点的DNA甲基化明显去除,而其他位点都未发生变化。卵母细胞在成熟过程中AID基因的积累与DNA甲基化状态变化相关。在牛体外受精胚发育早期的各阶段,尽管AID基因的表达不同,但AID基因T-DMR除第2和第3号CpG位点一直都维持去甲基化状态外,其他位点始终维持甲基化状态。推测其表达的变化可能是胚胎基因组激活有关。以上研究表明,AID基因T-DMR的低甲基化与其表达存在一定的相关性。通过免疫荧光检测发现,从卵母细胞成熟期到桑椹胚期,AID蛋白都是均匀分布于细胞核和细胞质中。而囊胚时期大量AID蛋白集中于内细胞团,这可能对于内细胞团多能性的维持起重要作用。综上所述,牛卵母细胞成熟中积累的AID作用于受精过程,其启动子区的DNA去甲基化与AID基因的表达有关,胚胎基因组激活后AID基因的表达可能与胚胎发育有关。 展开更多
关键词 aid基因 牛体外受精胚胎 DNA甲基化
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江苏省抗病毒治疗失败HIV/AIDS患者耐药情况及基因型分析 被引量:9
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作者 卢静 周莹 +4 位作者 徐晓琴 张之 胡海洋 傅更锋 还锡萍 《江苏预防医学》 CAS 2016年第4期388-391,共4页
目的分析江苏省经抗病毒治疗失败人类免疫缺陷病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)HIV基因型耐药发生情况及特点。方法收集截至2013年12月底,治疗时间超过1年、年龄≥18岁、病毒载量≥1 000copy/mL的HIV/AIDS患者血样,采用实验室自建In-ho... 目的分析江苏省经抗病毒治疗失败人类免疫缺陷病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)HIV基因型耐药发生情况及特点。方法收集截至2013年12月底,治疗时间超过1年、年龄≥18岁、病毒载量≥1 000copy/mL的HIV/AIDS患者血样,采用实验室自建In-house基因扩增HIV-1pol区并进行序列分析;拼接好的序列提交美国斯坦福大学HIV耐药数据库进行比对,分析耐药基因突变及药物耐受情况。结果共纳入HIV/AIDS患者343例,280例(81.6%)pol区扩增为阳性并测序成功。扩增阳性病例基因分型,以CRF01_AE亚型为主,占58.6%(164例)。其中52.5%(147例)检出耐药位点突变,针对核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、蛋白酶抑制剂(PIs)的耐药构成比分别为39.3%、49.6%和5.0%。针对NRTIs和NNRTIs的主要突变位点以M184V和Y181C/F/I、G190A、K103N为主,未发现针对PIs的主要位点突变,次要耐药位点突变主要为L33F、L10I。280例扩增阳性病例中,检出耐拉米夫定和耐恩曲他滨各102例(各占36.4%),耐依非韦伦133例(占47.5%),耐奈韦拉平136例(占48.6%)。结论江苏省高效抗逆转录病毒治疗失败HIV/AIDS患者耐药构成比较低,但多重耐药构成比较高。应加强随访管理,定期进行治疗效果评估、耐药检测和分析,减少耐药株的产生和传播。 展开更多
关键词 高效抗逆转录病毒治疗 人类免疫缺陷病毒 艾滋病 抗病毒治疗 基因检测 耐药性 治疗失败
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禽腺病毒血清4型实时荧光RAA检测方法的建立
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作者 张宗淑 李会会 +6 位作者 陈曦 李静 张子闯 时国强 翟向和 王春光 张铁 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第20期69-74,共6页
为了快速准确地诊断禽心包积液-肝炎综合征(hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS),试验根据禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)的六邻体(Hexon)基因保守序列设计特异性引物和探针,将重组酶介导等温核酸扩增技术(r... 为了快速准确地诊断禽心包积液-肝炎综合征(hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS),试验根据禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)的六邻体(Hexon)基因保守序列设计特异性引物和探针,将重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)与荧光探针结合,通过对反应条件(温度和时间)进化优化建立一种用于检测FAdV-4的实时荧光RAA方法,对该方法进行特异性、敏感性、重复性试验,并分别采用该方法、普通PCR方法和实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR)方法检测56份鸡肝脏样本,并计算该方法与其他两种方法的符合率。结果表明:建立的实时荧光RAA方法在40℃条件下反应15 min即可完成检测;仅可检测出FAdV-4,与禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)、传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)均无交叉反应,特异性较强;对FAdV-4的最低检测限为1×10~1拷贝/μL,是普通PCR方法的100倍,与RFQ-PCR方法相当,敏感性较高;重复性试验中的组内重复性试验和组间重复性试验的变异系数(coefficient of variation,CV)均小于10%,重复性良好;对56份临床样品进行检测,该方法与RFQ-PCR方法和普通PCR方法的符合率分别为100%、96.43%。说明成功建立了FAdV-4的实时荧光RAA检测方法,该方法操作简便、快速,特异性较强,敏感性较高,重复性良好,可用于HHS的早期诊断。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 心包积液-肝炎综合征 重组酶介导等温核酸扩增 荧光探针 六邻体基因
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电子信息技术在动物胚胎学研究中的应用
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作者 白旭 张琪 《动物医学进展》 北大核心 2024年第11期115-118,共4页
动物胚胎学是一门探讨动物胚胎发育过程、规律及其生物学意义的科学。利用电子信息技术可以更好地了解胚胎发育的规律和机制,从而更好地了解动物生殖生理过程,为动物不孕症等疾病的诊断和治疗提供依据,为动物遗传资源保护提供技术支持... 动物胚胎学是一门探讨动物胚胎发育过程、规律及其生物学意义的科学。利用电子信息技术可以更好地了解胚胎发育的规律和机制,从而更好地了解动物生殖生理过程,为动物不孕症等疾病的诊断和治疗提供依据,为动物遗传资源保护提供技术支持。动物胚胎学研究应用到的电子信息技术有计算机辅助成像技术、荧光成像技术、人工智能、激光共聚焦显微镜、基因测序技术、三维打印技术等,论文就这些电子信息技术在动物胚胎学研究中的应用进行了介绍。 展开更多
关键词 动物胚胎学 计算机辅助成像 人工智能 基因测序 三维打印
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HIV/AIDS湿热内蕴证炎症基因的研究进展 被引量:1
8
作者 李建智 张海燕 《中国中医药现代远程教育》 2015年第16期148-150,共3页
为了明确艾滋病湿热证炎症基因的研究方向,分别对炎症基因、湿热内蕴证炎症基因和艾滋病炎症基因三方面做一综述,通过查阅文献,对白介素类因子(IL-4、IL-6、IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)、淋巴细胞粘附因子1(SELL)... 为了明确艾滋病湿热证炎症基因的研究方向,分别对炎症基因、湿热内蕴证炎症基因和艾滋病炎症基因三方面做一综述,通过查阅文献,对白介素类因子(IL-4、IL-6、IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)、淋巴细胞粘附因子1(SELL)、血小板内皮细胞粘附分子(PECAM1)、集落刺激因子类(CSF1、CSF3)等基因进行总结,为中医证候的转录组学研究提供参考依据。 展开更多
关键词 炎症基因 转录组学 艾滋病 湿热内蕴证 综述
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HIV/AIDS患者γδ-T淋巴细胞受体基因多样性的特征研究 被引量:1
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作者 孙萌 刘颖 +5 位作者 王克林 孙刚 王笑红 翟志光 孙佩珠 王健 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1661-1664,共4页
目的:分析HIV/AIDS患者γδ-T细胞受体(TCR-!链)多态性特征。方法:运用多重引物PCR片段荧光分析技术,对HIV/AIDS患者(n=30)的γδ-T细胞受体(TCR-!链)进行基因重排分子测定,并与健康人群比较。结果:与健康人群比较,HIV/AIDS患者的γδ-... 目的:分析HIV/AIDS患者γδ-T细胞受体(TCR-!链)多态性特征。方法:运用多重引物PCR片段荧光分析技术,对HIV/AIDS患者(n=30)的γδ-T细胞受体(TCR-!链)进行基因重排分子测定,并与健康人群比较。结果:与健康人群比较,HIV/AIDS患者的γδ-T细胞受体(TCR-!链)基因呈现单一化重组表达,其表面标志物受体的多样性出现损害。结论:HIV/AIDS患者γδ-T细胞受体TCR-!链基因多态性变化,可以作为反映机体黏膜免疫系统状态的一个药物疗效评价指标,该技术的运用为中医药治疗HIV/AIDS患者免疫系统缺陷疾病的疗效评价提供了新的方法手段。 展开更多
关键词 HIV/aidS γδ-T细胞 TCR-γ链基因多态性
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核酶与AIDS治疗 被引量:3
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作者 张丽娜 姜凤超 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期106-115,共10页
艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染并破坏人体免疫功能所导致的一种综合症.作为具有核酸内切酶活性的RNA小分子,核酶能特异性结合及切割HIV病毒靶分子,并促进靶分子mRNA的裂解,且能相继与多个靶分子RNA作用,同时又不影响宿主细胞... 艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染并破坏人体免疫功能所导致的一种综合症.作为具有核酸内切酶活性的RNA小分子,核酶能特异性结合及切割HIV病毒靶分子,并促进靶分子mRNA的裂解,且能相继与多个靶分子RNA作用,同时又不影响宿主细胞RNA.利用核酶治疗艾滋病不仅没有化疗药物常见的副作用,而且由于核酶本身具有RNA剪切酶活性,可同时剪切HIVmRNA和HIV生命过程中重要的调节蛋白mRNA.因此,较其它基因疗法如RNAi、DNAdecoy等,更能有效地抑制HIV复制,并且对由HIV变异而导致的耐药病毒株同样有效,同时对病毒突变的诱导作用也较其它抗病毒药物低.因此,在抗AIDS基因治疗研究中具有潜在的应用价值.本文在对核酶的结构、催化作用机制及其对HIV-1的作用机制进行概述的基础上,重点讨论了近年来核酶作用于HIV的研究进展以及对AIDS治疗的应用前景. 展开更多
关键词 艾滋病 核酶 抗HIV-1 基因治疗
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Effect of HIV-1 Tat on Secretion of TNF-α and IL-1β by U87 Cells in AIDS Patients with or without AIDS Dementia Complex 被引量:5
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作者 ZHAO Li PU Shuang Shuang +5 位作者 GAO Wen Hua CHI Yuan Yuan WEN Hong Ling WANG Zhi Yu SONG Yan Yan YU Xue Jie 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2014年第2期111-117,共7页
Objective To explore the role of HIV-1 tat gene variations in AIDS dementia complex (ADC) pathogenesis. Methods HIV-1 tat genes derived from peripheral spleen and central basal ganglia of an AIDS patient with ADC an... Objective To explore the role of HIV-1 tat gene variations in AIDS dementia complex (ADC) pathogenesis. Methods HIV-1 tat genes derived from peripheral spleen and central basal ganglia of an AIDS patient with ADC and an AIDS patient without ADC were cloned for sequence analysis. HIV-1 tat gene sequence alignment was performed by using CLUSTAL W and the phylogentic analysis was conducted by using Neighbor-joining with MEGA4 software. All tat genes were used to construct recombinant retroviral expressing vector MSCV-IRES-GFP/tat. The MSCV-IRES-GFP/tat was cotransfected into 293T cells with pCMV-VSV-G and pUMVC vectors to assemble the recombinant retrovirus. After infection of gliomas U87 cells with equal amount of the recombinant retrovirus, TNF-α, and IL-1β concentrations in the supernatant of U87 cells were determined with ELISA. Results HIV-1 tat genes derived from peripheral spleen and central basal ganglia of the AIDS patient with ADC and the other one without ADC exhibited genetic variations. Tat variations and amino acid mutation sites existed mainly at Tat protein core functional area (38-47aa). All Tat proteins could induce ug7 cells to produce TNF-α and IL-1β, but the level of IL-1β production was different among Tat proteins derived from the ADC patient's spleen, basal ganglia, and the non-ADC patient's spleen. The level of Tat proteins derived from the ADC patient's spleen, basal ganglia, and the non-ADC patient's spleen were obviously higher than that from the non-ADC patient's basal ganglia. Conclusion Tat protein core functional area (38-47aa) may serve as the key area of enhancing the secretion of IL-1β. This may be related with the neurotoxicity of HIV-1 Tat. 展开更多
关键词 Key words: HIV-1 tat gene aidS dementia complex Cytokines TNF-Α IL-1Β NEUROTOXICITY
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应用基因芯片技术快速鉴定AIDS合并分枝杆菌感染及结核耐药分析 被引量:2
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作者 谢祺 杨翠先 +4 位作者 樊红丽 李正伦 姚之莹 罗兰芳 董兴齐 《检验医学与临床》 CAS 2017年第A01期151-155,共5页
目的 探讨基因芯片技术在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)合并分枝杆菌感染诊断中的临床应用.方法 应用基因芯片技术对AIDS合并分枝杆菌感染者标本进行分枝杆菌种属鉴定,同时对鉴定为结核分枝杆菌的标本进行利福平及异烟肼耐药基因检测.结... 目的 探讨基因芯片技术在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)合并分枝杆菌感染诊断中的临床应用.方法 应用基因芯片技术对AIDS合并分枝杆菌感染者标本进行分枝杆菌种属鉴定,同时对鉴定为结核分枝杆菌的标本进行利福平及异烟肼耐药基因检测.结果 本研究共纳入136例分枝杆菌病例,其中57例为AIDS合并分枝杆菌感染者的实验组,79例同期非HIV感染的分枝杆菌感染者为对照组.实验组结核分枝杆菌(MTB)检出率为78.9%(45/57),非结核分枝杆菌(NTM)检出率为21.1%(12/57)(其中鸟分枝杆菌10例、偶然分枝杆菌1例、癗疠分枝杆菌1例);对照组MTB检出率为96.2%(76/79),NTM检出率为3.8%(3/79)(其中鸟分枝杆菌2例、龟/脓肿分枝杆菌1例).实验组NTM感染率高于对照组(P〈0.05),且主要以鸟分枝杆菌(MAC)感染为主.进一步对鉴定为MTB的标本进行耐利福平(RIF)基因rpoB及耐异烟肼(INH)基因katG、inhA检测.实验组45例MTB阳性样本总耐药率为15.6%(7/45),其中RIF和INH共同耐药8.9%(4/45)、单耐RIF2.2%(1/45)、单耐INH4.4%(2/45);对照组76例MTB阳性样本,总耐药率为31.6%(24/76),其中RIF和INH共同耐药21.1%(16/76)、单耐RIF5.3%(4/76)、单耐INH5.3%(4/76).两组比较耐药率无明显差异.结论 基因芯片技术对AIDS合并分枝杆菌感染快速诊断及结核耐药性分析方面中具有重要价值,为临床制定合理治疗方案提供了科学依据. 展开更多
关键词 基因芯片技术 获得性免疫缺陷综合征 分枝杆菌
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Brown Planthopper Resistance Genes in Rice:from Germplasm to Breeding 被引量:1
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作者 G.C. He 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第2期175-176,共2页
The brown planthopper (BPH), Nilaparvata lugens Stal (Homoptera: Delphacidae), is one of the most destructive and widespread insect pests of rice (Oryza sativa) that can be found throughout the rice-growing areas
关键词 植物漏斗 稻子 种植 育种
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猪流行性腹泻病毒RAA-CRISPR/Cas13a检测方法的建立与初步应用
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作者 刘华 殷冬冬 +7 位作者 邵颖 宋祥军 王振宇 潘孝成 涂健 何长生 朱良强 祁克宗 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3991-3997,共7页
将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术相结合,即RAA-Cas13a,建议建立高效、灵敏、特异的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PE... 将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术相结合,即RAA-Cas13a,建议建立高效、灵敏、特异的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法。针对PEDV N基因保守区设计RAA特异性引物和CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a荧光检测,以RT-qPCR为对照方法,评价该方法的灵敏度、特异性及与RT-qPCR法的一致性。结果表明,该方法最低可检测至101 copies·μL^(-1),且与猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪伪狂犬病病毒等常见猪源病原核酸检测无交叉反应。采用RAA-Cas13a检测40份临床样本与RT-qPCR方法阳性符合率为100%,阴性符合率为84.6%,总符合率为95%,Kappa值为0.881。本研究建立的RAA-Cas13a方法灵敏度高、特异性强,为PEDV的临床诊断和流行病学监测提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 CRISPR/Cas13a 重组酶辅助扩增 N基因 检测
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金华市抗病毒治疗失败HIV/AIDS病例HIV-1亚型及耐药分析
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作者 吴斌 方琼楼 朱珂 《预防医学》 2024年第6期506-509,共4页
目的了解浙江省金华市抗病毒治疗失败的艾滋病病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)HIV-1亚型及耐药情况,为完善艾滋病抗病毒治疗策略提供依据。方法收集2023年1月1日—11月30日抗病毒治疗失败(治疗时间>6个月且病毒载量≥1000 copies/... 目的了解浙江省金华市抗病毒治疗失败的艾滋病病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)HIV-1亚型及耐药情况,为完善艾滋病抗病毒治疗策略提供依据。方法收集2023年1月1日—11月30日抗病毒治疗失败(治疗时间>6个月且病毒载量≥1000 copies/mL)的HIV/AIDS病例血浆样本128份,经核酸提取扩增后,采用一代测序法测定HIV-1 pol基因,将序列导入美国斯坦福大学HIV耐药数据库,分析HIV-1基因亚型、耐药突变及耐药情况。结果成功获取118例HIV/AIDS病例的序列,男性94例,女性24例,男女比为3.9∶1;年龄40~<60岁53例,占44.92%;主要经异性性接触感染,92例占77.97%。HIV-1亚型以CRF07_BC和CRF01_AE亚型为主,分别45例和39例,占38.14%和33.05%。75例发现耐药位点突变,突变率为63.56%;突变位点以M184和K103为主,突变率分别为29.66%和28.81%。对≥1种药物耐药58例,耐药率为49.15%;对非核苷酸类反转录酶抑制剂(NNRTI)、核苷酸类反转录酶抑制剂(NRTI)和蛋白酶类抑制剂(PI)的耐药率分别为50.00%、33.90%和4.24%。结论金华市抗病毒治疗失败HIV/AIDS病例HIV-1基因亚型主要为CRF07_BC和CRF01_AE,主要对NNRTI和NRTI耐药。 展开更多
关键词 抗病毒治疗 艾滋病 基因亚型 耐药
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非洲猪瘟病毒可视化重组酶辅助扩增检测方法的建立与初步应用 被引量:2
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作者 岳怀宁 李艳蕊 +6 位作者 张亚楠 苏恺 袁晨 逯纪成 孙泰然 薛文阁 宋勤叶 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期19-25,共7页
为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系... 为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系和扩增条件;检测建立的可视化RAA方法的特异性和灵敏性,分析建立方法与非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒对临床样品检测结果的符合率。结果显示,建立的可视化RAA方法的反应体系为25μL,在38℃恒温条件下反应20 min即可在5 min内读取结果;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等均不发生交叉反应;单个反应可检测到48.75拷贝的病毒核酸。初步临床应用结果显示,建立的可视化RAA方法与商品化的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒检测结果一致,其阴性和阳性符合率均为100%。本试验成功建立的基于ASFV B646L基因的可视化恒温扩增方法具有反应时间短、特异性和灵敏度高、操作便捷等优势,适合现场快速检测和诊断,具有进一步开发潜力。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 B646L基因 重组酶辅助扩增技术 可视化 核酸检测试纸条
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腺相关病毒介导锌指核酸酶体外切除HIV-1基因组研究
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作者 梁智铭 杨辛毅 +8 位作者 王亚楠 王菁 沈晓婷 潘浛雨 杨金龙 陆盼盼 赵琳 梁玥 朱焕章 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期753-764,共12页
人类免疫缺陷病毒1型(Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV-1)能够整合到宿主细胞基因组并通过基因沉默的方式逃避高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antietroviral Therapy,HAART),而高效特异性的基因编辑工具的出现,有望成功切... 人类免疫缺陷病毒1型(Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV-1)能够整合到宿主细胞基因组并通过基因沉默的方式逃避高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antietroviral Therapy,HAART),而高效特异性的基因编辑工具的出现,有望成功切除HIV-1前病毒基因组。重组腺相关病毒(AAV)是基因治疗的重要载体系统,为了获得能够高效感染T细胞的基因编辑工具递送系统,本研究通过比较过表达增强绿色荧光蛋白的血清型2、血清型6、血清型DJ的重组腺相关病毒,筛选出T细胞系的偏好血清型为6型。通过比较CMV启动子、SFFV启动子,筛选出T细胞系的偏好启动子为SFFV启动子。最后,我们通过制备过表达靶向HIV-1长末端重复序列(Long Terminal Region,LTR)的锌指核酸酶(Zinc Finger Nuclease,ZFN)的AAV6递送载体系统,感染模拟HIV-1阳性表达的细胞系Ya,T7E1检测证实HIV-1前病毒基因组被特异性切除,流式细胞仪检测证实切除效率约为17.1%,测序分析进一步证实靶向HIV-1 LTR的ZFN能介导从细胞基因组中切除HIV-1前病毒基因组。实验证明,6型重组腺相关病毒递送靶向HIV-1 LTR的ZFN能有效切除HIV-1前病毒基因组,为该系统未来的体内应用奠定了基础。 展开更多
关键词 基因编辑工具 人类免疫缺陷病毒1型 获得性免疫缺陷综合征 锌指核酸酶 腺相关病毒
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“免疫艾滋病基因编辑婴儿”的问题与危害 被引量:25
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作者 史宣玲 张林琦 《医学与哲学》 2019年第2期12-15,共4页
免疫艾滋病基因编辑婴儿的临床试验,试图通过基因编辑胚胎的方法,针对病毒进入细胞所需要的受体CCR5基因定点修饰,使婴儿达到抵抗艾滋病病毒的功效。目前母婴阻断艾滋病感染的技术已非常成熟,可有效使新生儿免于病毒感染。而CCR5在人体... 免疫艾滋病基因编辑婴儿的临床试验,试图通过基因编辑胚胎的方法,针对病毒进入细胞所需要的受体CCR5基因定点修饰,使婴儿达到抵抗艾滋病病毒的功效。目前母婴阻断艾滋病感染的技术已非常成熟,可有效使新生儿免于病毒感染。而CCR5在人体免疫细胞行使功能过程中具有关键作用,对健康胚胎实施CCR5基因编辑,会直接导致不可逆的突变和后代遗传的严重后果,长期安全性和危害无法预测。因此,必须严格禁止以生殖为目的的针对人类健康受精卵和胚胎基因修饰编辑的研究,科研人员需要严格把握科学研究与伦理法规的基本底线,确保创新技术的安全性和有效性。 展开更多
关键词 艾滋病 基因编辑 CCR5 艾滋病病毒的母婴阻断
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江西省HIV-1基因序列流行特征分析 被引量:3
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作者 胡国良 易志强 +7 位作者 周小风 邢辉 汪国勋 李根保 马鹏飞 江小明 卢飞豹 邵一鸣 《中国艾滋病性病》 CAS 2005年第1期1-5,共5页
目的对江西省艾滋病病毒1型(HIV1)感染者进行基因亚型分析,了解HIV1的流行情况、亚型种类、毒株来源及其变异特征等,为政府部门预防控制决策提供技术资料。方法传统流行病学与分子流行病学相结合,对江西省27例HIV1感染者进行流行病学相... 目的对江西省艾滋病病毒1型(HIV1)感染者进行基因亚型分析,了解HIV1的流行情况、亚型种类、毒株来源及其变异特征等,为政府部门预防控制决策提供技术资料。方法传统流行病学与分子流行病学相结合,对江西省27例HIV1感染者进行流行病学相关因素分析和基因序列、系统进化树分析。结果江西省HIV1感染人群中流行的毒株主要为HIV1CRF01AE,占6897%(20/29),其次为泰国B(B’)、CRF07BC、C三种亚型。序列分析表明,20份样品与泰国代表株相近,与CRF01AETH90CM240平均基因距离为947±271;3份样品与我国BC重组代表株相近,与BC重组代表株(CRF07BCCN97C54A)平均基因距离为566±241;3份样品与BCNRL42相近,与代表株BCNRL42平均基因距离为502±103;1份样品与印度代表株(CIN95IN21068)相近,基因距离为1299。而与已知的其它亚型国际参考株间的平均基因距离都在20%以上。系统进化树分析表明,27份样品与其相应的亚型共享序列聚集在一起,并远离其它国际参考株。吸毒人群中几乎全为HIV1CRF01AE,组内基因距离293±140(n=13),经性传播的四种亚型均有。结论目前江西省HIV1感染者中流行毒株为CRF01AE、CRF07BC、泰国B(B′)、C四种亚型,以CRF01AE为主。CRF01AE主要在吸毒人群中传播,局部爆发或流行时间大约有2年半左右。 展开更多
关键词 艾滋病病毒1型 基因序列 分析
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宁夏男男性行为人群HIV-1感染者基因亚型及耐药分析 被引量:3
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作者 曹慜 杨东智 +2 位作者 吴忠兰 马学旻 詹军 《宁夏医学杂志》 CAS 2019年第1期12-14,共3页
目的了解宁夏男男性行为(MSM)人群HIV-1的流行亚型分布及耐药基因变异情况。方法采用方便抽样方法,抽取宁夏籍男男性行为人群HIV-1感染者共33份血浆标本,进行反转录/巢式PCR扩增HIV病毒的pol基因片段、DNA测序、亚型鉴定,并与国际HIV耐... 目的了解宁夏男男性行为(MSM)人群HIV-1的流行亚型分布及耐药基因变异情况。方法采用方便抽样方法,抽取宁夏籍男男性行为人群HIV-1感染者共33份血浆标本,进行反转录/巢式PCR扩增HIV病毒的pol基因片段、DNA测序、亚型鉴定,并与国际HIV耐药数据库进行比对分析。结果宁夏MSM人群HIV-1毒株总体上未见明显的区域聚集性,33例样本呈现4种基因亚型分布:CRF07_BC、CRF01_AE、B、CRF55_01B,优势毒株为CRF07_BC(66.67%)和CRF01_AE(18.18%)亚型。CRF07_BC亚型序列主要形成2个基因簇。发现7例耐药突变株,全部为原发耐药,5例产生NRTIs与NNRTIs交叉耐药。结论宁夏MSM人群HIV-1流行毒株亚型分布较复杂,重组型毒株已成为优势流行株。原发耐药发生率高,交叉耐药明显,暂未见传播耐药株。 展开更多
关键词 男男性行为人群 艾滋病 基因亚型 耐药性
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