姜黄素诱导恶性黑色素瘤细胞凋亡及对AIFM2基因表达的影响

目的明确姜黄素诱导恶性黑色素瘤细胞系A375凋亡的作用，探讨姜黄素作用机制。方法A375细胞系经5～20μmol／L姜黄素作用48h后，MTT法测定细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞凋亡；RT-PCR方法检测细胞AIFM2及p53mRNA的表达。结果0、5．0、10．0、20．0μmol／L姜黄素作用A375细胞48h后细胞增殖抑制率分别为1．1％±0．3％、14．9％±5．9％、21．6％±4．7％、41．5％±5．4％；凋亡所占的百分比分别为3．5％±1．8％、17．1％±7．8％、23．8％±6．0％、33．6％±4．4％；AIFM2基因mRNA表达相对比值为（0．6±0．2）、（0．8±0．2）、（1．0±0．4）、（1．2±0．5）；p53血ⅢA表达相对比值分别为（0．9±0．4）、（1．1±0．4）、（1．2．4-0．5）、（1．3±0．4）。各组之间均存在统计学意义（P〈0．05）。伴随姜黄素作用浓度的升高，A375细胞的生长被显著抑制。AIFM2mRNA与p53mRNA表达显著上调。结论姜黄素可能通过上调AIFM2基因的表达促使黑色素瘤细胞凋亡。

卵丘细胞上AIFM2和FDX1的表达及其与小鼠卵母细胞成熟的关系

目的检测小鼠卵母细胞体外、体内成熟过程中卵丘细胞(CCs)上线粒体相关凋亡因子2(AIFM2)和铁氧化还原蛋白1(FDX1)的表达,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄ICR雌性小鼠获取体内成熟卵丘-卵母细胞复合体(IVV-COCs)以及GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),并将GV期体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(IVMCOCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs、IVM-CCs和IVV-CCs 3组。实时定量逆转录聚合酶链反应检测AIFM2和FDX1mRNA水平的表达,以GAPDH为参照;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs的AIFM2和FDX1的亚细胞定位。结果IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2mRNA相对表达量[分别为(0.72±0.01)和(0.67±0.02)]显著高于GV-CCs组[(0.10±0.06)](P<0.01);同样,IVM-CCs和IVV-CCs的FDX1mRNA相对表达量[分别为(1.58±0.35)和(1.82±0.34)]也显著高于GV-CCs组[(0.10±0.03)](P<0.01);而IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2和FDX1表达水平均无显著性差异(P>0.05)。免疫荧光显示,AIFM2和FDX1主要定位于CCs胞质中,在GV-COCs中各层均有表达,且GV期卵母细胞中也有表达;IVMCOCs和IVV-COCs中表达阳性的细胞数目较GV期增加。结论卵母细胞成熟后,其CCs上AIFM2和FDX1的表达升高,表明AIFM2和FDX1参与了卵母细胞成熟过程,有望作为预测卵母细胞成熟的生物标记物。

AIFM2抑制铁死亡介导肝癌细胞索拉菲尼耐药

目的探讨AIFM2对肝癌细胞索拉菲尼耐药的影响及对铁死亡的调控。方法采用实时定量PCR检测30例肝细胞癌组织与相应癌旁组织和肝癌细胞系及正常肝细胞系中AIFM2 mRNA的表达水平;采用浓度梯度法培养索拉非尼耐药肝癌细胞,sh-AIFM2转染肝细胞癌细胞以抑制AIFM2表达,sh-Ctrl作为对照,实时定量PCR检测转染效率,Western blot法检测转染后AIFM2蛋白的表达;CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞的增殖能力;DCFH-DA染色法检测ROS表达,脂质过氧化试剂盒检测MDA的表达,微量还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测MDA表达,流式细胞术检测铁离子的表达。结果AIFM2在肝细胞癌组织中相对癌旁高表达,AIFM2在肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞系;AIFM2基因敲低促进肝癌耐药细胞活性的下降,并促进肝癌耐药细胞发生铁死亡,其中ROS、MDA表达增加,GSH表达降低,而铁离子表达并没有发生明显改变。结论AIFM2抑制铁死亡介导肝癌细胞索拉非尼耐药,联合应用AIFM2抑制剂和索拉非尼可能是治疗肝细胞癌耐药的有效途径。

凋亡诱导因子2在乳腺癌中的表达及其相关作用

目的 利用生物信息学方法分析凋亡诱导因子2(apoptosis-inducing factor 2,AIFM2)在乳腺癌患者肿瘤组织中的表达及作用机制。方法 检索GEPIA、Kaplan-Meier Plotter、UALCAN数据库中AIFM2的研究信息,分析该基因在乳腺癌中的表达。利用Kaplan-Meier方法分析AIFM2的表达与乳腺癌患者生存及临床病理因素间的关系。同时应用LinkedOmic数据库筛选与AIFM2共同表达的基因,并对靶标基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,并通过肿瘤免疫评估资源(tumor immune estimate resource,TIMER)数据库探究AIFM2表达与肿瘤组织中免疫细胞浸润的相关性。结果 GEPIA数据库分析发现AIFM2基因在乳腺癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库生存分析显示AIFM2基因高表达患者组的无复发生存期、总生存期、远处无转移生存期均显著高于低表达患者组(P<0.05);UALCAN数据库分析显示乳腺癌中AIFM2基因在不同人种、分子分型、组织类型表达水平不同(P<0.05);在不同年龄、性别、分期、TP53突变、围闭经期状态和淋巴结转移中表达水平无差异(P>0.05);LinkedOmic数据库对AIFM2的共表达基因进行GO和KEGG富集分析发现AIFM2可能参与乳腺癌免疫反应的调节;TIMER数据库分析显示乳腺癌中AIFM2的表达水平与CD4^(+)T细胞、中性粒细胞、树突状细胞的浸润正相关(P<0.05);在乳腺癌中低水平的浸润性CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、中性粒细胞和树突状细胞与较差的存活率显著相关(P<0.05)。结论 在乳腺癌中AIFM2的表达与肿瘤组织中免疫细胞浸润有关。AIFM2基因可能成为潜在的乳腺癌免疫治疗靶点。

MiR-214靶向线粒体相关凋亡诱导因子2对T细胞淋巴母细胞性淋巴瘤Jurkat细胞增殖、凋亡和侵袭的调控作用

目的:本文旨在探索miR-214对T细胞淋巴母细胞性淋巴瘤(T-LBL)Jurkat细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其分子机制。方法:Jurkat细胞分为4组:Jurkat(对照组);miR-214 inhibitor组;sh-AIFM2组;miR-214 inhibitor+sh-AIFM2组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-214和线粒体相关凋亡诱导因子2(AIFM2)的表达;荧光素酶分析验证miR-214与AIFM2的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭。结果:在Jurkat细胞中,miR-214负向调控AIFM2表达。MiR-214可直接靶向AIFM2。与对照组相比,miR-214 inhibitor组细胞增殖下降,细胞凋亡增加;sh-AIFM2组细胞增殖上升,细胞凋亡降低(P<0. 05)。而且,sh-AIFM2会减弱miR-214 inhibitor对细胞增殖的抑制和对细胞凋亡的诱导(P<0. 05)。另外,miR-214 inhibitor可降低细胞侵袭;sh-AIFM2会增强细胞侵袭(P <0. 05)。Sh-AIFM2会抑制miR-214inhibitor导致的细胞侵袭的下降(P<0. 05)。结论:MiR-214可通过靶向AIFM2促进Jurkat细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡。