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禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达
被引量:
6
1
作者
徐一鸣
金宁一
+5 位作者
夏志平
马鸣潇
鲁会军
韩松
金扩世
梁国栋
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期231-236,共6页
利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5HA、H7HA及H9HA亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-H5HA、pPIC9K-H7HA和pPIC9K-H9HA;再将所获重组质粒分别...
利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5HA、H7HA及H9HA亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-H5HA、pPIC9K-H7HA和pPIC9K-H9HA;再将所获重组质粒分别经SacⅠ、BglⅡ及SalⅠ线性化后,电转化GS115感受态细胞,以插入/替换的方式进行重组,并经MD平板与MM平板筛选,及PCR鉴定,得到重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-H5HA、GS115/pPIC9K-H7HA及GS115/pPIC9K-H9HA;用甲醇诱导分泌表达目标蛋白。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,H5HA、H7HA及H9HA蛋白在毕赤酵母中均获得表达。酵母表达了上述目的蛋白,可直接进行抗原检测,并可用于抗体检测试剂盒及亚单位疫苗制备的辅助研究。
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关键词
禽流感病毒
血凝素基因
毕赤酵母
表达
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职称材料
禽流感病毒NA基因在巴斯德毕赤酵母系统中的表达
被引量:
7
2
作者
冉多良
施建忠
孟庆文
《中国兽医科技》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期52-55,共4页
采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷...
采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷贝重组转化子及筛选His+Mut+表型转化子后 ,摇瓶培养 ,10mL/L甲醇诱导表达后 ,经SDS PAGE、Western blotting、双向琼脂扩散试验、神经氨酸酶试验分析证明 ,获得了几株高效表达重组表达株 ,并且该重组NA蛋白具有免疫学活性。
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关键词
禽流感病毒
巴斯德毕赤酵母
NA基因
分泌表达
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职称材料
高效毕赤酵母表达载体的改造与应用
被引量:
2
3
作者
侯增淼
李晓颖
+2 位作者
高恩
杨小琳
赵金礼
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期107-111,共5页
构建一种可促进外源蛋白在毕赤酵母中高表达的载体,实现在同一载体中外源基因与二硫键异构酶共表达,同时失活YPS1基因。以p PICZαA载体为骨架载体,将酵母YPS1基因C端和N端非功能区序列连接至p PICZαA载体,获得重组载体p PICZαA-YPSΔ...
构建一种可促进外源蛋白在毕赤酵母中高表达的载体,实现在同一载体中外源基因与二硫键异构酶共表达,同时失活YPS1基因。以p PICZαA载体为骨架载体,将酵母YPS1基因C端和N端非功能区序列连接至p PICZαA载体,获得重组载体p PICZαA-YPSΔ;将酵母PDI基因序列连接至p PICZαA载体,获得重组载体p PICZαAPDI,再以重组载体p PICZαA-PDI为模板通过PCR获得PDI表达盒,然后将PDI表达盒连接至重组载体p PICZαAYPSΔ,筛选获得高效表达载体p PICZαA-PDI-YPSΔ。最后,将外源基因HSA、h GH导入此载体,转化毕赤酵母GS115,检测HSA和h GH蛋白的表达。结果显示,高效表达载体p PICZαA-PDI-YPSΔ构建成功,外源蛋白HSA、h GH利用此载体,可获得高表达,具有很好的工业前景。
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关键词
YPS1基因
PDI表达盒
毕赤酵母
人血清白蛋白
人生长激素
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职称材料
题名
禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达
被引量:
6
1
作者
徐一鸣
金宁一
夏志平
马鸣潇
鲁会军
韩松
金扩世
梁国栋
机构
军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室
中国疾病预防控制中心病毒预防控制所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期231-236,共6页
基金
"十五"国家科技攻关计划课题资助项目(No.30070722)。~~
文摘
利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5HA、H7HA及H9HA亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-H5HA、pPIC9K-H7HA和pPIC9K-H9HA;再将所获重组质粒分别经SacⅠ、BglⅡ及SalⅠ线性化后,电转化GS115感受态细胞,以插入/替换的方式进行重组,并经MD平板与MM平板筛选,及PCR鉴定,得到重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-H5HA、GS115/pPIC9K-H7HA及GS115/pPIC9K-H9HA;用甲醇诱导分泌表达目标蛋白。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,H5HA、H7HA及H9HA蛋白在毕赤酵母中均获得表达。酵母表达了上述目的蛋白,可直接进行抗原检测,并可用于抗体检测试剂盒及亚单位疫苗制备的辅助研究。
关键词
禽流感病毒
血凝素基因
毕赤酵母
表达
Keywords
aiv
,
ha
,
pichia pastoris
,
expression
分类号
S854.43 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
禽流感病毒NA基因在巴斯德毕赤酵母系统中的表达
被引量:
7
2
作者
冉多良
施建忠
孟庆文
机构
新疆农业大学动物医学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
出处
《中国兽医科技》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期52-55,共4页
文摘
采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷贝重组转化子及筛选His+Mut+表型转化子后 ,摇瓶培养 ,10mL/L甲醇诱导表达后 ,经SDS PAGE、Western blotting、双向琼脂扩散试验、神经氨酸酶试验分析证明 ,获得了几株高效表达重组表达株 ,并且该重组NA蛋白具有免疫学活性。
关键词
禽流感病毒
巴斯德毕赤酵母
NA基因
分泌表达
Keywords
avian influenza virus (
aiv
)
pichia pastoris
NA gene
secreted
expression
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
高效毕赤酵母表达载体的改造与应用
被引量:
2
3
作者
侯增淼
李晓颖
高恩
杨小琳
赵金礼
机构
陕西慧康生物科技有限责任公司
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期107-111,共5页
基金
西安市科技计划项目(No.XJR1504-01)
文摘
构建一种可促进外源蛋白在毕赤酵母中高表达的载体,实现在同一载体中外源基因与二硫键异构酶共表达,同时失活YPS1基因。以p PICZαA载体为骨架载体,将酵母YPS1基因C端和N端非功能区序列连接至p PICZαA载体,获得重组载体p PICZαA-YPSΔ;将酵母PDI基因序列连接至p PICZαA载体,获得重组载体p PICZαAPDI,再以重组载体p PICZαA-PDI为模板通过PCR获得PDI表达盒,然后将PDI表达盒连接至重组载体p PICZαAYPSΔ,筛选获得高效表达载体p PICZαA-PDI-YPSΔ。最后,将外源基因HSA、h GH导入此载体,转化毕赤酵母GS115,检测HSA和h GH蛋白的表达。结果显示,高效表达载体p PICZαA-PDI-YPSΔ构建成功,外源蛋白HSA、h GH利用此载体,可获得高表达,具有很好的工业前景。
关键词
YPS1基因
PDI表达盒
毕赤酵母
人血清白蛋白
人生长激素
Keywords
YPS1 gene
PDI
expression
cassette
pichia
pastoris
ha
S
hGH
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达
徐一鸣
金宁一
夏志平
马鸣潇
鲁会军
韩松
金扩世
梁国栋
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
6
下载PDF
职称材料
2
禽流感病毒NA基因在巴斯德毕赤酵母系统中的表达
冉多良
施建忠
孟庆文
《中国兽医科技》
CAS
CSCD
北大核心
2004
7
下载PDF
职称材料
3
高效毕赤酵母表达载体的改造与应用
侯增淼
李晓颖
高恩
杨小琳
赵金礼
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
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