AJUBA调控MST1 YAP1和TAZ因子促进食管鳞状细胞癌细胞体外增殖迁移和侵袭

目的:探讨AJUBA在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞中表达以及是否通过调控MST1、YAP1和TAZ因子影响细胞增殖、侵袭和迁移。方法:采用Western blot法检测AJUBA蛋白在食管癌细胞系KYSE30、KYSE150与KYSE450中的表达水平,构建shRNA干扰载体AJUBA转染至KYSE150食管癌细胞系;通过体外克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验探究AJUBA对KYSE150细胞的增殖、周期、迁移和侵袭能力的影响。采用RT-PCR和Western blot检测MST1、YAP1和TAZ mRNA和蛋白的表达;核质分离实验检测AJUBA、YAP1和TAZ蛋白表达情况。结果:稳定干扰AJUBA基因后,平板克隆实验结果显示,与阴性对照组相比,shAJUBA组的细胞克隆形成数量明显减少,差异具有统计学意义(P<0.001);流式细胞周期实验结果显示,shAJUBA组中的细胞阻滞于G0/G1期,G2/M期与S期细胞显著减少(P<0.05);划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,与AJUBA空染组相比,shAJUBA组细胞迁移能力和侵袭能力均明显减弱(P<0.001);RT-PCR与Western blot实验结果显示,shAJUBA组细胞中的MST1、YAP1、TAZmRNA与蛋白表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。核质分离实验结果提示AJUBA蛋白在正常食管鳞状上皮细胞株(SHEE)细胞核中表达,而在KYSE150细胞胞质与胞核中表达;YAP1和TAZ蛋白在SHEE细胞中不表达,在KYSE150细胞质与细胞核中表达,上述结果差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:AJUBA促进食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移,可能与激活MST1、YAP1、TAZ因子的表达而影响食管鳞状细胞癌进展有关。

Ajuba对结肠癌细胞迁移侵袭影响的实验研究

目的:探索Ajuba对于结肠癌细胞迁移侵袭所产生的影响以及相关机制.方法:采用慢病毒转染的方法构建过表达和敲低Ajuba的结肠癌SW1116稳转细胞株,并进行细胞划痕实验、Transwell侵袭实验,观察细胞侵袭迁移能力变化;采用Western blotting检测细胞株中基质金属蛋白的变化情况.结果:在过表达Ajuba的SW1116稳转细胞中,细胞迁移侵袭能力增强,而敲低Ajuba后迁移侵袭能力减弱;同时MMP10表达量和Ajuba呈正相关.结论:Ajuba能够促进MMP 10的表达,增强结肠癌细胞的迁移能力.

LIM蛋白Ajuba的研究进展

LIM结构域是在展示不同生物学作用的多种蛋白质中发现的进化保守的双锌指基序。LIM蛋白可以在细胞质和细胞核中介导蛋白质与蛋白质的相互作用。Ajuba属于LIM结构域蛋白家族第三类中的Zyxin蛋白家族,其参与细胞外基质的装配,并与相关蛋白一起调节连接细胞外基质和细胞骨架的靶基因蛋白表达。并介导广泛的生物学功能,包括调控细胞周期、细胞粘附与连接、细胞迁移、细胞增殖和凋亡以及细胞分化等。文章通过对LIM蛋白家族结构,分类及其功能的介绍,从而进一步对Ajuba蛋白的发现,结构及生物学功能在癌症和糖尿病的临床应用上进行综述。