鹅AKR1D1基因编码区克隆、序列分析及在卵泡中的表达特性研究

【目的】克隆鹅AKR1D1基因编码区序列，预测其蛋白结构、功能，并研究其在鹅各等级卵泡中的表达特性。【方法】以天府肉鹅母系为材料，采用RT—PCR技术克隆鹅AKR1D1基因编码区序列，利用多种生物信息学分析软件预测其结构与功能，并应用荧光定量PCR技术检测其在各等级卵泡中的表达特性。【结果】结果表明：鹅AKR1D1基因编码区全长981bp，编码326个氨基酸，氨基酸水平上与鸡相似性高达95．71％；氨基酸序列分析表明鹅AKR1D1蛋白相对分子量为37263．7Da，主要定位在细胞质和线粒体内，属于水溶性蛋白；预测鹅AKR1D1氨基酸含有磷酸化位点18个、糖基化位点3个；其二级结构以无规则卷曲为主，三级结构呈弯曲螺旋结构；荧光定量PCR结果显示，AKR1D1在鹅2-4mm卵泡颗粒层和膜层表达最高，在膜层F5和颗粒层F1中表达最低。【结论]AKR1D1可能通过调控类固醇激素的动态平衡从而对卵泡募集、筛选、闭锁以及排卵起到重要作用。

先天性胆汁酸合成障碍2型一家系临床和遗传学分析:两个AKR1D1新突变的识别

先天性胆汁酸合成障碍2型(CBAS2)是编码Δ4-3-氧固醇5β-还原酶的AKR1D1基因突变导致的常染色体隐性遗传病,以胆汁淤积性黄疸为主要临床表现,伴脂肪和脂溶性维生素吸收障碍。本文报道了1例CBAS2患儿的临床特点及AKR1D1基因突变分析结果。患儿为8个月男婴,因发现全身皮肤、巩膜黄染7月余就诊。体查发现患儿发育、营养差;皮肤、巩膜轻度黄染;肝右肋下8 cm,质地中等,脾脏不大。血生化结果发现转氨酶和总胆红素升高,以结合胆红素升高为主,但γ-谷氨酰转肽酶和总胆汁酸水平基本正常。肝脏组织学检查见胆管排列紊乱,多核巨细胞易见,肝细胞内明显淤胆,伴间质纤维组织增生及淋巴细胞浸润。代谢性肝病组套二代测序及Sanger测序验证结果证实患儿AKR1D1基因型为c.579+2del T/c.853C>T(p.Q285X),两个突变均为新突变,且分别来源于其母亲和父亲。患儿最终确诊为CBAS2,给予鹅去氧胆酸治疗后,肝功能明显好转,肝肿大逐渐改善。3个月后随访,肝脏右肋下2.5 cm可及,质软,肝功能各项指标已恢复正常。

先天性胆汁酸合成障碍2型一例及文献复习

目的探讨先天性胆汁酸合成障碍2型(congenital bile acid synthesis defect type 2,CBAS2)患儿的临床特点及诊治,加强对该病认识。方法回顾性分析1例CBAS2患儿的临床资料及基因测序结果,并复习相关文献。结果患儿自新生儿早期出现胆汁淤积,生化示转氨酶和总胆红素升高,以结合胆红素升高为主,γ-谷氨酰转肽酶和总胆汁酸正常,基因检测明确该患儿AKR1D1基因存在两个错义突变:c.158A>G(p.D53G)和c.658A>C(p.S220R),前者为文献报道的致病性变异,后者为未见报道的新变异类型,经多种生物信息学工具预测变异具有致病性。结论CBAS2患儿常表现为新生儿期胆汁淤积,病情进展快,血清γ-谷氨酰转肽酶和总胆汁酸常较低,行基因检测可确诊,早期诊断及初级胆汁酸替代治疗可改善预后.