消渴健脾方通过调控PEDF激活PI3K/Akt及AMPK信号通路对2型糖尿病胰岛素抵抗的影响及可能机制

目的探讨消渴健脾方通过调控色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide-3-Kinase/Protein kinase B,PI3K/Akt)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路对2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)的影响及可能机制。方法36只实验大鼠按照随机数字法分为7组,对照组、2型糖尿病模型组、盐酸二甲双胍+T2DM大鼠组、消渴健脾方低剂量组、消渴健脾方中剂量组、消渴健脾方高剂量组,每组各6只。对比不同组大鼠体质量、全血血糖、空腹胰岛素(fasting Insulin,FINS)、肝功能、血脂四项、肝糖原的表达变化、p-PI3K、p-Akt、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)、p-AMPK、脂肪甘油三酯水解酶(adipose Triglyceride Lipase,ATGL)的蛋白表达水平及β-actin实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)引物、观察组织病理变化。结果药物干预后,盐酸二甲双胍+T2DM大鼠组、消渴健脾方中剂量组及消渴健脾方低剂量组的谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspertate aminotransferase,AST)、总胆固醇(total cholestrol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL)表达量较2型糖尿病模型组显著降低,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的表达量显著升高(P<0.05);盐酸二甲双胍+T2DM大鼠组、消渴健脾方中剂量组及消渴健脾方低剂量组的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、FINS、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbA1c)及IR值较2型糖尿病模型组显著降低(P<0.05);盐酸二甲双胍+T2DM大鼠组、消渴健脾方中剂量组及消渴健脾方低剂量组的肝糖原及肝脏组织中PEDF含量较2型糖尿病模型组显著升高,血清中的PEDF的含量显著降低(P<0.05);消渴健脾方高剂量组的肝糖原及肝脏组织中PEDF的含量较盐酸二甲双胍+T2DM大鼠组降低,血清中的PEDF的含量升高(P<0.05)。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)病理结果表明:2型糖尿病模型组肝脏肝细胞排列紊乱、凝固性坏死、水肿、细胞核数量降低。消渴健脾方中剂量组的PI3K、Akt、GSK-3β、AMPK、ATGL的表达水平及β-actin荧光实时定量PCR引物水平较2型糖尿病模型组显著升高(P<0.05)。结论中剂量消渴健脾方存在通过增强T2DM大鼠对PEDF激活的PI3K/Akt及AMPK信号通路水平情况,降低肝糖原及肝脏组织中PEDF的含量增高血清中的PEDF的含量,从而减轻IR程度,推测这是降低血糖的可能机制。

基于PI3K/AKT/GSK-3β信号通路探讨EA改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能障碍的内在机制

目的探讨鞣花酸(ellagicacid,EA)对APP/PS1双转基因小鼠认知功能的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3(PI3K/AKT/GSK-3β)信号通路探讨鞣花酸对双转基因小鼠海马氧化应激水平的调节机制。方法将32只SPF级6月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为4组,即APP/PS1组、APP/PS1+EA组、APP/PS1+LY294002组、APP/PS1+EA+LY294002组,每组8只,另外选取8只SPF级C57BL/6J野生型小鼠(Wildtype)作为空白对照组,即WT组。APP/PS1+EA组给予50mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃EA;APP/PS1+LY294002组予以1.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射PI3K抑制剂LY294002;APP/PS1+EA+LY294002组予以50mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃EA,同时按1.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射LY294002;WT组和APP/PS1组于相同时间点灌胃等体积10%二甲基亚砜(DMSO)。每日给药1次,连续给药60天。Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,免疫组化、蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT、GSK-3β相关蛋白的表达,透射电镜观察小鼠海马组织超微结构变化。结果与WT组相比,其他四组的逃避潜伏期均增长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.01);APP/PS1组、APP/PS1+LY294002组和APP/PS1+EA+LY294002组中的PI3K、AKT蛋白表达量显著降低(P<0.01),GSK-3β表达量显著升高(P<0.01);APP/PS1+EA组的PI3K表达量降低(P<0.05),AKT表达量显著降低(P<0.01),GSK-3β表达量升高(P<0.05);与WT组相比,APP/PS1组海马神经元细胞数目较少,线粒体结构破坏,大部分线粒体出现肿胀,线粒体的内膜和外模不完整,部分线粒体嵴消失,微管、微丝缠结,排列紊乱,而APP/PS1+EA组神经元细胞数较APP/PS1组增多,线粒体结构较清晰,可见清楚的线粒体嵴,线粒体轻度水肿。微管、微丝排列较整齐有序。结论鞣花酸改善AD模型小鼠的学习和记忆能力、减少海马神经元细胞损伤和凋亡,其作用机制可能是通过调节PI3K、AKT、GSK-3β等相关蛋白降低AD模型小鼠海马氧化应激水平。

GM1通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路减轻脑出血小鼠的神经功能损伤

目的研究单唾液酸四己糖基神经节苷脂(GM1)对急性脑出血小鼠的神经功能保护作用及其机制。方法构建小鼠脑出血神经损伤模型。将小鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、GM1(25 mg/(kg·d))组、GM1+LY294002(6μg/(kg·d))组各10只。于造模结束1 h后腹腔注射GM1或LY294002,连续1 w,Sham组和Model组腹腔注射等量生理盐水。采用神经功能缺损评分、脑含水量等检测各组神经功能损伤;苏木素-伊红(HE)染色试剂盒和尼氏染色试剂盒检测各组脑组织和神经元损伤水平;酶联试验免疫吸附试验(ELISA)法测定血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶(PI3K/AKT/GSK)3β蛋白表达。结果与Sham组相比,Model组神经功能损伤严重(P<0.05),且神经细胞出现大量凋亡。Western印迹结果显示,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达明显下调,Bax、cleaved caspase-3、p-GSK3β/GSK3β蛋白表达明显上调(P<0.05);与Model组相比,GM1治疗组神经功能损伤明显减轻,脑组织损伤和炎症明显减轻且神经细胞凋亡明显被抑制(P<0.05),而GM+LY294002使得这一治疗作用明显被弱化(P<0.05)。结论GM1能有效保护急性脑出血小鼠的神经功能,其作用机制可能与PI3K/AKT/GSK3β信号通路有关。

诸葛菜种子水提物激活AMPK/AKT/GSK-3β通路保护对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

本文研究诸葛菜种子水提物对对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。健康雄性C57 BL/6J小鼠被随机分为7组:正常组,模型组,双环醇阳性对照组(200 mg/kg),葵花护肝片阳性对照组(350 mg/kg),诸葛菜种子水提物低(125 mg/kg)、中(250 mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量组。各组均灌胃给药,1次/d,连续灌胃给药4 d,除正常组外其余各组均腹腔注射APAP溶液(450 mg/kg)建立急性肝损伤模型,处死小鼠。检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),谷草转氨酶(AST)活性与胆红素(TBIL)水平;肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH);HE染色观察小鼠肝组织病理变化;蛋白印迹法检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化AKT蛋白(p-AKT)、磷酸化葡萄糖合成激酶3β(p-GSK-3β)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-9抗体(Caspase-9)、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗体(Caspase-3)蛋白的表达。与模型组相比,诸葛菜各剂量组均能明显改善肝脏病理变化,中剂量组ALT,AST活性分别降低了48.73%、59.11%,高剂量组分别降低了71.38%、59.33%,中剂量组SOD和GSH分别上升了45.05%、219.45%,高剂量组SOD和GSH分别上升了48.68%和232.80%,同时可致肝组织中p-JNK、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平显著减少,Bcl-2、p-AMPK、p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达水平显著增加。其机制可能与AMPK/AKT/GSK-3β信号通路被激活有关。

太灵丹含药血清调控PI3K/AKT/GSK3β通路减轻高糖诱导的足细胞转分化的机制研究

目的:观察太灵丹(TLD)含药血清对高糖诱导的足细胞转分化及PI3K/AKT/GSK3β通路的影响及分子机制。方法:将小鼠肾脏足细胞MPC5分为空白对照组、高糖刺激组(模型组)、太灵丹血清组(高、中、低浓度)。CCK-8检测足细胞的活力,流式细胞检测足细胞的凋亡,免疫组化检测desmin、FSP-1的蛋白表达,Western blot和QPCR法检测足细胞podocin、CD2-AP、FSP-1、PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β蛋白及mRNA表达。结果:与正常组相比,模型组足细胞活力下降(P<0.01),凋亡增加(P<0.01),免疫组化结果显示,desmin及FSP-1的蛋白表达较正常组升高(P<0.05),podocin、CD2-AP、PI3K、Akt、p-Akt的蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05),而desmin、FSP-1、GSK3β的蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)。与模型组相比,太灵丹含药血清各组足细胞活力显著升高(P<0.01),凋亡减少(P<0.01),podocin、CD2-AP、PI3K、Akt、p-Akt的蛋白及mRNA表达均明显上调(P<0.05),desmin、FSP-1、GSK3β的蛋白及mRNA表达均明显下调(P<0.05)。结论:太灵丹含药血清更能够减轻高糖诱导的足细胞转分化,其部分作用机制是通过调控PI3K/AKT/GSK3β通路实现的。

葛根素激活AMPK/Akt/GSK-3β信号通路减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞肥大作用研究

[目的]探讨葛根素对高糖诱导的H9c2心肌细胞的保护作用及机制。[方法]采用高糖损伤H9c2心肌细胞48 h,建立体外糖尿病心肌损伤细胞模型;罗丹明标记的鬼笔环肽标记细胞骨架,测定细胞表面积;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中心肌肥大相关蛋白β-肌球蛋白重链(β-MHC)的水平、AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)和糖原合成激酶3β(GSK-3β)蛋白的磷酸化水平、以及1,4,5-三磷酸2型受体(IP3R2)和Sigma-1受体(Sig-1R)的蛋白水平。[结果]葛根素(20μmol/L)能显著抑制高糖诱导的心肌细胞表面积增大;Western Blot分析结果显示,高糖能上调β-MHC蛋白水平、抑制AMPK和Akt磷酸化,葛根素能下调β-MHC、IP3R2蛋白水平同时促进AMPK、Akt和GSK-3β的磷酸化。[结论]葛根素可能通过激活AMPK/Akt/GSK-3β信号通路减轻高糖诱导的心肌肥大。

槲皮素调控AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路抑制C2C12细胞凋亡

目的:基于AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路探讨槲皮素对C2C12细胞增殖、成肌分化和凋亡的影响。方法:体外培养C2C12细胞进行成肌诱导,分别采用CCK8法(Cell Counting Kit-8)、ATP染色法及TUNEL法检测槲皮素对C2C12细胞增殖活力、成肌能力和凋亡的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测MyoD1和Myogenin基因和蛋白表达,筛选合适浓度。再采用合适浓度的槲皮素或AKT1通路抑制剂(LY294002)干预成肌诱导后的C2C12细胞,ATP法和TUNEL法分别检测C2C12细胞成肌能力和凋亡水平,Western blot检测p-AKT1、p-AMPK和p-Foxo3a蛋白表达水平。结果:①在一定范围内,槲皮素呈浓度依赖性促进C2C12增殖,12.5μmol/L的槲皮素显著促进C2C12细胞成肌分化,能显著提高成肌标志物MyoD1和Myogenin基因和蛋白表达,因此本研究选择12.5μmol/L的槲皮素用于后续研究。②10μmol/L LY294002显著抑制C2C12细胞成肌分化,促进细胞凋亡,抑制p-AKT1和p-AMPK蛋白表达,促进p-Foxo3a蛋白表达;12.5μmol/L槲皮素联合10μmol/L LY294002显著促进C2C12细胞成肌分化,抑制细胞凋亡,促进p-AKT1和p-AMPK蛋白表达,抑制p-Foxo3a蛋白表达。结论:槲皮素通过调控AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路的磷酸化促进C2C12细胞增殖和分化,抑制细胞凋亡。

NEIL3调控AKT/GSK3β/Cyclin D1信号通路诱导肺腺癌细胞增殖

目的探讨NEIL3(Nei核酸内切酶VIII样蛋白3)在肺腺癌组织中的表达,明确其对肺腺癌细胞增殖的影响和分子机制。方法免疫组化检测肺腺癌组织NEIL3的表达,分析NEIL3表达与患者临床病理参数和生存预后的关系。采用short hairpin RNA(shRNA)慢病毒载体转染技术干扰肺腺癌细胞A549中NEIL3的表达后,平板克隆实验、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验和流式周期实验检测细胞增殖的改变;Western blot检测增殖相关分子Cyclin D1和信号通路AKT/GSK3β/β-catenin的改变。结果NEIL3表达与肺腺癌患者的临床分期、T分期及生存时间有关(P<0.05)。干扰NEIL3表达诱导A549细胞出现G0/G1期阻滞,抑制细胞增殖(P<0.05)。机制上,抑制NEIL3可促进Cyclin D1蛋白酶体降解从而下调其蛋白水平;干扰NEIL3可抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的激活(P<0.05)。结论NEIL3诱导肺腺癌细胞的增殖,机制可能与其调控AKT/GSK3β信号通路抑制Cyclin D1蛋白酶体降解有关。

辛伐他汀通过Akt/ GSK3β通路抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡

目的观察辛伐他汀对心肌梗死后心肌细胞凋亡的影响并探讨其分子机制。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型。实验组给予药物处理(辛伐他汀40mg.kg-1),10 d后,超声心动图检测左心室功能参数,生化法检测血脂水平,TUNEL法检测心肌组织中的凋亡心肌细胞,Western blot法检测p-Akt ser473、p-GSK3βser9和β-cate-nin蛋白表达。结果辛伐他汀组TC、LDL-C及TG水平与心肌梗死组比较无差异(P>0.05),辛伐他汀组较心肌梗死组在梗死周边区、远离梗死区心肌细胞凋亡明显减少(P<0.05),左心室功能改善(P<0.05),辛伐他汀上调p-Aktser473、p-GSK3βser9和β-catenin蛋白表达。结论辛伐他汀改善心肌梗死后心功能,可能是通过激活Akt/GSK3β通路,抑制心肌细胞凋亡实现。

电项针对全脑缺血VD模型大鼠PI3K/AKT/GSK-3β信号通路的影响

目的研究电项针对全脑缺血血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(Phosphatidylinositol-3 kinase/serine-threonine kinase/glycogen synthase kinase-3β,P13K/AKT/GSK-3β)信号通路的影响。方法采用四血管阻断方法制备VD模型大鼠,电项针组取双侧风池穴、供血穴,电针30 min/次,1次/d,治疗14d。采用Y迷宫评价大鼠学习记忆能力;荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot法检测大鼠海马组织中磷酸化蛋白激酶B(phosphorylatedproteinkinaseB,p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(Phosphorylated GSK-3β,P-GSK-3β)mRNA和p-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达。结果与模型组比较,电项针组可显著提高VD大鼠Y迷宫学习与记忆正确次数(P<0.01)。与模型组比较,电项针组大鼠海马组织中p-AKT、p-GSK-3βmRNA和p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达均有不同程度的升高(P<0.01)。结论电项针能够改善VD模型大鼠学习记忆能力,具体机制可能是激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,发挥抗凋亡作用,起到对缺血海马神经元的保护作用。

葛根芩连汤含药血清对L6肌细胞胰岛素抵抗模型中PI3K、Akt、GLUT4、AMPK蛋白的影响

目的通过观察葛根芩连汤含药血清对L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、葡萄糖转运子4(GLUT4)的影响,探讨葛根芩连汤抗2型糖尿病胰岛素抵抗的信号通路相关机制。方法将诱导分化好的L6肌细胞接种于6孔板内,以1μmol/L DEX诱导L6肌细胞24 h产生胰岛素抵抗,予以不同浓度的葛根芩连汤含药血清(20%、10%和5%),采用western blot法检测L6骨骼肌细胞p-PI3K、Akt、p-Akt、p-AMPK、GLUT4蛋白的表达。另设实验,分组方法如上,采用ELISA法检测膜蛋白GLUT4含量。结果葛根芩连汤含药血清(20%、10%和5%)(高、中和低剂量组)治疗后,p-PI3K、Akt、p-Akt、p-AMPK、GLUT4蛋白的表达明显升高(P<0.05);用葛根芩连汤含药血清(20%、10%和5%)(高、中和低剂量组)治疗后,膜GLUT4蛋白的表达明显升高(P<0.05)。结论葛根芩连汤抗2型糖尿病胰岛素抵抗作用可能与影响PI3K、Akt、GLUT4、AMPK蛋白相关。

人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡

目的探究人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,Rh2)诱导人结肠癌细胞SW480凋亡作用机制。方法 CCK-8法检测Rh2对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术(Flow cyto Metry,FCM)检测Rh2对SW480细胞凋亡的影响;Hoechst33258染色观察Rh2对SW480细胞凋亡形态学的影响;Western blot检测经Rh2诱导SW480细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cleaved caspase-3,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化;LY294002、Rh2单独及联合诱导SW480细胞后,蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化。结果CCK-8结果显示Rh2呈时间浓度依赖抑制SW480细胞增殖。FCM结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的(0.70±0.09)%增至(11.06±1.04)%(P<0.05)。Hoechst33258结果显示,Rh2诱导SW480细胞48h后呈现典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,经Rh2诱导的SW480细胞,凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低,Bax、p53、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达增加;PI3K/AKT/GSK-3β信号通路蛋白PI3K、P-AKT、P-GSK-3β表达量与对照组比较明显减少,AKT、GSK-3β表达量无明显变化;LY294002、Rh2和LY294002与Rh2联合诱导SW480细胞后,总AKT蛋白和总GSK-3β蛋白表达量基本一致,LY294002与Rh2联合用药对SW480细胞中PI3K、P-AKT和P-GSK-3β的表达抑制作用较单独用药更加明显。结论Rh2可能是通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路,激活p53信号通路,激活caspase-3,破坏Bcl-2/Bax比例,诱导结肠癌细胞SW480凋亡。

复心汤对心力衰竭大鼠PI3K-Akt-GSK3β通路的影响

目的研究复心汤对阿霉素所致心力衰竭大鼠心肌肥厚模型中PI3K-Akt-GSK3β通路在心肌中表达的影响,探讨复心汤对抗心力衰竭的作用机制。方法健康成年的雄性Wistar大鼠75只,随机分为空白组、模型组、卡托普利组、复心汤低剂量组、复心汤高剂量组,除空白组外,其余各组用阿霉素造模后,给予相应干预措施。4周后分别用免疫组化、Western blotting法检测心肌中PI3K、Akt及GSK3β的表达情况,并进行定量分析。结果模型组PI3K、Akt阳性表达面积最高,复心汤低剂量组、卡托普利组、复心汤高剂量组较低,空白组最低;GSK3β蛋白表达情况最高为空白组,卡托普利组、复心汤高剂量组、复心汤低剂量组表达面积较模型组高。结论复心汤治疗心力衰竭与PI3K-Akt-GSK3β通路有关。

基于SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路研究右美托咪定对脓毒症模型大鼠脑损伤的保护机制

目的:通过右美托咪定(Dex)对脓毒症模型大鼠脑损伤中沉默信息调节因子1(SIRT1)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合酶激酶3β(GSK3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响,探究其对脑损伤的保护作用机制。方法:选取雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、CLP+Dex组(10μg/kg Dex)、CLP+Dex+Sirtinol组(10μg/kg Dex+2μL/100 g SIRT1抑制剂Sirtinol),每组20只。造模前2 h,CLP+Dex+Sirtinol组大鼠经侧脑室注射给予Sirtinol;各组大鼠采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型(Sham组仅手术但不结扎穿孔)。造模结束后0、3、6 h,CLP+Dex组、CLP+Dex+Sirtinol组大鼠分别腹腔注射Dex(10μg/kg),Sham组和CLP组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。末次给药24 h后,检测大鼠脑组织含水量、伊文思蓝(EB)含量、大脑皮层组织细胞凋亡情况和脑组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平,以及海马组织中SIRT1、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,CLP组大鼠脑组织含水量、EB含量、大脑皮层组织凋亡细胞数及脑组织中IL-1β、TNF-α表达水平显著增加或升高(P<0.05);海马组织SIRT1、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与CLP组比较,CLP+Dex组大鼠脑组织含水量、EB含量、大脑皮层组织凋亡细胞数及脑组织中IL-1β、TNF-α表达水平显著减少或降低(P<0.05);海马组织中SIRT1、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。而Sirtinol可显著逆转Dex的上述脑保护和因子调节作用(P<0.05)。结论:Dex对脓毒症模型大鼠具有脑保护作用,该作用可能是通过激活SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路而发挥抗炎、抗凋亡等作用,从而减轻脑水肿、保护血脑屏障并减轻脑损伤。

吲哚美辛通过Akt/GSK3β/NAG-1信号通路诱导胃癌细胞的凋亡

目的:探讨非选择性环氧合酶抑制剂吲哚美辛诱导胃癌细胞凋亡作用与Akt/GSK3β/NAG-1信号通路的关系。方法:MTT法测定胃癌细胞的活力;Hoechst 33258染色检测细胞形态学改变,流式细胞术检测DNA含量的变化,Western blotting检测蛋白表达的变化。结果:吲哚美辛通过caspase通路诱导胃癌细胞MGC-803的凋亡,明显降低Akt和GSK3β的磷酸化水平,同时上调NAG-1的表达。单独抑制PI3K或Akt的活性亦可上调NAG-1的表达,而GSK3β抑制剂预处理后则取消吲哚美辛上调NAG-1表达的作用。结论:吲哚美辛可通过Akt/GSK3β/NAG-1信号通路诱导胃癌细胞MGC-803的凋亡。

当药醇苷对β淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤模型GSK-3β及Akt表达的影响

目的研究当药醇苷对阿尔茨海默病(AD)细胞模型糖原合成酶激酶(GSK)-3β及蛋白激酶B(Akt)表达的影响及机制。方法10μmol/L Aβ作用于PC12细胞制作成AD细胞模型。实验分为正常对照组,模型组,当药醇苷低剂量组,当药醇苷高剂量组,LY294002组,LY294002+当药醇苷高剂量组。结果与正常对照组比较,模型组p-Akt蛋白水平明显下降(P<0.05),而p-GSK-3β蛋白显著升高(P<0.05)。与模型组比较,当药醇苷高、低剂量组p-Akt蛋白表达水平明显升高,p-GSK-3β蛋白表达显著下降(P<0.05);当药醇苷高、低剂量组间比较差异不显著(P>0.05);用LY294002处理的两组p-Akt蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平与正常对照组无显著差异(P>0.05),LY294002+当药醇苷高剂量组与当药醇苷高、低剂量组的p-Akt蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平比较有统计学差异(P<0.05)。结论当药醇苷可以拮抗Aβ导致的AD神经损伤,具有神经细胞保护作用,其作用机制可能通过激活PI3K/Akt信号通路,提高p-Akt蛋白表达水平,抑制该通路下游靶分子p-GSK-3β活性而实现。

雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COC1/DDP细胞凋亡的影响及其对PI3K/AKT/GSK3β信号通路的调控

目的:通过研究雷公藤内酯醇(TP)联合紫杉醇对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞(COC1/DDP细胞)凋亡的影响,以探讨两药联合对COC1/DDP细胞作用的机制。方法:将对数生长期COC1/DDP细胞随机分为6组:空白对照组、紫杉醇组(3.13μg/ml)、LY294002组(10μmol/ml)、TP组(10ng/ml)、LY294002+紫杉醇组(10μmol/ml LY294002+3.13μg/ml紫杉醇)、TP+紫杉醇组(10ng/ml TP+3.13μg/ml紫杉醇)。采用MTT法检测各组的细胞增殖活性;普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测各组细胞中Akt、pAkt、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达变化。结果:(1)细胞增殖抑制率:TP+紫杉醇组显著高于TP、紫杉醇组(P<0.05);LY294002+紫杉醇组显著高于LY294002、紫杉醇组(P<0.05)。联合用药组中,TP+紫杉醇组显著高于LY294002+紫杉醇组(P<0.05);单用药组中,TP组>紫杉醇组>LY294002组(P<0.05)。各组抑制率均呈时间依赖性(P<0.05)。(2)普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜下观察,除空白组外,各用药组的细胞形态均有凋亡样改变。两联合用药组的细胞凋亡数显著高于各自单药组,TP+紫杉醇组高于LY294002+紫杉醇组;单用药组的细胞凋亡数:TP组>紫杉醇组>LY294002组。(3)流式细胞仪检测发现,两联合用药组的细胞凋亡率大于各自单药组(P<0.05)。联合用药组中,TP+紫杉醇组凋亡率显著高于LY294002+紫杉醇组(P<0.05);单药组的细胞凋亡率为:TP>紫杉醇>LY294002(P<0.05)。(4)p-Akt蛋白和p-GSK3β蛋白的表达从空白对照组→紫杉醇组→LY294002组→TP组→LY294002+紫杉醇组→TP+紫杉醇组,呈逐渐减少的趋势,而总Akt、GSK3β蛋白的表达不变。结论:TP可协同紫杉醇促进COC1/DDP细胞凋亡,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/GSK3β信号通路,从而下调了耐药相关蛋白p-Akt、p-GSK3β的表达。

罗布麻总黄酮通过PI3K/Akt/GSK3β抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡机制研究

心血管疾病严重危害人类健康,其致病机制主要是氧化应激诱导的内皮细胞凋亡,保护内皮细胞免受氧化应激损伤是防治心血管疾病的关键。为了探讨罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Veneti,TFF)抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的EA.hy926细胞凋亡的机制,采用不同浓度TFF处理EA.hy926细胞,一定浓度的H_2O_2造模,通过MTT法、Hoechst33342/PI荧光双染、流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况,并用Western-blot和荧光定量PCR检测相关蛋白及m RNA的表达水平。研究发现,H_2O_2能明显诱导EA.hy926细胞凋亡,而TFF可降低H_2O_2引起的内皮细胞凋亡,表现为凋亡率降低、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)增加、裂解的半胱天冬酶-3,-9(cleaved caspase-3,-9)表达减少、髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)表达增加、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/Akt/GSK3β)通路中Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平升高。上述结果表明,TFF主要是通过激活PI3K/Akt/GSK3β通路,调节Mcl-1的表达,保护MMP,进而抑制caspase蛋白的剪切活化,抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡。

PI3K/AKT/GSK3β信号通路在上皮性卵巢癌细胞增殖与耐药中的作用

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是致死率最高的妇科恶性肿瘤，严重威胁着女性健康和生活质量。其中上皮性卵巢癌最常见，占所有病理类型的85％～90％。由于卵巢癌发病隐匿，约70％的患者在确诊时已为晚期。其致死的主要原因是转移和耐药性的出现，这是临床上治疗卵巢癌的难点，也是卵巢癌研究的热点。

锁阳多糖通过激活PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的从MC3T3-E1小鼠前成骨细胞中PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的角度,揭示锁阳多糖(cynomorium songaricum polysaccharide,CSP)的促成骨分化机制。方法使用含有不同浓度CSP的成骨诱导液培养MC3T3-E1细胞,在第1、3、5、7天采用MTT法检测细胞活力。随后分为Con组(0μg/m LCSP)、CSP组(100μg/m L CSP)及CSP+BEZ组(100μg/m L CSP及50μmol/L BEZ(PI3K特异性抑制剂));干预14 d后采用茜素红染色观察比较MC3T3-E1的成骨分化情况、Real-time PCR定量分析相关成骨分化m RNA,如Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨钙素(Osteocalcin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的表达水平;并使用Western blot法检测Runx2、CollagenⅠ、Osteocalcin成骨相关蛋白;PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin通路蛋白的表达情况,以及免疫荧光检测β-catenin的核易位情况。结果与Con组(0μg/m L)相比,CSP干预均可有效促进MC3T3-E1增殖,100μg/m L的效果更加明显。与Con组比较,CSP可有效促进MC3T3-E1细胞茜素红染色的阳性率,以及成骨相关的m RNA、蛋白表达水平(P<0.05),以及PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达(P<0.05),同时还可促进β-catenin入核;但是这些促进作用均可被BEZ逆转。结论CSP可能通过激活PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路,诱导MC3T3-E1细胞成骨分化。