人参皂苷Rb1通过AKT/GSK-3β/NFAT途径抑制硫化砷诱导的神经细胞PC12毒性

目的探索人参皂苷Rb1抑制硫化砷诱导的神经细胞--嗜铬细胞瘤细胞(PC12)毒性的作用机制。方法以PC12细胞为研究对象,加入0、2.5、5、10、15、20、50μmol/L硫化砷后观察细胞的损伤情况,采用噻唑蓝法检测细胞活性。在硫化砷损伤的PC12细胞培养基内加入5、10、20μmol/L人参皂苷Rb1,采用磺酰罗丹明B法检测其对细胞增殖能力的影响;用流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响;ATP试剂盒荧光素酶法测定其对细胞内ATP含量的影响;2′,7′-二氯四氟乙烷双乙酸盐探针染色法检测其对细胞内活性氧(ROS)含量的影响。Western blot检测PC12细胞中蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3(GSK-3β)、活化T细胞核因子(NFAT)、细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达。结果不同浓度硫化砷对PC12细胞有损伤,且随着浓度升高及作用时间延长,细胞损伤越严重;硫化砷可抑制PC12细胞的增殖。人参皂苷Rb1对硫化砷损伤的PC12细胞有保护作用,可有效抑制硫化砷诱导的PC12细胞的凋亡。硫化砷可降低PC12细胞内的ATP含量,增加ROS的含量;人参皂苷Rb1可增加ATP的含量,降低ROS的含量,加强细胞代谢。硫化砷刺激PC12细胞后细胞内p-AKT、p-GSK-3β、NFAT-c3、Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白的表达显著降低,Caspase-3与Bax蛋白的表达明显提高,线粒体内Cyt C表达明显提高(P<0.01);人参皂苷Rb1干预后,细胞内p-AKT、p-GSK-3β、NFAT-c3、Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Caspase-3与Bax蛋白的表达明显降低,线粒体内Cyt C表达明显降低(P<0.01)。结论人参皂苷Rb1可抑制硫化砷诱导的PC12细胞凋亡,从而保护神经细胞,其可能是通过调节AKT/GSK-3β/NFAT信号通路来实现的。

西地那非通过STAT3和Akt/GSK-3β途径对哮喘小鼠气道炎症和重塑的作用研究

目的探究西地那非在哮喘中的作用及其可能的作用机制。方法40只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、西地那非低剂量组、西地那非高剂量组和阳性对照组,每组各8只。采用卵清蛋白(OVA)诱导建立小鼠哮喘模型,西地那非低、高剂量组小鼠腹腔注射西地那非12.5mg/kg和25mg/kg,阳性对照组腹腔注射地塞米松2mg/kg,其余组注射生理盐水。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并进行细胞计数;ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-13、IgE和OVA特异性LgE水平;HE染色检测肺组织病理学变化;PAS染色检测杯状细胞增生;Masson染色检测胶原纤维沉积;免疫组化检测α-SMA的表达;Western blot检测α-SMA蛋白和STAT3、Akt/GSK-3β途径相关蛋白的表达。结果与对照组相比,哮喘组小鼠BALF总细胞数、嗜酸性粒细胞数、炎症评分、PAS阳性细胞数、胶原纤维面积、α-SMA表达和p-STAT3/STAT3的比值明显升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-13、IgE和OVA特异性LgE水平明显升高(P<0.05),p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β的比值明显降低(P<0.05);与哮喘组相比,西地那非低、高剂量组和阳性对照组小鼠BALF总细胞数、嗜酸性粒细胞数、炎症评分、PAS阳性细胞数、胶原纤维面积、α-SMA表达和p-STAT3/STAT3的比值明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-4和IL-13、IgE和OVA特异性LgE水平明显降低(P<0.05),p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β的比值明显升高(P<0.05)。结论西地那非可能通过调控STAT3和Akt/GSK-3β途径抑制哮喘小鼠气道炎症和重塑。

高强度间歇运动对自发性高血压模型大鼠病理性心脏肥大的影响及机制

背景:规律运动具有健康促进效应,中低强度持续有氧运动已成为高血压等慢性病患者一级和二级预防的重要策略,然而高强度间歇运动的效果尚存在争议。目的:观察高强度间歇运动对自发性高血压大鼠病理性心脏肥大的作用并探讨其可能机制。方法:30只雄性自发性高血压大鼠随机分为对照组和运动组,同时将15只Wistar-Kyoto大鼠作为正常血压组。正常血压组和对照组大鼠保持安静状态,运动组进行8周高强度间歇运动。实验后利用无创血压仪测定血压,超声心动术检测心脏结构与功能,苏木精-伊红染色获取心肌细胞横截面积,RT-PCR法检测胚胎基因——心房钠尿肽和脑钠尿肽的mRNA表达量,Western blot法检测PI3-K、Akt、CnAβ和NFATc3的蛋白表达量。结果与结论:①与正常血压组比较,对照组血压升高(P<0.05),左心室出现向心性肥大(心腔缩窄、室壁增厚、心肌细胞横截面积升高),心功能下降(P<0.05),脑钠尿肽mRNA表达上调(P<0.05),CnAβ蛋白表达量升高(P<0.05)、p-NFATc3/t-NFATc3比值降低(P<0.05),PI3-K(p110α)蛋白和p-Akt/t-Akt比值无显著变化(P>0.05);②与对照组比较,运动组收缩压下降(P<0.05),心脏发生离心性肥大(心腔扩张),心功能升高(P<0.05),脑钠尿肽mRNA表达下调(P<0.05),PI3-K(p110α)蛋白和p-Akt/t-Akt比值升高(P<0.05),CnAβ蛋白以及p-NFATc3/t-NFATc3比值无显著变化(P>0.05);③结果表明,8周高强度间歇运动激活PI3-K/Akt信号转导途径诱导自发性高血压大鼠由病理性心脏肥大向生理性肥大转变并改善心功能,但并未对Cn/NFAT途径产生抑制效应。

TRPM8对肝细胞癌Huh7细胞侵袭和转移的影响及其作用机制

目的探讨顺时受体电位8(chronic receptor potential 8,TRPM8)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞侵袭和转移的影响及其调控机制。方法收集2017年3月—2019年12月于本院手术切除的20对配对HCC组织及其癌旁组织,采用免疫组化和qRT-PCR检测TRPM8表达情况。用shTRPM8转染HCC Huh7细胞(shTRPM8组),并设阴性对照组(shcontrol组),采用划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;免疫荧光实验检测E-cadherin和vimentin表达情况;Western blot检测AFP、TRPM8及AKT/GSK-3β/Snail信号途径相关蛋白表达情况。将构建的Huh7-LV-shTRPM8细胞通过尾静脉注入BALB/C裸鼠作为实验组(LV-shTRPM8组),以注射Huh7-LV-shNC细胞建立的裸鼠模型为对照组(LV-shNC组),6周后观察裸鼠肺转移情况。结果TRPM8在HCC组织和细胞系中均高表达(P<0.01);与shcontrol组比较,沉默TRPM8后Huh7细胞迁移和侵袭能力减弱(P<0.01),E-cadherin表达增加(P<0.001),vimentin表达降低(P<0.001),TRPM8和Snail蛋白表达水平下调(P<0.001),而AKT和GSK-3β蛋白磷酸化程度降低(P<0.001)。沉默TRPM8使裸鼠肺转移率、肺转移结节数量及肺组织中AFP和TRPM8表达下降(P<0.01)。结论TRPM8可能通过调控AKT/GSK-3β/Snail信号途径抑制HCC Huh7细胞侵袭和转移。