大黄糖络丸通过调控PI3K-Akt/NF-κB信号通路减轻糖尿病大鼠大血管炎症反应

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(PKB/Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路,探讨大黄糖络丸(RSP)防治Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠大血管炎症反应的作用机制。方法:15只雄性ZDF(fa/+)大鼠作为对照组;高脂饲料诱导成模的75只雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组,高、中、低剂量RSP组,以及二甲双胍组,每组15只。药物干预12周后,处死大鼠,分离血清,检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平;ELISA法检测大鼠血清CD4、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察大鼠腹主动脉组织病理改变;免疫组化染色检测腹主动脉中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA表达;Western blot观察腹主动脉组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-IκB和NF-κB p65蛋白水平。结果:与模型组相比,RSP显著降低糖尿病大鼠空腹血糖及LDL-C、TG和TC水平(P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.05或P<0.01),显著降低血清炎症介质表达,IL-6、TNF-α和CD4水平显著下降(P<0.05或P<0.01),腹主动脉组织病理学损伤程度显著减轻,腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA及蛋白水平,以及MCP-1、p-Akt和p-IκB蛋白水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:RSP可降糖调脂并减轻糖尿病大鼠大血管炎症损伤,其机制可能与抑制PI3K-Akt/NF-κB信号通路活化、减轻炎症反应有关。

针刺脾俞对衰老大鼠腰骨骼肌萎缩Akt/NF-κB信号通路的影响

目的观察针刺脾俞对衰老大鼠Akt/NF-κB信号通路的影响,探讨针刺脾俞改善骨骼肌萎缩以防治腰痛的可能机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、阳性药物组,每组8只。空白组大鼠每日项背部皮下注射0.9%生理盐水[300 mg/(kg·d)],其余3组大鼠每日项背部皮下注射等量的D-半乳糖,连续12周。第9周开始,针刺组取双侧脾俞进行针刺,阳性药物组采用混合氨基酸灌胃,连续4周。用HE染色对骨骼肌组织形态进行观察,TdT-mediated dUTP nick-end labeling(TUNEL)法检测骨骼肌细胞凋亡情况,ELISA检测IL-1β、IL-6T、NF-α释放量,Western Blot检测Akt、p-Akt、NF-κB、p-NF-κB的蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组骨骼肌细胞间隙变宽,部分肌细胞圆形化,肌细胞凋亡数量增多,炎性因子IL-1β、IL-6T、NF-α水平显著上升(P<0.001、P<0.01和P<0.05),p-Akt、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达水平升高(P<0.001);与模型组比较,针刺组和阳性药物组,肌间隙窄,肌细胞排列更紧密,凋亡数量减少,炎性因子IL-1β、IL-6T、NF-α水平下降(P<0.01、P<0.01和P<0.05),p-Akt、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达水平下调(P<0.001)。结论针刺脾俞可改善D-半乳糖诱导的骨骼肌衰老,并通过抑制Akt/NF-κB信号通路,降低炎症反应,减少骨骼肌细胞凋亡,这可能是针刺脾俞治疗腰痛的潜在作用机制之一。

基于人脐静脉内皮细胞的OGD/R模型研究当归-川芎药对中7个活性成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路的影响

目的探讨当归-川芎药对中7个活性成分(绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、藁本内酯)对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白及其上下游血管活性物质、黏附因子和炎症因子的调控作用。方法构建人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,采用细胞增殖试剂盒(CCK-8法)检测细胞活力,探索7个成分的最佳造模时间;通过检测乳酸脱氢酶(LDH)释放探索最佳给药浓度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测7个成分对VEGF、VCAM-1、PAI-1、NF-κB、IL-1和IL-6表达的影响;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测7个成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA表达的影响。结果HUVEC氧糖剥夺6 h再复氧为最佳造模时间。高剂量绿原酸组、阿魏酸组、洋川芎内酯H组,低、中剂量丁烯基苯酞组,中、高剂量洋川芎内酯A、藁本内酯组显著降低LDH漏出率(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中VEGF、ICAM-1、VCAM-1的表达显著降低,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H、藁本内酯部分剂量组细胞NF-κB的表达显著下降,绿原酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A部分剂量组细胞中IL-6的表达显著增加,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯A部分剂量组细胞IL-1表达显著减少,阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中PAI-1的表达量显著下降(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中ERK、VEGF、NF-κB、VEGFR2和MMP9的mRNA相对表达量显著下调,洋川芎内酯H和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中AKT的mRNA相对表达量均显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论当归-川芎中的药效成分可能通过抑制黏附因子、炎症因子和VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA的表达,从而发挥抗缺血性中风的作用。

基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨滋阴补肾方对糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的基于磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/核因子κB(PI3K/Akt/NF-κB)信号通路探究滋阴补肾方对糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响。方法将60只SPF级雌性大鼠随机分为对照组、模型组、骨化三醇组及滋阴补肾方高、中、低剂量组,每组10只。除对照组外,其余组大鼠均摘除双侧卵巢、喂食高糖高脂饲料并注射链脲佐菌素建立糖尿病合并去卵巢骨质疏松模型。造模成功后,滋阴补肾方高、中、低剂量组分别按照干药剂量20 g/kg、10 g/kg、5 g/kg灌胃滋阴补肾方药液,骨化三醇组灌胃0.1μg/kg骨化三醇,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,均1次/d,连续8周。末次灌胃结束后,股动脉取血,自动生化分析仪测定空腹血糖(FPG)、钙、磷、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)水平;腹主动脉取血,ELISA法测定糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);RT-PCR法检测骨组织中PI3K、Akt、NF-κB mRNA相对表达量。结果与对照组比较,模型组FPG、HbA1c、HOMA-IR、TG、TC水平及骨组织中NF-κB mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),FINS、血钙、血磷水平及骨组织中PI3K mRNA、Akt mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,骨化三醇组和滋阴补肾方各组FPG、HbA1c、HOMA-IR、TG、TC水平及骨组织中NF-κB mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),FINS、血钙、血磷水平及骨组织中PI3K mRNA、Akt mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),且滋阴补肾方高剂量组各指标改善情况均明显优于滋阴补肾方低剂量组(P均<0.05)。结论滋阴补肾方可通过介导PI3K/Akt/NF-κB信号通路改善糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠的骨代谢,同时可调节糖代谢,减轻胰岛素抵抗。

真武汤合五皮饮加减对糖尿病肾病患者肾脏纤维化、肾小管氧化损伤和PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响

目的:观察真武汤合五皮饮加减对糖尿病肾病患者肾脏纤维化、肾小管氧化损伤和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:选择2021年2月至2023年2月该院收治的糖尿病肾病患者100例,所有患者均采用随机数字表法分组。基础干预组50例患者(脱落3例,最终纳入47例)给予常规西医治疗,观察组50例患者(脱落2例,最终纳入48例)在基础干预组的基础上给予真武汤合五皮饮加减治疗。治疗前后对两组患者进行中医证候评价,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、结缔组织生长因子(CTGF)、活性氧(ROS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、尿白蛋白排泄率(UAE)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)水平及24 h尿蛋白定量,PI3K、Akt和NF-κB的mRNA表达水平,比较两组患者的临床疗效。结果:观察组患者的总有效率较基础干预组明显升高[97.92%(47/48)vs. 82.98%(39/47)],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者神疲畏寒、尿浊、腰膝酸冷、肢体浮肿、下肢尤甚、小便清长或短少、面色白光白、夜尿增多及五更泄泻的评分较基础干预组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者的HbA1c、UAE和24 h尿蛋白定量较基础干预组明显降低,GSH-Px水平较基础干预组明显升高,ROS、β2-MG水平较基础干预组明显降低,NF-κB mRNA表达水平较基础干预组明显降低,PI3K、Akt mRNA表达水平较基础干预组明显升高,CTGF、HA和LN水平较基础干预组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:真武汤合五皮饮加减用于糖尿病肾病患者,可调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路,减少肾小管氧化损伤,改善肾脏纤维化病情,调节HbA1c、UAE和24 h尿蛋白定量,提高临床疗效。

黄连素调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路对慢性湿疹大鼠皮肤损伤的影响

目的探讨黄连素对慢性湿疹大鼠皮肤损伤及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法60只SD大鼠分为对照组,慢性湿疹组,黄连素低、中、高剂量组和泼尼松组,每组10只。除对照组外,其余组大鼠背部涂抹2,4-二硝基氯苯(DNCB)构建慢性湿疹模型。进行湿疹面积及严重度指数(EASI)评分;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清组胺、胃泌素释放肽(GRP)、免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素(IL)-4、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察皮损组织病理学改变;Western blot法检测皮损组织PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,慢性湿疹组大鼠皮损组织受损严重,血清组胺、GRP、IgE、IL-4、IL-6、TNF-α水平以及皮损组织IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-NF-κB抑制蛋白α(IκBα)/IκBα比值升高,血清和皮损组织IFN-γ降低(P<0.05)。与慢性湿疹组比较,黄连素各剂量组和泼尼松组大鼠皮损组织病理损伤有所改善,EASI评分下降,血清组胺、GRP、IL-4、IL-6、TNF-α水平以及皮损组织IL-6、TNF-α蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα比值降低,血清和皮损组织IFN-γ升高(P<0.05),同时黄连素中、高组和泼尼松组大鼠血清IgE和皮损组织IL-4降低(P<0.05),且黄连素高剂量组效果更好;黄连素高剂量组和泼尼松组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄连素尤其是高剂量黄连素可抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路激活,减轻免疫失衡和炎症反应,改善慢性湿疹大鼠皮肤损伤。

PI3K/AKT/NF-κB信号通路调控阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征研究概况

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea,OSA)是一种慢性疾病,该病以夜间频发低氧血症和高碳酸血症为主要特点。近年来,OSA的发病率呈上升之势,得到了诸多学者的关注。现阶段认为,OSA的发生与氧化应激、炎症反应等病理生理改变密切相关。PI3K/AKT/NF-κB信号通路在调节炎症反应、氧化应激等方面具有重要地位,中医药通过调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达,可有效改善氧化应激和炎症反应,获效可观。该文阐述了PI3K/AKT/NF-κB信号通路调控OSA的具体作用机制及中医药调节该通路的研究现状,为中医药治疗OSA提供新思路。

葫芦巴碱调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路对变应性接触性皮炎大鼠免疫反应的影响

目的探讨葫芦巴碱对变应性接触性皮炎(ACD)大鼠免疫、炎性反应及PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响。方法60只SD大鼠随机分为正常组、ACD组、葫芦巴碱(低、中、高)剂量组(20、40、80 mg/kg)和PI3K抑制剂(LY294002)组(40 mg/kg),每组10只。除正常组外,其余组大鼠采用2,4二硝基氟苯(DNFB)诱导ACD模型。给药结束后,通过录像观察大鼠挠痒行为;HE染色检测大鼠耳皮肤组织病理学变化;ELISA检测大鼠血清IgE及Th1、Th2、Th17型细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17)水平;Western blot检测大鼠耳皮肤组织中炎性因子(IL-1β、IL-6)蛋白及PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果与正常组比较,ACD组大鼠挠痒次数增加,血清IgE、IFN-γ、IL-4、IL-17水平及耳皮肤组织中IL-1β、IL-6蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB比值升高(P<0.05),耳皮肤组织角化过度且可见大量炎性细胞浸润;与ACD组比较,葫芦巴碱(低、中、高)剂量组和LY294002组大鼠挠痒次数减少,血清IgE、IFN-γ、IL-4、IL-17水平及耳皮肤组织中IL-1β、IL-6蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB比值降低(P<0.05),耳皮肤组织病理损伤均有所改善,且葫芦巴碱各给药组呈剂量依赖效应;葫芦巴碱高剂量组和LY294002组大鼠上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论葫芦巴碱可抑制ACD大鼠皮肤组织中PI3K/Akt/NF-κB信号通路激活,调控Th1、Th2、Th17型免疫应答并减轻皮肤局部和全身炎性反应。

基于PI3K/AKT/NF-κB信号通路探讨自拟英黄汤对脓毒症大鼠的保护作用

目的基于PI3K/AKT/NF-κB信号通路探讨英黄汤对脓毒症大鼠的保护作用。方法2022年8—12月于河北省中医药科学院附属医院动物实验室进行实验,将240只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、地塞米松组、英黄汤低剂量组、英黄汤中剂量组、英黄汤高剂量组,每组40只。每组20只大鼠用于观察7 d内生存率,剩余20只大鼠造模给药72h后,通过检测凝血相关指标、肺组织湿重/干重(W/D)比值、BALF中总蛋白含量、肝肾功能相关指标,观察英黄汤的干预作用;通过HE染色观察英黄汤对肺、肝、肾组织的病理变化;通过检测血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α基因表达,观察英黄汤对炎性因子的影响;通过Western-blot方法检测英黄汤对肺组织中PI3K/AKT/NF-κB通路的影响。结果英黄汤中高剂量组大鼠生存率均高于地塞米松组。造模给药72 h后,与假手术组相比,模型组大鼠血清中PLT、Fib含量显著降低,PT、APTT、TT时间显著延长;BALF中总蛋白含量、W/D比值、ALT、AST、SCr、BUN水平显著增加;肺、肝、肾组织病理明显损伤;血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平及肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α基因水平显著增高;p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-P65/P65蛋白比值均显著增高。与模型组相比,地塞米松组、英黄汤各剂量组大鼠血清中PLT、Fib含量显著增加(F/P=39.161/<0.001、11.233/<0.001),PT、APTT时间显著缩短(F/P=32.933/<0.001、22.177/<0.001);BALF中总蛋白、W/D比值、ALT、AST、SCr、BUN水平显著降低(F/P=27.160/<0.001、29.291/<0.001、20.553/<0.001、10.567/<0.001、28.450/<0.001、11.374/<0.001);肺、肝、肾组织损伤明显改善;血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平显著降低(F/P=26.967/<0.001、38.238/<0.001、34.333/<0.001),肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α基因表达降低;p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-P65/P65比值显著减小(F/P=22.826/<0.001、21.432/<0.001、83.294/<0.001)。结论英黄汤可以改善脓毒症大鼠凝血功能障碍,保护肺肝肾功能,降低炎性水平,可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路活化有关。

PI3K/AKT/NF-κB信号通路在消化系统肿瘤中的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(protein-serine-threonine kinase,AKT)/核转录因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)是一种能调控细胞凋亡、增殖、存活、分化等生物学过程的细胞内信号通路,对肿瘤的发展进程有重要作用。我国消化系统恶性肿瘤的发生率和死亡率呈上升趋势,其发病隐匿且预后差,一直威胁着人类健康。本文综述PI3K/AKT/NF-κB信号通路在消化系统恶性肿瘤侵袭与转移中的作用及其调控机制,供消化系统肿瘤早期诊断和靶向治疗研究参考。

蛇床子素通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的活化增强吡柔比星对骨肉瘤细胞143B的化疗作用

目的:探讨蛇床子素通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的活化来增强吡柔比星对骨肉瘤细胞的化疗作用。方法:采用MTT法、Transwell实验分别检测蛇床子素、吡柔比星单独和联合对人骨肉瘤细胞143B增殖、迁移和侵袭能力的影响。westernBlotting方法检测PI3K、Akt、NF-κB蛋白表达水平,所有计量资料采用均数±标准差表示,采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,各组间差异应用单因素方差分析统计,多组间两两比较采用LSD分析统计,P<0.05为有统计学意义。结果:蛇床子素和吡柔比星联合用药可显著抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭能力,显著下调PI3K、Akt、NF-κB蛋白表达水平。结论:蛇床子素可能通过调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路来提高吡柔比星对人骨肉瘤143B细胞的杀伤活性。

基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨高尿酸血症合并非酒精性脂肪肝机制

目的基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路研究高尿酸血症合并非酒精性脂肪肝(HUA-NAFLD)的发病机制。方法64只SD大鼠,随机分为空白组、高尿酸血症(HUA)组、非酒精性脂肪肝(NAFLD)组、HUA-NAFLD组,每组16只,分别于8、12周末取材,对大鼠血清生化指标进行检测;苏木素-伊红(HE)和油红O染色法观察肝组织病理变化和脂质沉积情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法对肝组织PI3K/Akt和NF-κB信号通路中相关蛋白进行检测。结果与其余三组比较,HUA-NAFLD组大鼠肝指数明显升高(P<0.05),肝细胞出现大量脂肪空泡,肝索结构模糊,肝组织病变更重。与空白组比较,NAFLD组高密度脂蛋白(HDL)水平降低,HUA组尿酸(UA)、低密度脂蛋白(LDL)水平升高,HUA-NAFLD组HDL水平降低,总胆固醇(TC)、UA、LDL甘油三酯(TG)水平升高(P<0.05);与HUA组比较,NAFLD组肌酐(UREA)水平降低(P<0.05);与HUA-NAFLD组比较,HUA组TC、TG、LDL水平降低,NAFLD组UA、TG、LDL降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组比较,NAFLD组AKT、p65磷酸化水平显著升高,HUA-NAFLD组AKT、PI3K、p65、IκκB磷酸化水平显著升高(P<0.05);与HUA-NAFLD组比较,HUA、NAFLD组AKT、p65磷酸化水平显著下降,HUA组IκκB磷酸化水平显著下降(P<0.05);与HUA组比较,NAFLD组p65磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结论HUA-NAFLD组较单个疾病组生化指标异常更加明显,肝病变程度更重,PI3K/Akt/NF-κB信号通路可能在HUA、NAFLD,以及HUA-NAFLD发病过程中发挥重要作用。

羽扇豆醇调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路对骨质疏松大鼠炎性反应的影响

目的探讨羽扇豆醇(LUP)通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT)/核因子κB(NF-κB)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠炎性反应的影响。方法60只SD大鼠随机选择12只作为对照(NC)组,其余大鼠构建OP模型后,随机分为模型组(OP组)、羽扇豆醇组(LUP组,50 mg/kg)、PI3K激活剂组(740 Y-P组,10 mg/kg)、LUP+740 Y-P组。Micro-CT检测大鼠骨小梁微结构变化[包括骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)];测量骨干质量、灰质量、磷和钙水平;HE染色观察股骨病理形态;ELISA法以及实时荧光定量PCR(qPCR)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-17、IL-10、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)水平;Western blot检测股骨组织PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达。结果与NC组相比,OP组大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、干质量、灰质量、钙和磷含量、IL-10、IL-4、ALP、PINP水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-17、TRACP-5b、CTX-Ⅰ水平和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB比值显著上升(P<0.05);与OP组相比,LUP组BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、干质量、灰质量、钙和磷含量、IL-10、IL-4、ALP、PINP水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-17、TRACP-5b、CTX-Ⅰ水平和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB比值显著降低(P<0.05);740 Y-P组呈现出与LUP组相反的趋势,且PI3K激活剂740 Y-P可明显减弱LUP大鼠的上述保护作用。结论LUP可减轻OP大鼠的炎症反应和骨质流失,其作用可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB通路活化有关。

杨梅素通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路对骨性关节炎发展的影响

目的:探讨杨梅素通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路对骨性关节炎(OA)发展的缓解作用及其机制研究.方法:通过CCK-8法筛选出IL-1β诱导损伤的最适质量浓度;采用诱导损伤最适质量浓度的IL-1β构建体外骨性关节炎损伤模型,通过CCK-8测定不同浓度的杨梅素对损伤细胞存活率的影响,筛选杨梅素的最适作用浓度.细胞实验使用分离提取的软骨细胞,分为对照组、IL-1β模型组、杨梅素组;克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组细胞的凋亡能力;酶联免疫法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的质量浓度;Western blot检测各种细胞中PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况.动物实验使用SD大鼠,分为假手术组、OA模型组、杨梅素组,并通过灌胃进行给药;Masson染色观察各组大鼠软骨组织的组织结构变化;ELISA检测各组大鼠关节液中TNF-α、IL-6和IL-10的质量浓度.结果:与质量浓度为0、1、5、50、100 ng/mL的IL-1β相比,当IL-1β的质量浓度为10 ng/mL时,细胞抑制率为48.36%(P<0.01),接近半数致死量,因此IL-1β诱导损伤的最适质量浓度确定为10 ng/mL.与浓度为5、20μmol/L的杨梅素相比,当杨梅素浓度为10μmol/L时,能明显提高损伤后的软骨细胞的活性(P<0.01),因此杨梅素的最适作用浓度选择为10μmol/L;杨梅素能提高软骨细胞的增殖能力(P<0.05),降低软骨细胞的凋亡能力;同时使TNF-α、IL-6的质量浓度均减少(P<0.05),IL-10的质量浓度增加(P<0.05);杨梅素也能使软骨细胞中PI3K、AKT、NF-κB P65、IKKαβ、IKBα蛋白的磷酸化程度均下调(P<0.05),IKBα蛋白表达上调;Masson结果显示:杨梅素使受损的软骨细胞形态变规则,软骨组织的胶原纤维排列变紧密,同时使大鼠关节液中TNF-α、IL-6的质量浓度均减少(P<0.05),IL-10质量浓度增加(P<0.05).结论:杨梅素可促进软骨细胞增殖,抑制软骨细胞的凋亡,抑制骨性关节炎炎症反应,抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路的激活,明显缓解关节软骨的退变,降低骨性关节炎的进展水平.

颈通康通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路减轻大鼠颈动脉狭窄机制研究

目的 探究颈通康对重度颈动脉狭窄模型大鼠的影响及所涉及的信号通路机制。方法 将(200±20)g的SD雄性大鼠36只按随机数字表随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤组(即原方组)、颈通康组(即加味方组),每组9只。假手术组给予普通饲料喂养,颈部切开但不进行颈总动脉钳夹术,模型组、原方组、颈通康组均采用颈动脉钳夹联合高脂饮食、维生素D3注射构建颈动脉粥样硬化性狭窄大鼠模型。造模成功后,原方组予补阳还五汤原方以13.3 mg/kg剂量灌胃给药,颈通康组予颈通康以13.3 mg/kg剂量灌胃给药。假手术组与模型组则用等量生理盐水灌胃,各组均连续给药4周。干预结束后,应用qRT-PCR分析模型大鼠颈动脉组织中PI3K、AKT、NF-κB-p65 mRNA蛋白表达情况;应用Western Blot分析模型大鼠颈动脉组织中PI3K、AKT、NF-κB表达情况。结果 经Western Blot检测分析,与假手术组比较,模型组、原方组、颈通康组大鼠PI3K、AKT、NF-κB(p65)蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,原方组、颈通康组大鼠PI3K、AKT、NF-κB(p65)蛋白表达显著降低(P<0.01);与原方组比较,颈通康组大鼠PI3K、AKT、NF-κB(p65)蛋白表达显著降低(P<0.01)。经qRT-PCR检测分析,与假手术组比较,模型组、原方组大鼠PI3K、AKT、NF-κB mRNA表达显著升高(P<0.01),颈通康组PI3K、NF-κB mRNA表达显著升高(P<0.01)而AKT mRNA表达差异无统计学意义;与模型组比较,原方组、颈通康组大鼠PI3K、AKT、NF-κB mRNA表达显著降低(P<0.01);与原方组比较,颈通康组大鼠,AKT mRNA表达显著降低(P<0.01)而PI3K、NF-κB mRNA表达差异无统计学意义。结论 补阳还五汤、颈通康至少能够通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路减轻大鼠颈动脉狭窄。其中,颈通康疗效优于补阳还五汤原方。

右归丸对膝骨关节炎大鼠PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响

目的探讨右归丸对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/核转录因子kappa B(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路的影响。方法SPF级SD大鼠60只,采用改良Hulth法复制膝骨关节炎大鼠模型,将大鼠分为假手术组,模型组,硫酸氨基葡萄糖组,右归丸高、中、低剂量组,每组10只,造模成功6周后给予药物干预,右归丸高、中、低剂量组按4.8、2.4、1.2 g/kg灌胃治疗,硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g/kg灌胃治疗,假手术组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,干预8周后股动脉采血处死大鼠。HE法观察各组大鼠软骨组织病理改变并进行Mankin评分,免疫组化法检测各组大鼠软骨组织基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MMP-14)的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠软骨组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、MMP-14 mRNA的基因表达水平,Western blot法检测各组大鼠软骨组织PI3K、磷酸化Akt(phosphorylated protein kinase B,pAkt)、MMP-14和NF-κB的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠Mankin评分(4.92±0.539)、IL-6(4.66±0.02)、MMP-14(2-ΔΔCt值5.70±0.02、评分结果4.27±0.15、蛋白灰度值0.89±0.03)、PI3K蛋白灰度值(1.19±0.09)、pAkt蛋白灰度值(2.48±0.22)、NF-κB(蛋白灰度值2.14±0.17)等指标均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,右归丸高剂量组大鼠Mankin评分(3.05±0.253)、右归丸中、高剂量组MMP-14(2-ΔΔCt值3.47±0.05、1.08±0.01、评分结果3.07±0.37、0.76±0.12、蛋白灰度值0.59±0.03、0.28±0.07)和pAkt(蛋白灰度值1.51±0.13,1.30±0.07)等指标均明显降低,右归丸各干预组IL-6(2-ΔΔCt值2.27±0.09、1.65±0.05、1.15±0.04)、PI3K蛋白灰度值(0.67±0.11、0.62±0.11、0.45±0.05)和NF-κB蛋白灰度值(0.73±0.16、0.65±0.19、0.62±0.13)等指标均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论右归丸通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路中PI3K、pAkt、MMP-14和IL-6的表达达到治疗KOA的目的。

木犀草素通过调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路对骨肉瘤U2OS细胞EMT转化和细胞生物学行为的影响

目的:探讨木犀草素通过调节磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/核转录因子-kappa B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/nuclear factor-kappaB,PI3K/AKT/NF-κB)信号通路对骨肉瘤U2OS细胞(epithelial-mesenchymal transition,EMT)作用的分子机制。方法:采用不同浓度的木犀草素(10、20、40μmol/L)处理U2OS细胞,MTT法检测木犀草素对U2OS细胞增殖的影响;Transwell实验检测木犀草素对U2OS细胞迁移的作用;qPCR检测木犀草素对Bax、Bcl-2、Caspase-2 mRNA表达的影响;Western blot检测木犀草素对p-PI3K、p-AKT、p-IKK、NF-κB等PI3K/AKT/NF-κB途径相关蛋白表达的影响;免疫荧光检测木犀草素对EMT相关蛋白E-cadherin、vimentin表达的影响。结果:木犀草素可明显抑制U2OS细胞增殖(P<0.05),且具有时间-浓度依赖性;同时,可以显著抑制U2OS细胞的迁移(P<0.05);可以上调U2OS细胞内Bax、Caspase-2 mRNA表达水平(P<0.05),下调Bcl-2 mRNA表达水平(P<0.05);明显降低U2OS细胞内p-PI3K、p-AKT、p-IKK、NF-κB蛋白表达(P<0.05),同时显著抑制E-cadherin、vimentin蛋白表达(P<0.05)。结论:木犀草素可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路活化从而发挥抑制U2OS细胞增殖、迁移和EMT转化作用。

内热针对第三腰椎横突综合征大鼠炎症反应及Akt/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨内热针治疗对第三腰椎横突综合征大鼠损伤组织炎症反应及Akt/NF-κB信号通路的影响。方法:将90只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、药物组、内热针组、普通针刺组和温针灸组6组各15只,采用埋置明胶海绵的方法制作第三腰椎横突综合征模型,2周后进行为期4周的治疗。治疗后,颈静脉取血检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的含量,HE染色观察第三腰椎横突肌肉组织病理学变化以及Western blot检测损伤组织中p-Akt(S473)和NF-κB(p65)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的含量显著升高,损伤组织中炎症反应严重,且p-Akt(S473)和NF-κB(p65)蛋白上调显著。与模型组比较,各治疗组血清TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的含量降低,组织炎症反应减轻,p-Akt(S473)和NF-κB(p65)蛋白水平下降,且内热针组效果最明显。结论:内热针治疗可通过抑制Akt/NF-κB信号通路的激活,降低炎性细胞因子表达,改善第三腰椎横突综合征大鼠局部炎症反应。

补肾方药通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路抑制卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制思考

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)作为常见的生殖内分泌疾病,危害女性的生殖健康和生活质量。研究发现POI的发病机制与卵巢颗粒细胞过度凋亡相关。颗粒细胞过度凋亡会使卵泡提前闭锁,导致卵巢功能下降。同时,PI3K/Akt/NF-κB信号通路及凋亡蛋白参与凋亡过程。补肾方药能够抑制颗粒细胞凋亡,改善卵巢功能,临床疗效显著,并且对PI3K/Akt/NF-κB信号通路有调控作用。因此,本文结合相关文献报道,推测补肾方药可能通过调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路抑制卵巢颗粒细胞凋亡治疗POI,为基础研究及临床诊疗提供思路与方法。

Akt/NF-κB信号通路介导NSC23766预先处理对呼吸机相关性肺炎大鼠内皮功能的保护作用

目的基于丝苏氨酸激酶/核转录因子-κB(Akt/NF-κB)信号通路探讨NSC23766预先处理对呼吸机相关性肺炎(VILI)大鼠内皮功能的保护作用及机制。方法选取SD大鼠36只,随机分为对照组、模型组和NSC23766组,每组12只。模型组和NSC23766组大鼠均采用大潮气量法复制VILI模型;NSC23766组大鼠在连接呼吸机前经气管导管滴入NSC23766(1.5 mg/kg)预处理1 h。机械通气4 h后,观察肺组织的病理变化;检测大鼠肺组织湿重/干重(W/D)值和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-1β、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、总蛋白、白细胞数(WBC),肺组织中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA水平,Akt/NF-κB信号通路的磷酸化水平。结果模型组和NSC23766组大鼠肺组织W/D值、NO、ET-1和iNOS mRNA水平均高于对照组,且NSC23766组上述指标低于模型组(P<0.05,P<0.01)。模型组和NSC23766组eNOS mRNA低于对照组,且NSC23766组高于模型组(P<0.05,P<0.01)。模型组和NSC23766组大鼠肺组织p-Akt/Akt和p-NF-κB p65/NF-κB p65表达水平高于对照组,且NSC23766组上述指标低于模型组(P<0.01)。模型组和NSC23766组大鼠BALF中总蛋白、WBC、IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于对照组,且NSC23766组上述指标低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论 NSC23766可能通过抑制VILI大鼠Akt/NF-κB信号通路,降低肺组织炎性因子、NO和ET-1水平,保护肺血管内皮细胞结构和功能。