长链非编码RNA TFPI2AS1通过AKT通路调控胃癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA TFPI2AS1对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用及分子机制。方法:采用lipofectamine2 000转染siRNA构建两组胃癌MGC-803细胞模型:TFPI2AS1靶向转染组(si-TFPI2AS1组)和非TFPI2AS1靶向转染组(NC组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测两组TFPI2AS1、TFPI2、Bcl-2和Bax mRNA表达,细胞毒性活性检测(CCK8)和流式细胞术分别检测两组细胞增殖和细胞凋亡,Western blot检测两组p-AKT、cleaved caspase 9、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:qPCR检测结果显示,si-TFPI2AS1组TFPI2AS1和Bcl-2的mRNA表达水平明显低于NC组,TFPI2和Bax的mRNA表达水平明显高于NC组(均P<0.01)。CCK8检测结果显示,si-TFPI2AS1组细胞在培养24 h和48 h后细胞增殖能力均低于NC组(均P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,si-TFPI2AS1组细胞凋亡率显著高于NC组细胞凋亡率(P<0.01)。Western blot结果显示,si-TFPI2AS1组p-AKT、cleaved caspase 9和Bax蛋白表达水平显著高于NC组,而Bcl-2蛋白表达水平显著低于NC组(均P<0.01)。结论:TFPI2AS1可通过下调TFPI2的表达促进胃癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,其可能通过抑制AKT/cleaved caspase 9信号通路而发挥作用。

LY294002抑制TFF3阳性甲状腺乳头状癌TPC-1细胞恶性生物学行为

目的探讨PI3K/AKT通路抑制剂LY294002对肠三叶因子3(intestinal trefoil factor,TFF3)阳性甲状腺乳头状癌细胞TPC-1恶性生物学行为的影响及机制。方法不同浓度LY294002培养的TFF3过表达甲状腺乳头状癌细胞TFF3-TPC-1为实验组;TFF3-TPC-1细胞株为过表达组;野生型TPC-1细胞株为Control组。倒置显微镜观察各组细胞形态变化;生长曲线检测各组细胞增殖水平;Transwell和划痕实验检测侵袭和迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡比例;Western blot检测与通路和凋亡相关蛋白的表达。结果形态学显示,实验组细胞间隙随LY294002浓度增加而变大,且圆形透亮细胞增多。LY294002呈浓度依赖性地抑制TFF3-TPC-1细胞的增殖、侵袭和迁移并逐渐诱导细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。Western blot显示通路蛋白和抗凋亡蛋白p-Akt、p-IκB-α、NF-κB-p65、Bcl-2随LY294002浓度增加而被下调,促凋亡蛋白IκB-α、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、Bax表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论LY294002可有效抑制TFF3阳性TPC-1细胞恶性生物学行为,其机制可能与LY294002通过抑制Akt磷酸化,下调PI3K/AKT通路及下游NF-κB等转录因子活性有关。