USP5表达水平在急性髓系白血病中的意义及其对AKT/mTOR/4EBP1信号通路的调控作用研究

目的:探讨USP5在急性髓系白血病(AML)中的临床意义、功能作用和潜在下游机制。方法:基于TCGA数据库分析USP5在AML和正常组织中的表达及其与患者生存的相关性。利用慢病毒在Jurkat和HL-60细胞中敲低和过表达USP5,分别通过RT-qPCR和Western blot检测USP5 mRNA和蛋白的表达。通过CCK-8和甲基纤维素集落形成实验进行细胞增殖和生长检测,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果:与正常组织相比,USP5在AML中高表达,USP5的上调与AML患者的生存呈负相关。敲减和过表达USP5分别会抑制和促进AML细胞的增殖和集落生长。敲减USP5的Jurkat和HL-60细胞可导致细胞周期停滞和细胞凋亡,此外,敲除USP5可以抑制AKT、mTOR和4EBP1的磷酸化。结论:过表达USP5与AML患者的不良预后相关。靶向调控USP5可抑制AKT/mTOR/4EBP1信号传导,抑制AML细胞的增殖和生长。

PP242通过下调Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E信号通路与柔红霉素存在协同抗急性白血病作用

目的通过研究PP242单药及与柔红霉素(DNR)联合抗急性白血病的效应及作用机制,探寻急性白血病治疗的新方法。方法以NB4、THP-1、SUP-B15三种急性白血病细胞株为研究模型,采用MTT药物敏感试验检测PP242、DNR单药及两药联合的抗细胞增殖作用;Western Blot方法分析药物对Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E信号通路关键点蛋白磷酸化的表达水平的影响;7-甲基鸟嘌呤帽亲和分析法分析药物对eIF4F翻译起始复合物中4EBP1、eIF4E、eIF4G表达的影响;流式细胞学检测PP242的促凋亡作用。结果 (1)MTT显示PP242、DNR单药对急性白血病细胞株均有显著的抗细胞增殖作用,而100 nmol/L的PP242与DNR联合使IC_(50)下降明显,计算协同指数均小于1,表明两药存在协同作用。(2)Western Blot显示PP242可有效下调Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E轴的关键磷酸化蛋白及Mcl-1表达,而DNR却反馈上调这个通路的蛋白表达,PP242可协同DNR下调这条通路表达。(3)7-甲基鸟嘌呤帽亲和分析法显示PP242可增加eIF4E与4EBP1的结合,减少与eIF4G的结合,从而抑制eIF4F的形成,而DNR单药并没有这个作用。(4)流式细胞学显示PP242可促进细胞凋亡发生。结论 PP242单药可抑制三种急性白血病细胞株的增殖,具有明显的抗急性白血病作用,分析其可能作用机制为:通过抑制Akt/mTOR/4EBP1/e IF4E信号通路活性,抑制eIF4F翻译起始复合物形成以及促进细胞凋亡的发生。PP242与DNR联合有协同抗急性白血病作用。

健脾化瘀解毒法对结肠癌裸鼠模型癌及癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1表达的影响研究

目的研究健脾化瘀解毒法对结肠癌原位种植瘤癌及癌旁组织中蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化真核细胞起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)表达的影响。方法建立裸鼠结肠癌模型,随机分为空白组、模型组、健脾益气组、化瘀解毒组、健脾化瘀解毒组、雷帕霉素组及5-氟尿嘧啶组,每组5只。干预各组4周后,检测各组癌组织与癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平。结果与空白组比较,模型组癌组织与癌旁组织中AKT1、mTOR、p-4EBP1的表达均上调,差异有显著性(P<0.05),且AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平均为癌组织>癌旁组织>正常肠黏膜组织。与模型组比较,健脾化瘀解毒法能在一定程度上抑制结肠癌癌组织及癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05);健脾益气法、化瘀解毒法均能下调癌组织与癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1蛋白,但其降低水平不如健脾化瘀解毒法。结论健脾化瘀解毒法能够降低AKT、mTOR、p-4EBP1蛋白的表达,健脾益气法与化瘀解毒法协同增效,以获得最佳疗效。

EIF4EBP1在肿瘤中的研究进展

本综述探讨了EIF4EBP1基因在肿瘤研究中的进展,强调了其在多种肿瘤类型中的表达模式、功能作用以及作为潜在治疗靶点的重要性。EIF4EBP1,作为mTOR信号通路的关键调控因子,参与调控蛋白质合成和细胞生长。研究表明,EIF4EBP1在肾细胞癌、肝细胞癌、卵巢癌、子宫内膜癌和食管鳞癌等多种肿瘤中表现出不同的表达水平和生物学功能,其异常表达与肿瘤的发展和预后密切相关。在信号通路方面,EIF4EBP1与mTOR、AKT等通路的相互作用在肿瘤增殖、转移、凋亡逃逸和药物抗性中扮演着关键角色。此外,EIF4EBP1还通过其他信号通路如PI3K/AKT/mTOR、EGFR等影响肿瘤的发生和发展。这些发现为肿瘤的诊断、预后评估和治疗提供了新的视角。在治疗策略方面,综述讨论了针对EIF4EBP1的多种潜在治疗方法,包括mTOR抑制剂、AKT抑制剂、基因治疗以及联合治疗策略。这些策略在实验室研究中显示出显著的抗肿瘤效果,为未来的临床应用提供了希望。总之,EIF4EBP1作为一个多面性的调控因子,在肿瘤研究中具有重要的研究价值。未来的研究需要进一步阐明其在肿瘤发展中的具体作用机制,并探索其在临床治疗中的应用潜力。

pmTOR和4EBP1蛋白在慢性淋巴细胞白血病患者外周血中的表达及临床意义

目的:研究磷酸化mTOR蛋白(pmTOR)和下游特异性转录因子(4EBP1)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达及临床意义。方法:随机选取我院血液病中心30例初诊CLL患者,分别留取初次治疗前后的外周血标本,作为初发组和治疗组。另外收集20例同期健康志愿者外周血标本作为对照,qPCR法检测pmTOR和4EBP1 mRNA表达,Western blot法检测pmTOR和4EBP1蛋白表达。结果:初发组pmTOR和4EBP1 mRNA水平均明显高于治疗组和对照组(P<0.05)、治疗组高于对照组(P<0.05)。初发组中pmTOR和4EBP1 mRNA、蛋白表达均呈正相关(P<0.05)。高危及极高危组、中危组pmTOR和4EBP1表达均高于低危组(P<0.05),高危及极高危组pmTOR和4EBP1表达均高于中危组(P<0.05)。结论:CLL中存在pmTOR和4EBP1的表达升高且与CLL危险度相关,pmTOR和4EBP1有望成为CLL临床诊治与判断预后的独特标志物。

雷帕霉素及mTOR siRNA对宫颈癌HeLa细胞mTOR和4EBP1表达的影响

目的探讨mTOR蛋白与宫颈癌发生、发展过程的相关性及雷帕霉素和mTOR siRNA对宫颈癌细胞中mTOR、4EBP1表达的影响。方法应用免疫组织化学方法检测正常宫颈鳞状上皮组织、CIN组织和宫颈癌组织中mTOR蛋白的表达情况;应用RNAi技术及雷帕霉素分别处理宫颈癌HeLa细胞,运用原位杂交、免疫细胞化学技术分别检测处理前后HeLa细胞中mTOR、4EBP1 mRNA及蛋白的表达情况。结果 mTOR蛋白在30例正常宫颈上皮组织、20例CIN组织和45例宫颈癌组织中的阳性表达率分别为36.7%(11/30)、55.0%(11/20)和71.1%(32/45),正常宫颈组织、CIN组织与宫颈癌组织中mTOR阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);三种不同浓度的雷帕霉素及mTOR siRNA分别处理宫颈癌HeLa细胞24、48和72 h后,各组与相应对照组相比,mTOR、4EBP1 mRNA及蛋白的表达量均有显著下降(P均<0.05)。结论mTOR蛋白在宫颈癌组织中过表达,其过表达可能与宫颈癌的发生、发展过程相关;雷帕霉素和mTOR siRNA可抑制宫颈癌细胞mTOR mRNA及蛋白的表达,同时影响其下游4EBP1分子的表达。

雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中mTOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激体外培养的足细胞24 h建立模型。细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测不同浓度雷公藤作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。后将足细胞随机分组:(1)对照组;(2)PAN组(PAN组,PAN 50μg/ml);(3)TP组(PAN 50μg/ml+TP 10 ng/ml),予以相应刺激24 h。采用实时荧光定量PCR检测足细胞m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt、synaptopodin mRNA表达量,western blot检测足细胞p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K、p-Akt、synaptopodin蛋白表达量。结果:(1)CCK-8结果显示,PAN造成足细胞损伤时加入浓度为3、10 ng/ml雷公藤甲素浓度均使足细胞活性上升,10 ng/ml时作用最明显(均P<0.05)。(2)PAN增加m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达量,减少synaptopodin mRNA及蛋白表达水平(均P<0.05)。(3)雷公藤甲素共处理细胞后,m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达水平明显下降,而synaptopodin mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路,减轻足细胞损伤。

mTOR和P-4EBP1在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)与真核生物翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)磷酸化的表达情况及与临床病理特征相关性。方法:通过免疫组织化学染色法检测卵巢癌组织中mTOR及P-4EBP1的表达情况,利用SPSS18.0软件分析mTOR和P-4EBP1蛋白表达与卵巢癌临床病理特征及预后的相关性。结果:卵巢癌组织中存在mTOR和P-4EBP1蛋白异常高表达,阳性表达率分别为55.92%(85/152),61.28%(93/152);mTOR蛋白在卵巢癌临床Ⅲ~Ⅳ期的表达高于临床Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);mTOR和P-4EBP1蛋白在淋巴结转移卵巢癌组织中阳性表达率显著高于无淋巴结转移卵巢癌组织(P<0.05);随访死亡患者的卵巢癌组织中P-4EBP1蛋白阳性表达率显著高于存活患者的卵巢癌组织(P<0.05)。结论:mTOR和P-4EBP1蛋白过表达可能与卵巢癌的发生、发展及不良预后密切相关,mTOR和P-4EBP1有望成为卵巢癌临床诊治和判断预后独特的分子标志物。

mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与乳腺癌关系的研究

mTOR信号通路已被确定为几种癌症的致癌因素。癌症生物学的一个主要领域是基因组生物标记的发展它可以测量pi3k-akt-mtor途径的活动水平。PI3K-Akt-mTOR信号通路包含许多信号蛋白,包括Ras,PTEN,PIP,PI3K,AKTand mTOR。作为部分信号通路功能的串联功能是是由生长因子结合在细胞膜上的受体酪氨酸激酶引起的。重要的是PI3K-Akt-mTOR信号通路在癌症细胞的生长,增殖,以及生存有重要的作用,在众多癌症中被过度表达包括乳腺癌,卵巢癌和胰腺癌等。因此开发PI3K抑制剂不仅可以消灭肿瘤的生长,也可以协同其它的标记物治疗和化疗治疗相关的癌症。由于这条信号通路重要,已经有了几种相关基因组的方法来评估细胞系中PI3K-Akt-mTOR信号通路的活性以及原发性患者肿瘤的活动情况。

mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与结直肠腺癌关系的研究

磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路正逐渐成为科研工作者关注的焦点,它调控肿瘤细胞生长增殖、分化代谢、自吞噬等过程,促进肿瘤的形成。国内外的许多研究中已经证实mTOR与胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、结肠癌等消化系统恶性肿瘤的相关性。4EBP1(eukaryotic translation initi-ation factor 4E binding protein 1真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1)和S6蛋白激酶1 (protein S6 kinase 1,S6K1)是m TOR重要的下游分子,他们调节蛋白质的翻译,在结直肠腺癌的形成过程中起到重要作用,并与预后相关,可作为较为理想的分子靶点和预后指标。

强精煎介导PI3K/Akt/mTOR通路调控少精子症大鼠精子发生的实验研究

目的:探索强精煎通过介导PI3K/Akt/mTOR通路及其下游靶因子4EBP1、p70S6K,调控环磷酰胺(CTX)诱导的少精子症模型大鼠精子发生的作用机制。方法:将75只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、mTOR通路抑制剂组(雷帕霉素组)、强精煎+雷帕霉素组和强精煎组,每组15只。采用腹腔注射CTX法诱导少精子症大鼠模型。连续药物干预38 d后,剪开各组大鼠腹腔摘取睾丸,采用免疫组化法检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白及其下游通路蛋白(4EBP1、p70S6 K)、细胞增殖标记蛋白Ki-67表达;采用RT-PCT法检测睾丸组织PI3K/Akt/mTOR基因及其下游靶基因(4EBP1、p70S6K)表达。结果:与空白对照组比较,模型组、雷帕霉素组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6 K、Ki-67蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),雷帕霉素组降低尤为明显。与模型组、雷帕霉素组相比,强精煎组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6K、Ki-67蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组、雷帕霉素组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6K基因表达水平均显著降低(P<0.05)。强精煎组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6K基因表达水平明显上调(P<0.05)。结论:强精煎可能通过激活PI3K/Akt//mTOR/4EBP1/p70S6K蛋白/基因表达、激活Ki-67蛋白表达等多途径调控少精子症大鼠生精细胞的增殖,促进精子发生,提高精子数量。

4E-BP1、p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中作用的实验研究

目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70S6k、4E-BP1蛋白表达及磷酸化情况。结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28,N-8724h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72h,抑制作用逐渐增强。流式细胞术结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0～G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感。Western-blot结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87的4E-BP1和p70S6K表达下降,同时去磷酸化。结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用。

mTOR/p-4EBn,p-p70S6k信号通路对绒癌细胞株JEG-3的作用

目的:运用雷帕霉素对mTOR的特异性抑制作用,探讨mTOR信号通路对人绒癌细胞株JEG-3的作用的分子机制。方法:运用RTPCR检测雷帕霉素对其靶点mTOR的mRNA表达量的影响;用western-blot检测雷帕霉素处理后mTOR及调控的下游蛋白p-4EBP1和p-P70S6K的蛋白表达量的变化。结果:绒癌细胞JEG-3中mTOR/p-4EBP1,p-P70S6k信号通路对绒癌细胞的增殖起着重要作用。

BRD4抑制剂JQ1联合醋酸甲羟孕酮对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨BRD4抑制剂JQ1与醋酸甲羟孕酮(MPA)单独或联合作用对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:JQ1与MPA单独或联合作用于孕激素敏感的子宫内膜癌Ishikawa细胞和孕激素不敏感的子宫内膜癌HEC-1A细胞。MTT法和流式细胞仪检测药物对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用和凋亡作用。Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、PARP、cleaved PARP及mTOR/Akt通路等相关蛋白的表达。利用siRNA沉默BRD4后,MTT法检测BRD4 siRNA与MPA联用对子宫内膜癌细胞的生长抑制作用。结果:在孕激素敏感的Ishikawa细胞中,与对照组比较,JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中JQ1+MPA组的细胞增殖率最低,析因分析提示JQ1与MPA有交互作用(P<0.05);JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞凋亡率显著增加(P均<0.05),凋亡相关蛋白变化明显,其中JQ1+MPA组的细胞凋亡率增加最为显著(P<0.05),凋亡相关蛋白变化最大。利用siRNA沉默BRD4后观察联合MPA的作用显示,与对照组比较,BRD4 siRNA组、MPA组、BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率最低。结论:BRD4抑制剂JQ1联合MPA对孕激素敏感的子宫内膜癌细胞有较好的增殖抑制及凋亡作用,其可能机制与抑制mTOR/AKT通路有关。

绞股蓝总皂苷对高糖环境下小鼠肾脏足细胞自噬及mTOR/4EBP1/P70S6K信号通路的影响

目的:探索绞股蓝总皂苷(Gps)对高糖环境下肾脏足细胞自噬活性的影响。方法:将分化成熟的小鼠肾脏足细胞MPC-5随机分为低糖组、高糖组、绞股蓝组、雷帕霉素组,干预48h后,免疫荧光法检测足细胞LC3表达情况,Western Blot法检测Synaptopodin、Beclin-1、LC3、SQSTM1/P62、mTOR、4EBP1及P70S6K蛋白表达情况。结果:与高糖组比较,绞股蓝组LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达显著增高,SQSTM1/P62蛋白表达显著下降,雷帕霉素组LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达显著增高,两组mTOR、4EBP1、P70S6K蛋白表达均减显著下降(P<0.01)。结论:Gps可促进自噬从而保护高糖环境下的MPC-5,而该作用可能与其抑制了mTOR/4EBP1/P70S6K信号通路有关。

mTOR与4EBP1在喉鳞状细胞癌中的表达及相关性研究

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞始动因子4E结合蛋白l(4EBP1)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及相关性。方法:采用免疫组织化学方法检测mTOR、4EBP1在77例喉癌组织和18例癌旁组织中的表达,分析其表达与常见临床病理因素之间的关系。结果:mTOR、4EBP1在喉癌中的阳性表达率分别为54.5%、48.1%,均高于癌旁组织中的表达(P<0.05)。mTOR、4EBP1的阳性表达与淋巴结转移及组织病理学分级有显著相关性(P<0.05),而与临床分期无相关性(P>0.05)。mTOR和4EBP1在喉癌中的表达呈正相关(P<0.05)。结论:①mTOR和4EBP1的高表达与喉癌的发病、侵袭、转移有关;②mTOR和4EBP1在喉癌组织中的阳性率呈正相关,联合检测对喉癌的治疗和预后判断具有重要临床意义。

RNA干扰对宫颈癌Hela细胞中mTOR4EBP1表达及细胞侵袭力的影响

目的探讨mTOR蛋白与宫颈癌发生、发展过程的相关性和mTOR siRNA对宫颈癌细胞Hela中mTOR、4EBP1表达及细胞侵袭力的影响。方法应用免疫组织化学方法检测宫颈鳞癌组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和正常宫颈鳞状上皮组织中mTOR蛋白的表达情况;应用RNAi技术处理宫颈癌Hela细胞,运用免疫细胞化学、原位杂交等技术检测处理前后Hela细胞中mTOR、4EBP1蛋白及mRNA的表达情况;通过Boyden chamber体外侵袭实验,了解mTOR siRNA对Hela细胞侵袭力的影响。结果 mTOR蛋白在30例正常宫颈上皮组织、20例CIN组织和45例宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为36.7%(11/30)、55.0%(11/20)和71.1%(32/45),正常宫颈组和CIN组与宫颈鳞癌组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种不同浓度的mTOR siRNA分别转染宫颈癌Hela细胞24h、48h、72h,各组与各对照组相比,mTOR、4EBP1蛋白及mRNA的表达差异均有统计学意义(P均<0.05);转染mTOR siRNA的Hale细胞,穿越Matrigel的细胞数比各对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mTOR蛋白的过表达可能与宫颈鳞癌的发生、发展有关;mTOR siRNA可下调宫颈癌Hela细胞中mTOR蛋白及mRNA的表达及抑制宫颈癌细胞的侵袭能力。

红景天苷调节缺氧所致PC12细胞能量代谢障碍的机制研究

目的观察红景天苷(Salidroside)对缺氧所致的PC12细胞能量代谢障碍的影响,初步阐明红景天苷保护缺氧所致神经细胞损伤的分子机制。方法利用氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)诱导建立PC12细胞缺氧损伤模型。在诱导产生缺氧损伤模型的同时,分别给予30、60、90μmol/L红景天苷干预,MTT法检测细胞活力,ATP生物发光检测试剂盒检测ATP含量,光镜下观察各组PC12细胞形态学改变,Western blot检测mTOR-4EBP1通路激活情况。结果红景天苷可部分改善COCl2所致的PC12细胞形态学结构变化,增加缺氧条件下的PC12细胞活力(P<0.05),提高ATP含量(P<0.05),Western blot检测结果提示红景天苷可以促进mTOR以及下游蛋白4EBP1的磷酸化水平。结论红景天苷可能通过激活mTOR-4EBP1通路,从而提高ATP含量,减轻缺氧所致的PC12细胞损伤,提示红景天苷在治疗缺氧所致神经细胞损伤中具有一定的临床应用价值。

黄芪多糖抑制TGF-β1和Nox4/Akt/mTOR信号通路保护心肌重构的作用研究

目的研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对心肌重构的保护作用及机制。方法通过主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)构建心肌重构小鼠模型并使用APS进行干预。利用心脏超声成像系统,心肌组织麦胚凝集素染色、天狼星红染色及Real-time PCR评价APS对心肌重构小鼠模型的保护作用。Western blotting检测心肌组织中Nox4、TGF-β1、mTOR及Akt的表达水平,探讨APS保护心肌重构的机制。结果TAC手术4周后,TAC组小鼠左心室舒张末期后壁厚度(left ventricular end-diastolic posterior wall dimension,LVPWd)较空白对照组显著增加(P<0.01),左心室收缩功能显著下降,而APS+TAC组小鼠LVPWd较TAC组显著降低(P<0.05),左心室收缩功能明显改善。APS对TAC诱导的小鼠心体比和心胫比增加具有显著的保护作用(P<0.001)。心肌组织病理染色结果显示,TAC组小鼠心肌细胞肥大水平和心肌纤维化水平较空白对照组小鼠显著增加(P<0.01),而APS对TAC诱导的心肌细胞肥大和纤维化具有显著的保护作用(P<0.01或P<0.05)。与空白对照组比较,TAC组小鼠心肌组织中心钠素和脑钠肽的表达水平显著升高(P<0.001),而APS对此有显著的抑制作用(P<0.01或P<0.05)。进一步研究发现,APS干预对TAC诱导的Nox4、TGF-β1、mTOR及p-Akt在心肌组织中的表达具有显著的抑制作用。结论APS能够通过抑制TGF-β1和Nox4/Akt/mTOR信号通路发挥对心肌重构小鼠模型的保护作用。

蒲公英甾醇调控膀胱癌T24细胞迁移与侵袭能力的作用及机制研究

目的:探索蒲公英甾醇对膀胱癌T24细胞迁移与侵袭能力的作用及机制。方法:体外培养膀胱癌T24细胞,在其中加入不同浓度(10、20、40μg/mL)蒲公英甾醇进行干预。采用划痕实验和Transwell小室法分别观察膀胱癌细胞迁移能力及侵袭能力;Western blotting实验考察细胞中SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白的变化;ELISA试剂盒检测细胞上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2/9的水平。结果:蒲公英甾醇可抑制膀胱癌T24细胞的迁移与侵袭能力(P<0.05,P<0.01),降低细胞分泌MMP-2及MMP-9的能力(均P<0.05,P<0.01)。同时蒲公英甾醇能有效抑制膀胱癌T24细胞内基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、CXCR4、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:蒲公英甾醇通过干扰SDF-1/CXCR4信号通过,下调Akt/mTOR的传导,削弱了细胞分泌MMP-2及MMP-9的能力,从而有效抑制膀胱癌T24细胞的迁移与侵袭。