中华绒螯蟹Akt基因的cDNA克隆、序列分析及表达特征

为研究Akt基因在中华绒螯蟹蜕壳前后肌肉生长过程中的功能,应用RACE技术克隆得到编码中华绒螯蟹Akt(命名为Es Akt)的全长为2 200 bp的c DNA序列,包括159 bp的5′非翻译区(5′-UTR)、496 bp的3′非翻译区(3′-UTR)和长度为1545 bp编码514个氨基酸的编码序列。蛋白质结构域分析显示Es Akt含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的3个特征性保守结构域。多序列比对和系统发育分析显示,Es Akt与中国明对虾、凡纳滨对虾的Akt序列一致性都为0.889,在系统发育树中节肢动物Akt形成一个分支。应用荧光定量RTPCR技术分析Es Akt在性成熟中华绒螯蟹各组织及幼体不同蜕壳时期不同部位肌肉组织中转录水平上表达量的变化。结果显示,Es Akt在性成熟个体的肝胰腺、眼柄、表皮、卵巢、精巢、心脏、螯足、鳃、三角膜等组织中均有表达,其中卵巢、眼柄和精巢中表达量较高,肝胰腺中表达量最低。在幼体不同蜕壳时期不同部位的肌肉中,Es Akt表达量变化不同,步行足肌肉组织中Es Akt m RNA无显著的统计学差异。腹部肌肉组织中Es Akt m RNA水平在蜕壳前晚期D3~D4期表达量显著高于蜕壳后A^B期和蜕皮间期C期。螯足肌肉在蜕壳前晚期D3~D4期急剧下调,蜕壳后A^B期开始表达量显著升高,直至蜕皮间期C期。研究表明,Es Akt在中华绒螯蟹蜕壳过程中不同部位肌肉组织中的表达量变化与蜕壳周期密切相关,说明Es Akt参与中华绒螯蟹蜕壳诱导的肌肉萎缩、生长及重建过程。

Akt基因转染对骨髓间充质干细胞缺氧时凋亡和增殖的影响

目的采用Akt基因转染鼠骨髓MSCs探讨Akt基因是否减轻MSCs缺氧时的凋亡和提高缺氧时的增殖能力,即耐缺氧能力。方法将转染和未转染Akt基因的MSCs置于94%N2、1%O2和5%CO2缺氧箱中37℃孵育不同时间(常氧、缺氧0·5h、1h、2h、4h和8h)后,Annexin V/PI双染法行流式细胞仪分析凋亡率(apoptoticrate,AR)和死亡率(deadrate,DR)、MTT法分析细胞增殖状态、Rt-PCR和Western blot等检测Akt和p-Akt表达以及放射同位素法检测MSCs对氚标-葡萄糖(3H-G)的摄取等。结果1·Akt基因显著降低MSCs缺氧时AR和DR(P<0·01),而各缺氧时间点没有统计学意义(P>0·05);2·Akt基因显著增高MSCs常氧和缺氧(与未转染Akt基因MSCs同等条件下比较)时增殖能力(P<0·01),缺氧时增殖能力显著低于常氧时(P<0·01);3·Akt基因显著增高常氧时MSCsAkt mRNA(P<0·01)和蛋白(P<0·01)表达,而不增高p-Akt蛋白(P>0·05)表达;Akt基因显著提高缺氧时p-Akt蛋白(P<0·01)表达,而不提高常氧时p-Akt蛋白(P>0·05)表达;4·Akt基因显著增高MSCs常氧和缺氧(与未转染Akt基因MSCs同等条件下比较)时3H-G的摄取(P<0·01),缺氧时3H-G的摄取显著性低于常氧培养时(P<0·01);3H-G的摄取与细胞增殖显著正相关(r=0·79,P=0·015)而与细胞凋亡显著负相关(r=-1·47,P=0·023)。结论Akt基因转染可显著提高MSCs耐缺氧能力,此可能与缺氧时改善MSCs葡萄糖摄取等有关。

水产动物Akt基因研究进展

Akt(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase)是一种丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)蛋白激酶,也称为蛋白激酶B(PKB),可以磷酸化多种转录因子,在细胞增殖、细胞免疫应答、细胞代谢调控、细胞发育及存活等过程中发挥重要作用。目前有关水产动物Akt基因及其生物学功能的研究处于起步阶段,资料尚缺乏,本研究中就近年来水产动物Akt基因的序列特征、进化特点、参与的主要通路,以及参与调控鱼类的胚胎发育过程、甲壳类与贝类的免疫防御过程等生物功能等进行综述,指出今后可利用同源克隆或基因组数据挖掘技术获得更多水产动物的Akt基因信息,以便系统和全面地了解该基因在水产动物中的系统进化特点和规律,深入探究不同生理、病理条件下,不同水产动物的Akt基因的响应规律及该基因与其下游靶基因的互作机制,进一步筛选和挖掘能够调控水产动物Akt基因表达的表观遗传调控因子。本研究结果可为充分认识和利用水产动物Akt基因的生物学功能提供更为丰富的资料和线索。

AKT基因被RNA干扰抑制后对卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响

目的通过RNA干扰技术阻断卵巢癌SKOV3细胞中AKT基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,分为对照组、空白载体组与RNA干扰组三组,采用MTT法与流式细胞仪AnnexinV/PI法检测并评价AKT基因干扰后对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。结果 MTT结果显示RNA干扰组细胞增殖能力较对照组与空白载体组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),空白载体组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪AnnexinV/PI法检测结果显示,RNA干扰组细胞凋亡率高达到(79.52±2.31)%,较对照组与空白载体组明显升高,约是空白载体组与对照组的3倍,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论靶向AKT基因的小干扰RNA(siRNA)可有效地抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是卵巢癌的治疗新方法。

Akt基因转染的骨髓间充质干细胞对心力衰竭大鼠的心脏自主神经保护效应

目的探讨Akt基因转染的骨髓间充质干细胞(Akt-MSCs)和单纯骨髓间充质干细胞(s-MSCs)移植是否可调整心脏交感神经和胆碱能神经的再生和平衡。方法阿霉素诱导慢性心力衰竭模型完成后,大鼠被随机分为Akt-MSCs组(n=11)s、-MSCs组(n=11)和对照组(n=12),各组分别经尾静脉给予Akt-MSCs、s-MSCs(2×106/100μL PBS)、等量PBS。第4周检测心脏超声、去甲肾上腺素(NE)和胆碱乙酰基转移酶(ChAT)。结果 (1)在Akt-MSCs组和s-MSCs组,病死率和射血分数(EF)均显著低于对照组,而Akt-MSCs组的EF改善最为显著(P<0.05);(2)与对照组相比,Akt-MSCs和s-MSCs均可显著降低组织NE水平,且Akt-MSCs组NE值显著低于s-MSCs组(P=0.000);(3)Akt-MSCs组和s-MSCs组间ChAT水平没有统计学意义,但两组均显著高于对照组。结论 MSCs移植尤其是Akt-MSCs移植可通过调整心脏神经纤维再生而优化心力衰竭时的周围神经平衡。

AKT基因介导的小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立

目的通过尾静脉高压注射含有AKT/SB基因质粒的方法,构建一种新型的小鼠非酒精性脂肪肝模型。方法将40只雌性FVB/N小鼠随机分为正常组(n=15),模型组(n=15),对照组(n=5),治疗组(n=5)。正常组与模型组分别给予尾静脉高压注射生理盐水和AKT/SB质粒,于第1、2、3周分批处死,每批处理5只。对照组与治疗组给予尾静脉高压注射AKT/SB质粒,第3周治疗组开始予以白藜芦醇灌胃(0.04g/kg),对照组予以等量0.5%CMC-Na溶液灌胃,第5周处死全部对照组和治疗组小鼠。检测小鼠体重,肝湿重,肝指数,血清ALT、AST、TG、TC水平及肝组织中脂肪合成相关蛋白的表达水平,肝脏组织切片进行病理学观察,用以评价不同组别小鼠的病理生理变化。结果模型组小鼠2周后就出现肝功能损伤,脂质代谢紊乱,肝脏脂肪变性明显增加,并出现纤维化和明显的炎性浸润,且造模时间越长,病变程度越严重。治疗组小鼠和对照组小鼠相比,血清中ALT、AST、TC水平均有不同程度的下降,肝组织中脂肪合成相关蛋白的表达水平有所下降,且肝脏切片染色观察脂肪形成明显减少。结论通过尾静脉高压注射方法在肝脏表达AKT基因,FVB/N小鼠在3周内可形成病变程度逐步加重的非酒精性脂肪肝模型。

Akt基因对肌肉细胞发育的表观调控

Akt是真核细胞中非常重要的丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、增殖、分化、代谢和细胞运动方面都有重要作用。论文从Akt结构与功能、Akt调控成肌细胞增殖与分化、Akt调控表观修饰、肌细胞分化与组蛋白甲基化、Akt调控成肌细胞基因表达、问题与展望等方面论述了Akt基因对肌肉细胞发育的表观调控,以期为畜禽肌肉发育和分化研究提供依据。

Texel和乌珠穆沁绵羊妊娠中后期胎儿背最长肌中AKT基因的发育表达模式

选择绵羊胎儿期骨骼肌中表达稳定性高的内参基因,探讨AKT基因在绵羊妊娠中后期背最长肌中的发育性表达模式。以Texel和乌珠穆沁绵羊为研究对象,采用荧光定量PCR技术检测SDHC、YWHAB、RPLPO、RPS18、B2M 5个内参基因的mR-NA表达水平,同时检测AKT基因mRNA丰度在其胎儿期70、85、100、120和135 d间的表达变化,并分析其在品种间和不同生长阶段间的表达差异及其对肌肉生长发育的影响。5个内参基因的定量结果经GeNorm程序统计学分析处理,表达稳定性由高到低排序为RPS18>RPLPO>SDHC>B2M>YWHAB,确定用RPLPO、RPS18和SDHC 3个基因校正绵羊胎儿期不同生长阶段的目的基因表达量。在5个发育阶段中,两个品种绵羊胎儿AKT基因表达模式有一定差异,AKT表达量在Texel绵羊85和120 d时均有明显的增加,而在乌珠穆沁绵羊的100 d时出现1个表达峰,这与试验对两品种绵羊组织学分析的结果是一致的,进一步印证了Texel绵羊在85和120 d以及乌珠穆沁绵羊在100 d时存在肌发生波的推测。以上结果初步揭示绵羊妊娠中后期生长发育过程中AKT基因表达的发育性变化模式和品种差异,为深入研究AKT基因的作用机制提供了理论基础。

山茱萸纳米制剂对衰老小鼠脑组织akt基因mRNA表达的影响

目的：探讨山茱萸纳米制剂对自然衰老小鼠脑组织akt基因mRNA表达的影响。方法：以衰老小鼠（11~12月龄）、青年小鼠（2~3月龄）为研究对象,灌服山茱萸纳米制剂,采用RT-PCR方法检测akt基因mRNA的表达。结果：衰老小鼠脑组织akt基因mRNA表达量较青年小鼠低,山茱萸纳米制剂可以不同程度的提高衰老小鼠脑组织akt基因mRNA的表达。结论：山茱萸纳米制剂显著提高衰老小鼠脑组织akt基因mRNA的表达,使衰老小鼠脑组织akt基因mRNA表达趋于年轻化。

荷载Akt基因的PEG-PLGA/DOPE纳米粒的制备及对大鼠缺血性脑损伤的影响

目的探讨荷载Akt基因的聚乙二醇-乳酸羟基乙酸共聚物/二油酰磷脂酰乙醇胺(PEG-PLGA/DOPE)纳米粒(Akt-NPs)对脑缺血-再灌注(I-R)诱导的大鼠海马CA1区神经细胞损伤及血红素加氧酶1(HO-1)、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响。方法通过复乳法制备PEG-PLGA/DOPE纳米粒并对其进行表征。将48只SD大鼠随机均分为假手术组(A组)、全脑I-R组(B组)、I-R+Akt-NPs组(C组)和I-R+空载PEG-PLGA/DOPE纳米粒组(D组)。采用焦油紫染色和TUNEL染色检测全脑I-R后5d各组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的情况,免疫印迹法检测各组HO-1和Caspase-3的表达。结果制备的纳米粒能够较好地荷载Akt基因。I-R后5d时,与A组相比,B组大鼠脑海马CA1区神经细胞凋亡率上升(P<0.05),HO-1表达减少(P<0.05),Caspase-3表达增加(P<0.05);与B组相比,C组大鼠脑海马CA1区神经细胞凋亡率下降(P<0.05),HO-1表达增加(P<0.05),Caspase-3表达减少(P<0.05)。结论 Akt-NPs减轻大鼠海马CA1区神经细胞的缺血性损伤作用与上调HO-1和下调Caspase-3表达有关。

鸡Akt基因mRNA SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为快速检测鸡细胞的增殖能力,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术,建立鸡Akt基因mRNA的定量分析方法。根据GenBank中原鸡Akt基因和鸡β-actin基因序列,设计合成特异性引物,应用RT-PCR技术从DF-1细胞中扩增出目的基因的DNA片段,并将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,构建重组质粒pMD18-Akt和pMD18-β-actin。分别以重组质粒pMD18-Akt和pMD18-β-actin为标准品建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测的标准曲线。结果显示,建立的RT-PCR标准曲线具有良好的线性关系和特异的单个峰,能够对样品进行稳定可靠的定量检测。采用本方法检测DF-1-PrP和DF-1-count细胞系的Akt基因的相对表达量,前者为1.656 9×103,后者为2.257 4×102,DF-1-PrP细胞系的Akt基因表达量明显高于DF-1-cont细胞系(P<0.01),说明PrPC及Akt在DF-1细胞系中的表达量呈正相关。结果表明,本研究建立的鸡Akt RT-PCR检测方法能够通过对Akt基因的转录量进行检测而评价鸡细胞的增殖能力。

体外Akt基因转染对骨髓间充质干细胞葡萄糖转运载体-4表达和易位的影响

目的探讨葡萄糖转运载体(GLUT)-4是否参与骨髓间充质干细胞(MSCs)的葡萄糖转运以及Akt基因转染提高MSCs耐缺氧能力是否与GLUT-4易位和表达有关。方法将经Akt基因转染和未转染的MSCs均行常氧(5%CO2)和缺氧(94%N2、1%O2和5%CO2)37℃孵育8 h。放射同位素法检测氚标-脱氧葡萄糖(3H-G)的摄取量,免疫细胞化学染色、Western blot和RT-PCR分别检测GLUT-4的蛋白质和mRNA表达。结果①缺氧转染组的3H-G摄取量是缺氧非转染组的(1.39±0.13)倍(P<0.05),但仍低于常氧非转染组(P<0.05)。②MSCs在常氧或缺氧、Akt基因转染或无转染的条件下均可表达GLUT-4蛋白。与常氧非转染组比较,缺氧非转染组GLUT-4 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。③与缺氧非转染组比较,缺氧转染组的GLUT-4 mRNA〔(1.756±0.152)倍〕和蛋白〔细胞总GLUT-4蛋白(1.653±0.312)倍,细胞膜GLUT-4蛋白(2.041±0.258)倍〕的表达水平明显提高(P<0.05),且GLUT-4蛋白易位明显;但与常氧非转染组比较,其GLUT-4 mRNA和蛋白的表达水平仍较低(P<0.05)。④MSCs的3H-G摄取量与细胞膜中GLUT-4蛋白的表达呈正相关(r=0.415,P=0.001)。结论GLUT-4可能参与MSCs的葡萄糖转运,Akt基因提高MSCs耐缺氧能力可能与提高GLUT-4的表达和易位有关。

阳离子脂质体转染Akt基因对缺血性心脏病细胞凋亡的影响

目的研究转染基因Akt对心肌细胞凋亡的影响。方法培养新生SD大鼠心肌细胞;提取人Akt质粒,用脂质体将其转染心肌细胞。实验分5组:空白对照(A)组、缺血-再灌注损伤对照(B)组、Akt基因(C)组、阳离子脂质体空载体(D)组和Akt抑制剂(E)组;各组进行模拟缺血-再灌注后测定乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞活性、细胞凋亡率及Akt、Bcl-2、NF-κB p65蛋白表达。结果C组LDH含量较B组、D组和E组明显减少(P<0.05),细胞活性高(P<0.05),细胞凋亡率低(P<0.05),Akt、Bcl-2与NF-κB p65蛋白表达增加(P<0.05)。结论细胞凋亡参与了心肌缺血-再灌注损伤过程,转染Akt基因可减少缺血-再灌注损伤心肌细胞凋亡率。

AKT1基因多态性与利培酮治疗精神分裂症8周疗效的关联研究

目的:探讨AKT1基因多态性与利培酮治疗首发、未用药精神分裂症8周后疗效的关联。方法:共入组150例符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-IV)诊断标准的汉族精神分裂症门诊或住院患者,其中完成利培酮(治疗剂量4~6 mg/d)治疗8周者为128例。采用治疗8周后阳性与阴性症状量表(PANSS)减分率评估药物疗效;采用DNA测序方法,在128例汉族精神分裂症患者中,检测AKT1基因4个单核苷酸多态性(SNP)位点(rs1130214、rs10149779、rs1130233、rs2494732)的基因型,并采用数量性状位点分析方法(QTL)探索AKT1基因多态性与利培酮治疗精神分裂症疗效的关联。结果:AKT1基因rs1130233(G>A)及rs2494732多态性(C>T)与利培酮治疗精神分裂症8周后PANSS减分率关联显著(P<0.05),经多重检验Bonferroni校正后仍有统计学意义。而rs1130214与rs10149779在本样本中与利培酮疗效的关联无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究提示在中国汉族人群中,AKT1基因多态性可能与利培酮治疗精神分裂症急性期疗效关联,有望对个体化药物疗效预测提供依据。

盐生植物小花碱茅K^+通道PtAKT1基因片段的克隆及序列分析

为研究小花碱茅(Puainellia tenuiflora)K+/Na+选择吸收分子机制,根据已报道的其他植物AKT1基因的保守序列设计一对简并性引物,以小花碱茅根部总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆出AKT1基因,以期为小花碱茅AKT1全长基因的克隆、表达调控及其作物改良的研究奠定基础。序列分析结果表明:该基因长度大约为1019 bp,编码339个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的高等植物AKT1基因序列的同源性均在85%以上,与其他AKT1的氨基酸序列同源性达73%以上。

靶向PIK3CA和AKT3基因RNA干扰对家兔SCs增殖的影响

PI3K与AKT组成的PI3K-AKT信号通路在细胞的增殖以及凋亡具有重要意义,本试验旨在研究该信号通路在家兔SCs增殖过程中发挥的作用。采用siRNA介导的PIK3CA和AKT3基因进行基因的沉默表达。结果发现对处于对数生长期的细胞转染si-PIK3CA-03或si-AKT3-01后48 h,分别对靶基因和上下游基因PTEN和Fox O1进行qRT-PCR反应,并采用CCK-8试剂盒通过酶标仪检测其在转染si-PIK3CA-03或si-AKT3-01后对细胞增殖能力的影响。结果表明:在转染si-PIK3CA-03后,PIK3CA和AKT3基因的相对表达量均显著下调,PTEN和Fox O1基因的表达量均显著上调;当转染了si-AKT3-01后,PTEN和FoxO1基因表达量均显著上调。表明PTEN、Fox O1基因与PIK3CA、AKT3基因的相对表达量呈负相关。转染实验组OD值显著低于空白对照组(P<0.05),说明通过转染实验下调PIK3CA和AKT3基因表达后,细胞增殖能力均有显著的下降。由此说明,分别抑制表达PIK3CA、AKT3基因后,靶基因的表达量显著下降,家兔SCs的增殖能力也显著下降,说明PIK3CA、AKT3基因能够正向调控肌细胞的增殖。

家兔PIK3CA和AKT3基因多态性及其与生长性状的关联性分析

【目的】探讨家兔PIK3CA和AKT3基因的多态性及其与家兔生长性状的相关性。【方法】采用PCR产物直接测序法寻找PIK3CA和AKT3基因的遗传变异,应用PCR-RFLP技术对欧洲大白兔、伊拉兔和福建黑兔3个肉兔品种共711个个体进行基因型分析。【结果】在PIK3CA和AKT3基因编码区发现了2个同义突变,分别是PIK3CA基因的c.3068 A>G,和AKT3基因的c.1213 A>C。对于c.3068 A>G,在欧洲大白兔和福建黑兔中,GG基因型个体的体重在各生长阶段均显著低于AA和AG基因型个体(P<0.05);对于c.1213 A>C位点,CC基因型的欧洲大白兔体重显著低于AA和AC基因型个体(P<0.05);综合考虑两位点,发现GGCC基因型的欧洲大白兔个体重极显著低于AAAA,AGAA和AGAC基因型个体。【结论】PIK3CA和AKT3基因与家兔的生长性能相关,可以作为家兔分子育种的遗传标记。

人akt1基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建带有flag标签的人akt1及豆蔻酰化akt1真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达及对细胞周期的影响. 方法:应用RT -PCR的方法从人牙髓组织mRNA中出akt1和myr -akt1基因,并在其C 末端带上含24bp的flag标签,克隆到pMD- 18T载体并测序,再亚克隆至真核表达载体pcDNA3. 1( +),酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染COS- 7细胞,Westernblot检测flag akt1 及flag m-yr- akt1 在细胞中的表达,同时流式细胞术观察细胞周期. 结果:测序证实从人牙髓组织mRNA中扩增出的flag akt1及flag -myr -akt1融合基因的序列以及读框全部正确;脂质体法转染COS 7后检测到预期目的蛋白的表达. 流式细胞术的结果显示当AKT1过度表达以及过度活化时对COS- 7细胞周期未产生明显影响. 结论:成功构建了C 末端带flag标签的akt1及豆蔻酰化akt1 真核表达载体,并使其在真核细胞COS- 7中表达.但是AKT1对细胞周期的调控有待进一步研究.

IFN-γ对AKT基因激活的32D细胞的影响及作用机制探讨

目的 观察IFN-γ对AKT基因激活的小鼠髓系祖细胞系（32D细胞）的影响,探讨IFN-γ对造血细胞增殖和凋亡双向调节的可能机制.方法 用质粒转导技术使32D细胞高表达AKT基因,以IFN-γ作用32D细胞,用水溶性四氮唑（WST-1）细胞增殖检测法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测磷酸化胞外信号调节激酶（p-Erk）1/2、信号转导和转录活化蛋白（Stat）3、p-Stat3的表达.结果 ①低浓度（100 U/ml）IFN-γ能促进32D细胞增殖、抑制凋亡,高浓度（1000 U/ml）IFN-γ则相反（100 U/ml处理24 h细胞密度为0.238±0.010;而1000 U/ml处理后为0.106±0.010,未处理组为0.170±0.010）.②低浓度IFN-γ可使32D细胞内Stat3磷酸化水平升高（1124±13）,高浓度时减低（601±13）.③转染激活型AKT质粒的32D细胞（激活型细胞）较其他组细胞的增殖率显著增高、凋亡率明显降低[分别为0.287±0.010、（9.57±0.17）%]（P＜0.05）.④激活型32D细胞较其他组细胞p-Erk1/2蛋白表达明显减低（P＜0.05）.结论 ①IFN-γ对32D细胞有双重作用,即低浓度促进细胞增殖、抑制凋亡,高浓度抑制细胞增殖、促进凋亡.②IFN-γ对32D细胞的双重效应可能是通过Stat3的磷酸化水平的增减实现的.③激活型AKT能明显促进32D细胞增殖、抑制凋亡,IFN-γ可通过调控AKT来调节细胞增殖及凋亡.④AKT激活后可以抑制Erk信号通路,可能是通过抑制Rafl的修饰实现的.

雄性Akt2基因缺失小鼠生殖表型研究

目的通过对雄性Akt2基因敲除纯合子小鼠(Akt2—/—)及野生型小鼠(Akt2+/+)基础指标、血清糖脂及性激素水平的评估,探讨Akt2基因缺失对糖脂代谢及睾丸功能的影响。方法雄性Akt2+/+及Akt2—/—小鼠各15只,行口服糖耐量(OGTT)实验(2 mg/kg),予动力学实验,将纯合子和野生型小鼠分别随机分为2组,空白组和刺激组,刺激组予人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激4h,空白组予等体积的生理盐水刺激4h,检测各组小鼠体重、体内脂肪重量、血脂、空腹胰岛素及生殖激素水平。结果 Akt2—/—小鼠同Akt2+/+小鼠相比,餐后随机血糖、0h、1h血糖均显著升高(P<0.05);睾丸重量显著增加(P<0.01)。性激素检测发现Akt2—/—小鼠血清雄烯二酮(A2)(P<0.01)和睾酮(T)(P<0.05)显著升高;hCG刺激后,Akt2—/—与Akt2+/+小鼠的17-羟孕酮(17-OHP)、A2和T均显著升高,但Akt2+/+小鼠的T升高更明显。结论 Akt2基因不仅影响糖代谢,同时影响睾丸功能,说明胰岛素调节糖代谢的关键信号分子可能对睾丸生殖功能同样具有重要的调节作用。hCG刺激后,同Akt2+/+小鼠相比,Akt2—/—小鼠A2和T升高的幅度较小,说明Akt2基因缺失使雄激素合成亢进,但降低了睾丸对hCG的敏感性。