USP9X对Akt磷酸化水平及血小板活化的影响

目的 探讨血小板中去泛素化酶USP9X的表达及其对血小板功能的影响。方法 通过聚合酶链式反应和免疫印记方法检测人和小鼠血小板中USP9X的表达情况;分离制备年轻小鼠和老年小鼠的血小板,检测USP9X的表达变化;采用USP9X特异性抑制剂检测USP9X对血小板聚集释放及铺展功能的影响;收集激活不同时间点的血小板蛋白裂解液,并进行免疫印记检测磷酸化Akt的变化。结果 人血小板与小鼠血小板在mRNA水平和蛋白水平均表达USP9X。相对于年轻小鼠,老年小鼠血小板中USP9X的表达明显升高(0.87±0.099 vs 1.05±0.980,P<0.05)。使用USP9X的特异性抑制剂提前30 min孵育血小板,之后检测血小板的聚集、释放及铺展功能,结果显示,相比于对照组,USP9X抑制剂处理组的血小板的聚集和释放水平明显下降(P<0.05);相比于对照组,抑制剂处理组45 min的铺展面积显著降低。最后,免疫印记结果显示,USP9X抑制剂处理组的血小板的Akt磷酸化水平明显下降。结论 人和小鼠的血小板表达USP9X,USP9X可促进血小板的聚集释放及铺展,并可影响Akt的磷酸化水平,USP9X的抑制剂或可成为潜在的临床血栓干预靶点。

黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞增殖和Akt磷酸化的影响

目的:观察黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞增殖和Akt蛋白磷酸化的影响。方法:用不同浓度的黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)干预MDA-MB-468细胞,用甲基噻唑基四唑法检测不同浓度APS干预对MDA-MB-468细胞增殖的量效和时效关系。用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞株1、2、4和7d后对磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)(Thr308)和p-Akt(Ser473)蛋白表达水平的影响,以及p53/鼠双微体2(murine double minute 2,MDM2)信号转导通路中的关键靶点p53、MDM2和人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白表达水平的影响。用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默PTEN的表达,用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞2d对p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)蛋白表达水平的影响。结果:1和0.5mg/mL的APS对MDA-MB-468细胞的增殖有明显的抑制作用。1和0.5mg/mL的APS干预1、2、4和7d后能下调p-Akt(Thr308)的表达;干预1和2d后下调p-Akt(Ser473)的表达,上调MDM2蛋白的表达;干预7d后上调p53和PTEN蛋白的表达。PTEN沉默后,APS在干预2d后对p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达没有影响,细胞增殖的抑制率低于PTEN未沉默时。结论:APS能抑制MDA-MB-468细胞的增殖,下调MDA-MB-468细胞Akt磷酸化的水平,其抑制MDA-MB-468细胞增殖的机制可能与通过对p53/MDM2正负反馈环的调节从而上调p53和PTEN蛋白的表达有关。

抑制Sema 4D表达介导的成骨前体细胞AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移中的作用

目的探讨抑制Sema 4D介导的成骨前体细胞AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移中的作用。方法通过siRNA技术构建稳定的Sema 4D低表达人乳腺癌MCF-7细胞株,采用实时荧光定量PCR检测细胞Sema 4D mRNA表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力;采用Transwell小室建立成骨细胞和乳腺癌细胞的共培养体系,茜素红染色实验检测骨矿化能力,Western blot检测AKT、p-AKT蛋白表达。结果 MCF-7细胞Sema 4D mRNA相对表达量显著高于Hs578Bst细胞(P<0.05)。Sema 4D siRNA转染后,Sema 4D siRNA组Sema 4D mRNA相对表达量显著低于Control组和NC组(均P<0.05),Control组和NC组Sema 4D mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Sema 4D siRNA组细胞增殖率显著低于NC组和Control组(均P<0.05),Sema 4D siRNA组细胞侵袭率亦显著低于NC组和Control组(均P<0.05)。MCF-7+OM组和Sema 4D siRNA+OM组骨结节面积显著低于Control+OM组(均P<0.05),Sema 4D siRNA+OM组骨结节面积显著高于MCF-7+OM组(均P<0.05)。Control+OM组、MCF-7+OM组、Sema 4D siRNA+OM组AKT蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);MCF-7+OM组和Sema 4D siRNA+OM组p-AKT蛋白表达水平显著低于Control+OM组(均P<0.05),Sema4D siRNA+OM组p-AKT蛋白表达水平显著高于MCF-7+OM组(P<0.05)。结论人乳腺癌细胞系MCF-7 Sema4D表达显著上调,并与细胞增殖、侵袭等生物学行为有关;下调Sema 4D表达,能够提高AKT磷酸化水平,减弱对成骨细胞分化的抑制作用。

大肠癌细胞PARG、PARP与AKT磷酸化状态的关系

目的:聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]可通过影响聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]和蛋白激酶B[protein kinase B,AKT]磷酸化在炎症中发挥重要作用,但在肿瘤中的作用却不清楚。本研究则对大肠癌细胞系LOVO中PARG、PARP、NF-κB和AKT磷酸化的相互关系进行了初步探讨。方法:Western blot法检测LOVO细胞PARG、PARP、NF-κB、AKT和PI-AKT473的蛋白表达。以丹宁酸为PARG抑制剂。结果:PARG抑制剂丹宁酸处理组LOVO细胞PARG、PARP、NF-κB表达降低,而PI-AKT473表达则增强,较对照组(无丹宁酸处理组)比较差异均具有显著意义(P=0.0068,P<0.0001,P<0.05,P=0.0008)。且PARG和PARP蛋白的表达呈正相关(r=0.8238,P<0.05),PARG和PI-AKT473的蛋白表达呈负相关(r=-0.8190,P<0.05)。结论:在大肠癌细胞株中,抑制PARG可以下调PARP和NF-κB,并可增强AKT的磷酸化。其在肿瘤浸润转移中,可能具有重要作用。

黄芪丹参在Akt磷酸化介导的骨骼肌线粒体生物发生中的作用

目的:探讨是否复合物黄芪丹参可以诱导大鼠骨骼肌线粒体生物发生,且相关因子PGC-1α和mtTFA的mRNA水平受Akt信号通路调节。方法:36只SD大鼠随机分为安静组和运动组,其中安静组因注射间隔时间不同分为3个亚组:安静对照不注射组(C组)6只,每3天注射一次安静对照组(C3组)6只,每5天注射一次安静对照组(C5组)6只;运动组也依注射间隔时间不同分为3个亚组:6周运动不注射组(SG组)6只,每3天注射一次联合6周运动组(SI3组)6只,每5天注射一次联合6周运动组(SI5组)6只。检测线粒体酶活性;采用SYBRGreen I逆转录实时荧光定量PCR方法测定各组大鼠骨骼肌PGC-1αmR- NA、mtTFA mRNA表达水平;Western-blotting方法检测Phospho-Akt(Ser473)。结果:同C组比较,COXⅣ活性在各组都明显增加。同SG组比较,SI3组和SI5组有显著增加。NOS的活性变化除了SG组较C组有明显减少外,其余同前。PGC1-αmRNA水平在SG组较C组有明显降低,SI3组和SI5组有显著增加;同SG组比较,SI3组和SI5组有显著增加。mt- TFA mRNA水平C5组较C组明显降低,SI3组则明显增加;同SG组比较,SI3组有显著增加。Phospho-Akt表达水平同C组比较,各组均增加;较SG组、C3、C5组比较,SI3、SI5组明显降低。结论:1)耐力运动和黄芪丹参复合物都能诱导线粒体的生物发生、维持线粒体的功能。主要通过Akt-NRF-1-mtTFA途径;Akt-NOS途径;p38MAPK-PGC1-α-NRF1-mtTFA途径。2)运动联合黄芪丹参作用下Akt磷酸化水平较两种方法的单独采用有明显下降,说明可能存在独立于Akt以外激活线粒体生物发生的信号转导通路,且不受Akt磷酸化水平的影响。3)黄芪丹参对Akt磷酸化水平的上调作用使得其有可能成为Akt的激活剂,从而可望成为对Akt磷酸化受到抑制引发的线粒体疾病的治疗药物。

PTEN及其突变体对胃癌细胞AKT磷酸化的影响

目的研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensinhomolog deleted on chromosome 10,PTEN)及其磷酸酶区域突变后对胃癌细胞AKT磷酸化的影响。方法分别转染野生型PTEN(wild-type PTEN,wt PTEN)质粒、脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性均突变的PTEN-C124S质粒、仅脂质磷酸酶活性突变的PTEN-G129E质粒至AGS细胞和BGC-823细胞。血清饥饿过夜后予各组细胞加入胰岛素或者重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)刺激,最后Western blot法检测AKT磷酸化水平。结果胰岛素和rh EGF均能刺激细胞引起AKT磷酸化,过表达PTEN基因能抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的AKT磷酸化(P<0.05),转入功能性突变体PTEN-C124S或PTEN-G129E对AKT磷酸化无抑制作用(P>0.05)。结论 PTEN在胃癌细胞中能抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的AKT磷酸化,其磷酸酶结构域N端第124或129位氨基酸发生点突变后无抑制作用。

SEMA3B对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞Akt磷酸化调控作用的实验研究

目的:研究SEMA3B作为潜在的肺癌治疗药物诱导细胞凋亡作用的机制。方法:将pc DNA3.1/pc DNA3.1-SEMA3B质粒转染至Cos7细胞,400μg/ml G418筛选后建立稳定表达SEMA3B的Cos7细胞系。利用含有SEMA3B-Cos7细胞的培养上清液、特异性siRNA、实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法,检测SEMA3B蛋白对Akt磷酸化及下游基因表达的影响及分子机制。结果:在细胞培养上清及细胞裂解液中稳定表达SEMA3B的Cos7细胞模型建立;利用含有SEMA3B蛋白的Cos7培养上清液及对照组培养上清液处理NCIH1299细胞24小时后,含有SEMA3B蛋白组可显著降低H1299细胞内p Akt-ser^(473)的蛋白表达及下游基因MDM2 mRNA表达,增加Caspase3 mRNA表达;特异性siRNA阻断IGFBP6表达,可部分消除SEMA3B抑制Akt磷酸化的作用,并影响其对MDM2和Caspase3的作用。结论:SEMA3B是通过IGFBP6介导其抑制Akt磷酸化作用及其下游基因表达,而发挥诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的作用,进一步提示在非小细胞肺癌中SEMA3B的抑癌作用及其潜在的治疗药物价值。

白血病细胞PTEN表达与AKT磷酸化水平相关性研究

本研究探讨各型白血病pten mRNA及蛋白表达与AKT磷酸化水平的关系及其在白血病发病中的作用,为今后PI3K/AKT通路抑制剂的使用提供依据。128例初发的白血病患者纳入研究,其中AML 61例,ALL 27例,CML24例,CLL16例。正常对照21例。采用RT-PCR和Western blot分别检测Jurkat细胞株、白血病患者骨髓单个核细胞pten mRNA表达,PTEN蛋白及P-AKT蛋白的表达。结果表明:Jurkat细胞株pten mRNA表达和PTEN蛋白表达水平均较正常对照组低。AML组pten mRNA表达量虽低于正常对照组,但差异无统计学意义(p=0.274);ALL、CML、CLL各组患者pten mRNA表达量低于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。AML、ALL、CML、CLL各组PTEN蛋白表达量均低于正常对照组,P-AKT蛋白表达量均高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:PTEN的低表达及P-AKT高表达在白血病的发生中可能有重要的作用,PTEN的失活主要发生在蛋白质翻译水平。

黄芪注射液及其有效成分对乳腺癌细胞增殖和Akt磷酸化的影响

目的:观察黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素对 basal-like 乳腺癌细胞株 MDA-MB-468和 MDA-MB-231增殖和磷酸化 Akt(phospho-Akt(?)p-Akt)蛋白表达的影响。方法:用不同浓度的黄芪注射液、黄芪甲苷和芒柄花素对乳腺癌细胞株 MDA-MB-468和 MDA-MB-231进行干预,以不加药物干预的细胞作为空白对照。用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察药物对细胞增殖的怍用。再选取药物抑制细胞增殖的最佳浓度,用细胞内蛋白质印迹法观察对 p—Akt(Thr308)和 p-Akt(Ser473)蛋白表达水平的影响。结果:根据 MTT 比色法实验结果确定黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素和黄芪甲苷配伍芒柄花素的最佳浓度,黄芪注射液终浓度为生药含量1 g/mL,黄芪甲苷终浓度为80 μg/mL,芒柄花素终浓度为40 μg/mL,黄芪甲苷:芒柄花素为1:4.干预 MDA-MB-468细胞1d 后,各用药组 p-Akt(Thr 308)和 p-Akt(Ser 473)蛋白表达水平下调,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);药物干预2 d 后,各用药组 p—Akt(Thr 308)水平显著下调(P<0.05),其中以芒柄花素组、黄芪甲苷+芒柄花素组下调最为明显;芒柄花素和黄芪甲苷+芒柄花素明显下调 p-Akt(Ser 473)蛋白表达。干预 MDA-MB-231细胞1 d 后,与阴性对照组比较,芒柄花素组和黄芪甲苷+芒柄花素组 p-Akt(Thr 308)蛋白水平有明显的下调;在药物干预2 d 后,黄芪注射液、芒柄花素和黄芪甲苷+芒柄花素组 p-Akt(Thr 308)蛋白水平都有明显下调。各用药组 p-Akt(Ser 473)蛋白水平与阴性对照组比较,差异无统计学意义。结论:黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素对乳腺癌细胞株 MDA-MB-468和 MDA-MB-231均有抑制增殖的作用,但抑制作用程度及其浓度存在差异,其抑制细胞增殖的机制可能与下调 Akt 的磷酸化有关。

1-甲基-4-苯基-2,3-二氢吡啶离子诱导的线粒体功能障碍抑制帕金森病细胞和动物模型中Akt磷酸化

[目的]探讨线粒体损伤与胰岛素信号传导之间的确切分子联系.[方法]用1-甲基-4-苯基-2,3-二氢吡啶离子(MPP+)抑制线粒体呼吸链复合物Ⅰ来建立帕金森病(PD)模型.用MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)及细胞内活性氧族(ROS)水平.[结果]基于细胞的线粒体活性分析系统,系统地证明MPP+诱导未分化SH-SY5Y细胞线粒体功能紊乱及ROS生成,MPP+抑制SH-SY5Y细胞的线粒体活性和核呼吸因子-1和线粒体转录因子A介导的线粒体基因表达.[结论]PD模型中可发现MPP+诱导的线粒体损伤和胰岛素信号传导,可导致黑质纹状体神经变性的恢复.

Akt磷酸化和吉非替尼对进展期非小细胞肺癌患者的疗效研究

背景 吉非替尼是一种非特异性上皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂，对未选择的非小细胞肺癌病人大约10％有效。磷脂酰肌醇3′激酶(PI3k)Akt和Ras／Raf／丝裂原-活化蛋白激酶(MAPK)是两条主要的EGFR信号传导途径，介导EGFR在细胞增殖和生存中起作用。由于这些途径的激活依赖这些组分磷酸比状态，我们评价了进展期非小细胞肺癌病人中Akt(P-AKT)和MAPK(P-MAPK)磷酸化状态与吉非替尼疗效之间的关系。

大运动量和减量训练对大鼠骨骼肌Akt及其下游信号磷酸化水平的影响

目的:研究与骨骼肌蛋白合成相关的信号Akt及其下游信号GSK3β、mTOR磷酸化水平在大运动量和减量训练过程中的变化特点。方法:SD雄性大鼠72只,随机分为12组,安静对照组6组(C1-C6),运动组6组(E1-E6),每组6只。建立3周大运动量和2减量训练跑台运动模型,在训练期间定期随机选取对照组和运动组,测试大鼠体重、腓肠肌湿重;采用脲酶UV法测试血尿素(BUN);采用Western Blot法测试骨骼肌Akt(Ser 473)、mTOR(Ser 2448)和GSK3β(Ser 9)磷酸化水平。结果:1)大运动量训练期间,与同期对照组相比,E1组体重显著降低、BUN显著升高(P<0.01);E2组体重显著降低(P<0.05),mTOR磷酸化水平显著降低(P<0.01);E3组体重显著降低、腓肠肌湿重显著降低,BUN显著升高(P<0.05),Akt磷酸化水平显著降低(P<0.05),mTOR磷酸化水平显著降低(P<0.01)。2)减量训练期间,与同期对照组相比,E4组腓肠肌湿重显著降低(P<0.05),BUN显著升高(P<0.01);E5组腓肠肌湿重显著降低(P<0.05),BUN显著升高(P<0.01),mTOR磷酸化水平显著升高(P<0.05);E6组各指标无显著差异。结论:大运动量和减量训练影响骨骼肌蛋白的合成能力,主要由Akt/mTOR信号通路调节。

姜黄素对脑缺血大鼠SOD活性及Akt磷酸化水平的影响

目的探讨姜黄素对脑缺血模型大鼠SOD酶活性及Akt磷酸化水平的影响。方法48只SD大鼠随机均分为假手术组、手术模型组、姜黄素低、高剂量组。采用Zea Longa线栓法制作模型,检测各组大鼠的SOD活性和Akt磷酸化水平。结果与假手术组比,模型组和姜黄素低、高剂量组SOD活性下降;与模型组比较,姜黄素低、高剂量组SOD活性升高(P<0.05),但姜黄素低、高剂量组的SOD活性差异无显著性(P>0.05);与假手术组比较,模型组的Akt磷酸化水平显著下降(P<0.01),姜黄素低、高剂量组Akt磷酸化较模型组显著升高(P<0.01),且高剂量组的Akt磷酸化水平较低剂量组高(P<0.01)。结论姜黄素对脑缺血的保护作用可能与提高SOD活性及Akt磷酸化水平有关。

缺血后适应调控树鼩脑缺血海马CA1区Akt(pS473)和Akt(pT308)过磷酸化的抗凋亡机制

目的观察树鼩脑缺血海马神经元Akt(p S473)和Akt(p T308)磷酸化改变对CA1区细胞凋亡的影响,探讨缺血后适应(PC)抑制细胞凋亡的可能机制。方法用光化学诱导法诱导树鼩脑缺血并建立缺血PC模型;用免疫组织化学TACS原位凋亡检测试剂盒检测皮层及海马CA1区神经元凋亡数量,用免疫组织化学法检测Akt(p S473)和Akt(p T308)表达的空间分布,用ELISA法检测海马CA1区神经元Akt(p S473)和Akt(p T308)磷酸化水平;用电子显微镜观察其神经元超微结构改变。结果脑缺血后神经元皱缩,核消失以缺血24h为著。脑缺血后4 h、24 h及72 h皮层及海马CA1区神经元TUNEL阳性细胞数明显增加(P<0.01),海马CA1区神经元Akt(p S473)和Akt(p T308)的表达及磷酸化水平明显升高,以脑缺血4 h的改变最明显,分别为(152.3±3.5)units/mg、(130.8±2.6)units/mg和(149.5±4.7)units/mg和(42.35±2.49)units/mg、(19.23±1.41)units/mg和(23.38±1.32)units/mg(P<0.01)。缺血PC组神经元损伤明显减轻,皮层及海马CA1区TUNEL阳性细胞明显减少(P<0.01),且与海马神经元Akt(p T308)活化水平呈平行改变(P<0.05)。结论树鼩脑缺血海马CA1区细胞凋亡与Akt(p S473)和Akt(p T308)过磷酸化的信号机制有关,缺血PC抑制海马神经元Akt(p S473)和Akt(p T308)双磷酸化可能具有抗凋亡作用。

磷酸化Akt蛋白表达在非小细胞肺癌中的临床意义

目的 探讨磷酸化Akt(p Akt)蛋白表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理参数及预后的关系。方法 应用免疫组织化学SP法检测2 0例正常肺组织和10 2例NSCLC患者癌组织中p Akt蛋白的表达,NSCLC患者随访时间为3～6 0个月。结果 NSCLC癌组织中p Akt蛋白表达的阳性率为4 1 2 % (42 / 10 2 ) ,而正常肺组织为阴性。p Akt蛋白阳性与肿瘤组织分化程度、临床分期以及有无淋巴结和远处转移相关。p Akt蛋白阳性表达者5年生存率和中位生存时间显著低于阴性者(分别为14 2 9%和33 33% ;14个月和32个月,Logrank检验χ2 =14 2 4 ,P =0 0 0 0 2 )。结论p Akt蛋白表达与NSCLC发展有关。

磷酸化Akt和ERK在大鼠腹主动脉瘤中的表达

目的观察磷酸化Ak(tp-Akt)和磷酸化ERK(p-ERK)在大鼠腹主动脉瘤模型中的表达情况,探讨腹主动脉瘤的发病机制。方法构建大鼠腹主动脉瘤模型并测量腹主动脉直径,计算直径扩张度;HE染色观察腹主动脉的病理改变;免疫组织化学技术和Western blot技术检测腹主动脉组织中p-Akt和p-ERK的相对表达量。结果腹主动脉瘤组主动脉扩张度(3.689±0.443)明显高于生理盐水组(1.175±0.159)和正常组(1),差异有统计学意义(P<0.05);HE染色显示,腹主动脉瘤组主动脉结构紊乱并有炎症细胞浸润;免疫组化结果和Western blot结果均显示p-Akt在腹主动脉瘤组中的表达明显高于生理盐水组和正常组(P<0.05);p-ERK表达差异不明显(P>0.05)。在腹主动脉瘤组中,p-Akt表达水平与主动脉扩张度呈正相关,p-ERK表达水平与主动脉扩张度无明显相关性。结论 PI3K/Akt信号通路可能参与腹主动脉瘤的发生与发展。

磷酸化STAT3和磷酸化Akt在黑素瘤中的过度表达与肿瘤浸润及转移相关性研究

目的:了解磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(phosphorylated signal tranducers and activators of transcription,p-STAT3)和磷酸化Akt(p-Akt)在黑素瘤中的表达及与肿瘤浸润、转移的关系;方法:采用免疫组化法检测41例黑素瘤和23例色素痣中的p-STAT3和p-Akt,评估它们与肿瘤浸润、转移的关系。结果:p-STAT3在23例色素痣中有2例表达阳性,在41例黑素瘤中有29例表达阳性;p-Akt在23例色素痣中有3例表达阳性,41例黑素瘤中有26例表达阳性,经卡方检验,P<0.05,差异有统计学意义。在黑素瘤中,p-STAT3与p-Akt的阳性表达之间呈正相关,并且p-STAT3和p-Akt的表达阳性率在有浸润或转移的黑素瘤中远高于无浸润或转移的黑素瘤,差异有统计学意义。结论:p-STAT3和p-Akt在黑素瘤的发病、浸润及转移机制中具有重要作用。

胃癌组织中5-脂氧合酶的表达及其与磷酸化Akt的相关性

目的:检测5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在胃癌组织中的表达,并探讨5-LOX对磷酸化Akt(phosphorylatedAkt,p-Akt)表达的影响.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中5-LOXmRNA表达水平;免疫印迹法(Westernblot)检测5-LOX和p-Akt蛋白的表达水平.结果:5-LOX在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(76.7%vs40%,P<0.05,mRNA水平;56.7%vs30%,P<0.05,蛋白水平).p-Akt蛋白在胃癌组织中的表达也显著高于癌旁正常组织(56.7%vs26.7%,P<0.05).相关性分析表明,胃癌组织中5-LOX蛋白表达和p-Akt水平间无明显相关性(r=0.186,P>0.05).结论:5-LOX蛋白对胃癌的发生、发展有一定促进作用,但与PI3-K/Akt信号通路无关.

非小细胞肺癌中磷酸化Akt蛋白表达研究

背景与目的表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路下游分子Akt的激活在肺癌进展的过程中有重要作用,但磷酸化Akt蛋白的表达是否与EGFR表达存在相关性以及是否能提示患者的预后目前尚无定论。本研究旨在评价国人非小细胞肺癌组织中磷酸化Akt蛋白表达的意义。方法应用组织微阵列和免疫组织化学技术检测167例NSCLC手术标本中磷酸化Akt蛋白的表达。结果磷酸化Akt蛋白在NSCLC中的阳性表达率为52.1%(87/167),阳性表达率与性别、发病年龄、吸烟情况、病理类型、分化程度、病理分期及预后之间的相关性无统计学显著意义(P>0.05),并且磷酸化Akt与表皮生长因子受体蛋白表达之间的相关性亦无统计学意义(P=0.122)。结论国人非小细胞肺癌组织中磷酸化Akt阳性表达与患者临床病理特征无明显相关性,并且磷酸化Akt蛋白对患者预后无提示意义。

非小细胞肺癌组织中磷酸化AKT的表达与细胞增殖检测

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中磷酸化AKT(p-AKT)和细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。方法应用免疫组化法检测80例NSCLC组织和35例非肿瘤性肺组织标本中p-AKT蛋白和PCNA的表达,分析p-AKT蛋白表达与NSCLC患者临床病理因素的关系。结果非肿瘤性肺组织中p-AKT蛋白不表达,在NSCLC组织中的阳性表达率为78.8%(63/80),2组比较差异有统计学意义(P<0.05);p-AKT蛋白的表达与患者年龄、性别、组织学类型及鳞癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05),仅在高中分化腺癌组织中的阳性表达率(95.0%(19/20))高于低分化腺癌组织中的阳性表达率(50.0%(8/16),P<0.05)。在NSCLC和非肿瘤性肺组织中,PCNA标记指数分别为(52.45±26.14)%和(9.57±2.20)%,2者相比差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中p-AKT蛋白的表达与PCNA呈正相关(r=0.376,P<0.05)。结论在NSCLC中存在AKT的活化,p-AKT的表达与肿瘤的高增殖活性有关。