黄连解毒汤含药血清对Toll样受体34、型及其下游信号转导通路的影响

目的:研究黄连解毒汤含药血清对细菌脂多糖和双链RNA病毒核酸类似物聚肌胞刺激的小鼠巨噬细胞株RAW264.7 Toll样受体(TLR)及其下游主要信号转导通路的影响。方法:用脂多糖、聚肌胞分别刺激RAW264.7细胞,同时给予黄连解毒汤含药血清进行干预,24 h后,取细胞培养上清液,ELISA法测定炎症因子TNF-α和IFN-β的含量,荧光定量PCR方法测定TLR3、TLR4和下游信号转导通路髓样分化因子88(MyD88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),TOLL样受体相关分子(TRAM)和TOLL样受体相关的干扰素活化子(TRIF)mRNA的表达,Western blotting法分析TLR3、TLR4蛋白的表达,同时用细胞免疫荧光法分析MyD88,TRAF-6蛋白表达的强弱,在mRNA水平和蛋白水平探讨黄连解毒汤对Toll样受体的作用机理。结果:黄连解毒汤含药血清显著降低LPS诱导的TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRlF的高表达(与单纯LPS刺激组比较,P<0.05或P<0.01);Poly(I:C)刺激后,黄连解毒汤含药血清仅对TRAM利TRIF的表达有明显的降低作用(P<0.01)。结论:黄连解毒汤能阻断TLR4高表达,阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖和非依赖两条途径(以阻断非依赖途径为主),抑制相关基因表达产物TNF-α、IFN-β过度分泌,具有TLR4拮抗剂样作用。黄连解毒汤也可直接作用于接头蛋白TRAM和TRIF,影响TLR3信号转录的MyD88非依赖性途径,抑制IFN-β的过度分泌。

TLR4信号转导通路与癫痫的研究进展

癫痫（Epilepsy,EP）是一组由大脑神经元异常放电所引起的以短暂性中枢神经系统（CNS）功能失常为特征的慢性脑部疾病。海马是中枢神经系统内对癫痫最敏感的脑区之一,癫痫发作可引起海马特定区域（如CA1、CA3）神经细胞凋亡或坏死[1],引起学习、记忆和认知损害,

内毒素诱导的TLR4信号转导通路研究进展

TLR4是内毒素(LPS)激活信号转导的受体。LPS首先与LPS结合蛋白(LBP)结合,再传递给CD14分子,形成LPS -LBP- CD14复合物,该复合物与TLR4 MD2相互作用,通过激活细胞内的信号通路而最终导致核因子- κB(NF- κB)、活化蛋白1(AP -1)等核转录因子的活化,从而诱导炎症细胞因子包括TNF- α、IL- 1、IL- 6、NO等的大量表达引发脓毒症。对TLR4的研究使我们可以从阻断TLR4信号通路中发挥毒性作用的环节来预防和治疗脓毒性休克。

Toll样受体-4依赖的信号转导通路在阿尔茨海默病发病中的作用

Toll样受体(TLRs)是生物进化过程中高度保守的一个跨膜蛋白受体家族,可特异性识别病原相关分子模式(PAMPs)。其中Toll样受体-4(TLR-4)是哺乳动物TLRs家族中首个被发现的成员。近年来,TLR-4依赖的信号转导通路在以阿尔茨海默病(AD)为代表的神经系统变性疾病发病机制中的作用日益受到关注,本文即针对TLR-4依赖的信号转导通路在AD发病过程中的作用作一综述。

SMAD4泛素化调控介导TGF-β通路信号转导的研究进展

TGF-β超家族蛋白成员作为一种多效细胞信号分子普遍存在于各种基本生物进程当中,包括诱导胚胎胚芽层生长、维持成人组织体内稳态等[1]。与其多效性相对应的,TGF-β信号通路缺陷与癌症发生、组织纤维化、生长缺陷密切相关[2]。TGF-β配体与胞膜上的跨膜激酶受体复合体结合,导致R-SMAD的丝氨酸C端残基磷酸化,磷酸化后的R-SMADs与SMAD4结合转运至胞核,与转录因子特异性启动子相结合调节基因表达.

经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及TGF-β_1水平的影响

目的:探讨经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎(KOA)患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及转化生长因子β_1(TGF-β)1水平的影响。方法:将KOA患者98例(98膝)随机分为2组各49例,对照组给予嘎日迪-15味丸治疗,实验组在对照组基础上给予经筋微创松解疗法,疗程均为2个月;观察2组治疗效果,比较2组治疗前后膝关节WOMAC评分、关节液中前列腺素E_2(PGE)2、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、TGF-β_1水平、关节软骨中Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB (NF-κB)蛋白表达。结果:总有效率实验组为89.90%,对照组为71.43%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组功能、关节疼痛、僵硬等评分均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项评分均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节积液TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节软骨MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达水平较治疗前降低,且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。结论:经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸治疗KOA疗效显著,其作用机制可能与降低MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达及TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平有关。

小檗碱调控核因子κB信号转导通路对幽门螺杆菌感染人胃癌细胞的影响

目的:研究小檗碱调控核因子κB信号转导通路对幽门螺杆菌(Hp)感染人胃癌细胞的影响。方法:建立Hp感染人胃癌细胞模型,并将其分成对照组、黄连素组、5-氟尿嘧啶组以及黄连素+5-氟尿嘧啶组。其中,对照组则予以等量生理盐水干预;黄连素组予以100μg/mL浓度小檗碱干预;5-氟尿嘧啶组予以5μg/mL的5-氟尿嘧啶干预;黄连素+5-氟尿嘧啶组则同时予以上述剂量的小檗碱以及5-氟尿嘧啶干预。比较各组Hp感染人胃癌细胞增殖情况,细胞周期的改变,核因子κB信号通路相关蛋白表达,炎症反应指标水平。结果:对照组、黄连素组、5-氟尿嘧啶组以及黄连素+5-氟尿嘧啶组干预后2 d、3 d时的胃癌细胞增殖率呈逐渐下降趋势;对照组、黄连素组、5-氟尿嘧啶组以及黄连素+5-氟尿嘧啶组感染人胃癌细胞G_(0)/G_(1)期、S期呈逐渐下降趋势,而G_(2)/M期呈逐渐升高趋势;对照组、黄连素组、5-氟尿嘧啶组以及黄连素+5-氟尿嘧啶组IκB激酶α蛋白表达水平呈逐渐升高趋势,而P65蛋白表达水平呈逐渐降低趋势;对照组、黄连素组、5-氟尿嘧啶组以及黄连素+5-氟尿嘧啶组IL-4水平呈逐渐升高趋势,而白细胞介素-6呈逐渐下降趋势,各组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:小檗碱主要是通过调控核因子κB信号转导通路相关蛋白的表达,继而发挥抑制Hp感染人胃癌细胞增殖与炎症反应的作用,值得临床重点关注。

不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

目的探讨不同剂量的天麻素(Gastrodin,Gas)对甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)依赖条件性位置偏爱(Conditioned place preference,CPP)大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。方法建立Meth(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素(10、30、100 mg/kg)干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。结果天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低(P<0.001、P<0.01或P<0.05)、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低(P<0.01或P<0.05)、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高(P<0.01或P<0.05),天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低(P<0.01)。结论天麻素干预对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的神经炎症具有保护作用,且与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

目的 研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)依赖的条件性位置偏好(conditioned place preference,CPP)大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体(Toll-like receptor 4,TLR4),减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。方法 建立MA(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242(3 mg/kg),1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA(10 mg/kg)。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。结果 与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高(P <0.001或P <0.01),IκB-α的蛋白和mRNA表达下降(P <0.01),p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高(P <0.01或P <0.05);与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降(P <0.001、P<0.01或P <0.05),IκB-α的蛋白和mRNA表达升高(P <0.01),p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降(P <0.01或P <0.05)。结论 MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。

类风湿关节炎发生发展中TNF-α信号通路与CD4^+T细胞的关系

CD4+T细胞各亚群在类风湿关节炎(RA)的发生发展过程中发挥不同的作用。其中,辅助性T细胞1(Th1)/Th2细胞、Th17/调节性T细胞(Treg)细胞比例的失衡及细胞因子白细胞介素-1(IL-1)、IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等产生的免疫损害,是导致RA慢性炎症的关键因素。TNF-α作为一种重要的促炎细胞因子在RA致病过程中起到了重要作用。TNF-α有两个受体,TNF受体1(TNF receptor 1,TNFR1)在大多数细胞上表达,而TNFR2仅在T细胞等免疫细胞上表达,调节T细胞的存活、活化和增殖。反之,T细胞对TNF-α信号通路也有影响。该文就RA的发病机制中TNF-α及其信号通路和CD4+T细胞各亚群功能的关系加以综述,为RA的防治提供新的思路。

补阳还五汤抑制TLR4信号通路减轻db/db糖尿病小鼠周围神经病变炎症反应

目的观察补阳还五汤对db/db糖尿病小鼠周围神经病变炎症反应中TLR4/MAPK/NF-κB信号通路以及炎症因子的作用,探讨其对周围神经小鼠炎症损伤的保护机制。方法将50只db/db小鼠随机分成5组:空白对照组、模型组、补阳还五汤低、中、高剂量组[1.6,3.2,6.4 g/(kg·d)],每组10只。空白对照和模型组以10 ml/kg体质量的去离子水灌胃,各给药组小鼠均以10 ml/kg体质量相应浓度的药物灌胃,每日1次,连续84 d。第84天最后一次给药后,检测小鼠足底热敏反应时间,采用ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及IL-1β的表达水平,采用Western blot法检测小鼠背根神经节中TLR4、p38 MAPK、p-P38、IκB-α、P65、p-IκB-α和p-P65的表达量。结果与空白对照组相比,模型组小鼠足底热敏反应时间显著增加(P<0.05),其血清中IL-6、IL-1β和TNF-α及背根神经节中TLR4、p-P38、p-IκB-α和p-P65蛋白的表达水平也显著增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组对比,各给药组能显著缩短小鼠足底热敏反应时间(P<0.05);血清中IL-6、IL-1β和TNF-α及背根神经节中TLR4、p-P38、p-IκB-α和p-P65表达水平下调(P<0.05)。随着剂量的增加,db/db小鼠热敏反应时间及相关炎性因子的表达水平相应降低,其中以高剂量组db/db小鼠减少较为显著。结论补阳还五汤可通过抑制TLR4、p38 MAPK及NF-κB信号转导通路的异常激活,缓解db/db糖尿病小鼠周围神经病变的炎症反应,从而保护周围神经的功能。

Toll样受体4信号传导通路在急性肺损伤发病机制中的作用

炎症反应失控是急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征重要的发病机制之一。Toll样受体4介导生成的炎症介质是急性肺损伤炎症反应中重要的分子生物学基础之一。作者就Toll样受体4的炎症信号传导通路在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用机制进行综述。

内质网应激中GRP78和ATF4-CHOP-Puma信号通路与帕金森病的关系及其治疗靶点的研究进展

内质网是真核细胞中重要的细胞器之一,与维持细胞稳态关系密切。当缺乏葡萄糖、缺氧、体内钙平衡紊乱或者发生氧化应激时,会引起细胞内未折叠蛋白或错误折叠蛋白的积累,导致内质网应激。帕金森病是一种慢性进行性脑变性疾病,典型的病理变化是黑质纹状体多巴胺能神经细胞变性丢失导致的多巴胺神经递质缺乏。目前对帕金森病的治疗多为缓解症状,但不能阻止疾病的进展。通过对内质网应激中的信号通路的研究发现:在帕金森病的发病过程中,多巴胺能神经元的选择性死亡与内质网应激有关。内质网应激过程中的中心调节因子:葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)及其下游ATF4-CHOP-Puma信号通路与帕金森病的发病过程有密切的联系,本文对GRP78及其下游ATF4-CHOP-Puma信号通路近些年来的研究进展进行综述,以期为帕金森病的治疗提供新的靶点和思路。

Toll样受体4信号通路与内毒素耐受

细菌内毒素诱发炎症反应对机体造成严重损伤，是术后病人感染死亡的重要原因。内毒素耐受现象为该病的防治提供了方向，然而其发生机制至今尚未阐明．Toll样受体4(Toll like receptor 4，TLR4)的发现使人们对内毒素耐受的分子机制有了深入的了解；内霉素预处理首先激话TLR4炎症信号通路，不仅导致轻微的炎症反应，而且刺激机体产生反馈性抑制物。限制随后严重内毒素攻击造成的损伤，从而形成内毒素耐受。这些反馈抑制物包括抗炎细胞因子（抑制炎性细胞因子的产生)，诱饵受体（抑制相应的配体)和TLR4信号通路抑制剂，这些抑割剂作用于TLR4信号转导过程中的每一个环节来阻止炎症反应。对内毒素耐受机制的理解将会对临床防治内毒素血症提供有益的帮助。

c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4激活酪氨酸激酶/信号转导与转录激活因子促进三阴性乳腺癌机制研究

目的探讨c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)激活酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路促进三阴性乳腺癌(TNBC)进展机制。方法通过生信分析GLUT4、c-Myc关联性及GLUT4与乳腺癌临床病理特征间关系。收集三阴性乳腺癌患者临床样本,免疫组织化学检测GLUT4和c-Myc表达水平。构建敲除c-Myc的MDA-MB-231细胞株,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测GLUT4表达水平。构建敲除GLUT4和同时敲除GLUT4及c-Myc的MDA-MB-231细胞株,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell检测迁移和侵袭。Western blot进一步分析c-Myc调控GLUT4对JAK/STAT的影响。正态分布计量资料比较采用独立样本t检验,多组资料组间比较采用方差分析。结果生信分析结果显示,在乳腺癌中GLUT4明显下调(P<0.01)且与乳腺癌TNM分期、病理分级、PAM50分型等相关。免疫组织化学评分结果显示,c-Myc在TNBC癌组织中表达显著高于癌旁组织(7.233比4.567,t=4.551,P<0.01),而GLUT4显著低表达(4.800比7.933,t=5.702,P<0.01)。在MDA-MB-231细胞中敲除c-Myc,RT-qPCR结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(2.486±0.273比1.070±0.140,F=55.005,P<0.01),Western blot结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(0.691±0.041比0.431±0.055,F=29.027,P<0.01)。构建GLUT4低表达的MDA-MB-231细胞株,RT-qPCR结果显示,GLUT4沉默组表达量低于阴性对照组,差异有统计学意义(0.507±0.076/0.137±0.025/0.317±0.085比1.150±0.200,F=45.016,P<0.01)。CCK-8结果显示,组细胞存活率高于阴性对照组(128.614±13.780比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01),继续敲除c-Myc后细胞存活率低于阴性对照组(70.977±5.906比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01)。流式细胞术结果显示,同时敲除GLUT4及c-Myc后细胞凋亡高于阴性对照组(12.170±1.283比3.263±0.691,F=102.946,P<0.01)。Transwell结果显示,敲除GLUT4后细胞迁移数高于阴性对照组[(237.333±14.364)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数高于阴性对照组[(257.000±9.539)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力增强,而同时敲除c-Myc和GLUT4后细胞迁移数低于阴性对照组[(67.000±14.177)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数低于阴性对照组[(91.667±13.650)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力减弱。Western blot结果显示,敲除GLUT4后c-Myc(0.814±0.060比0.447±0.028)、p-JAK2(0.629±0.038比0.380±0.030)、p-STAT3(0.698±0.029比0.288±0.016)表达量均高于相应阴性对照组(F=17.541,P<0.01),而继续敲低c-Myc后,GLUT4表达量高于单纯敲低GLUT4组(0.618±0.029比0.529±0.049,F=68.772,P<0.05),p-JAK2(0.510±0.033比0.629±0.038)、p-STAT3(0.410±0.050比0.698±0.029)表达量低于单纯敲低GLUT4组(F=68.772,P<0.01)。结论在三阴性乳腺癌中,c-Myc可抑制GLUT4表达并通过调控JAK/STAT信号通路影响肿瘤细胞的增殖侵袭和凋亡。

IRF4通过JAK/STAT信号通路调控糖尿病肾病炎症进展

目的筛选分析糖尿病肾病(DN)的差异表达基因(DEG),探讨IFN调节因子4(IRF4)在DN中的作用机制,为DN治疗寻找潜在的分子靶点。方法经基因表达综合(GEO)数据库下载GSE142025数据集[包含对照组9例与进展期DN(aDN)组21例],进行DEG筛选,行基因集富集分析(GSEA)示DEG参与的分子生物学过程。使用String及Cytoscape软件可视化DEG蛋白质相互作用网络,定量逆转录PCR(RT-qPCR)和过碘酸-希夫(PAS)染色及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)染色并进一步验证主要DEG在6例DN肾组织(DN组)和6例肿瘤切除术后癌旁正常肾组织(NC组)中的表达。结果GEO数据库筛选出1213个差异表达mRNA,其中684个上调、529个下调。GSEA及京都基因和基因组百科全书分析显示aDN组DEG在酪氨酸激酶/信号转导及转录激活因子信号通路、趋化因子信号通路、Fcγ受体介导巨噬细胞的吞噬作用信号通路、白细胞跨内皮迁移、T细胞受体信号通路明显富集。DN组肾组织中IRF4、信号淋巴细胞活化分子6和IL-2受体α亚基mRNA相对表达量均高于NC组肾组织(P均<0.001),PAS及SP染色结果与RT-qPCR一致。结论GSEA功能富集显示炎症相关通路活跃,而IRF4在DN组织中作为中枢基因表达上调,其可能参与高活跃炎症通路促进DN进展。

胃癌患者血清肿瘤标志物检测及其与microRNA-21调控JAK/STAT3信号通路的关系研究

目的:分析胃癌患者血清肿瘤标志物检测情况,并探讨microRNA-21调控胃癌细胞Janus激酶/信号转导与转录激活因子3(JAK/STAT3)信号通路的关系。方法:选择67例胃癌患者作为胃癌组,另选取67例体检健康者作为对照组,检测两组糖链抗原(Carbohydrate antigen,CA)72-4和人胃癌相关抗原(MGAg)含量。胃癌CRL-5822细胞株分为三组-microRNA-21组、microRNA-NC组与空白组。microRNA-21组、microRNA-NC组与空白组分别转染200ng/mL microRNA-21 mimic、200 ng/mL miR-NC与磷酸盐缓冲液,观察三组转染后不同时间点的细胞增殖指数、细胞凋亡指数、细胞迁移与侵袭指数以及JAK蛋白与STAT3蛋白相对表达水平。结果:胃癌组的血清CA72-4和MGAg含量、阳性率都高于对照组(P<0.05)。转染后24h与36h,microRNA-21组的microRNA-21相对表达量、细胞增殖指数、细胞迁移与侵袭指数高于空白组和microRNA-NC组(P<0.05)。转染后24h与36 h,microRNA-21组的细胞凋亡指数高于空白组和microRNA-NC组(P<0.05)。转染后24h与36h,microRNA-21组的JAK蛋白与STAT3蛋白相对表达水平都低于空白组和microRNA-NC组(P<0.05)。结论:胃癌患者多伴随有血清CA72-4和MGAg的高表达,提高microRNA-21的表达能促进胃癌细胞凋亡,抑制JAK/STAT3信号通路的激活,从而抑制胃癌细胞侵袭、迁移、增殖。