Hes1调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路的一种物理机制

基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究发状分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split 1,Hes1)调控蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)-鼠双微体2(Murine Double Minute2,MDM2)-抗癌基因p53(p53)-第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)通路的一种物理机制.研究发现,Hes1通过与PTEN结合抑制PTEN表达,并调控AKT信号.表明了Hes1蛋白的合成,以及Hes1与PTEN相互作用调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路信号,将会有效地控制细胞结果.Hes1作为AKT-MDM2-p53-PTEN信号通路中上游调节的重要因素,还可以在一定程度上通过影响p53蛋白功能,改变p53对肿瘤的抑制性.理论结果可用于预测Notch通路信号异常诱导的致癌性,并进一步揭示了Notch信号通路影响细胞AKT-MDM2-p53-PTEN通路的激活机制.

淫羊藿苷延缓衰老过程中对ATM-Chk2-p53通路的调节作用

目的观察淫羊藿苷对老年小鼠DNA损伤检验点ATM-Chk2-p53通路的调节作用。方法 21月龄C57BL/6老年小鼠随机分为老年对照组和淫羊藿苷组,同时取3月龄小鼠作为青年对照组;淫羊藿苷组小鼠给予含0.02%淫羊藿苷的饲料喂养,老年对照组和青年对照组小鼠给予普通正常小鼠饲料喂养。利用淫羊藿苷干预3个月后,在实验之前部分小鼠先进行5Gy X线照射6 h,然后所有小鼠麻醉后处死,收集标本进行相关实验。取小鼠脾脏,抽提小鼠脾组织中的总RNA,利用Real-time PCR方法检测DNA损伤检验点上关键分子ATM、Chk2和p53的mRNA表达水平;提取小鼠脾组织中的总蛋白,采用Western blot方法检测DNA损伤检验点上p-ATM、p-Chk2和p-p53蛋白的表达。结果在电离辐射情况下,老年小鼠ATM、Chk2和p53基因的mRNA表达的增高倍数明显较青年小鼠低,同时老年小鼠p-ATM、p-Chk2和p53蛋白的表达水平较青年小鼠降低;而淫羊藿苷能够提高老年小鼠在电离辐射情况下ATM、Chk2、p53基因的mRNA表达水平,并且能够提高老年小鼠p-ATM、p-Chk2和p-p53蛋白表达水平。结论淫羊藿苷能够激活DNA损伤检验点ATM-Chk2-p53通路功能,这可能是淫羊藿苷延缓小鼠衰老的重要机制之一。

神经母细胞瘤N-myc与Mdm2-p53通路的研究进展

神经母细胞瘤作为儿童最常见的颅外实体肿瘤,超过50%的病例是高危且难治的,长期生存率较低。N-myc及Mdm2-p53通路作为重要的调节因子,其表达水平的异常及功能缺失是其的发生发展及具有不同生物学行为的重要原因。研究神经母细胞瘤相关因子在其发生发展及演变过程中的分子机制对于该病的诊断、评估及治疗均有重要意义。本文就N-myc及Mdm2-p53通路的研究进展及以Mdm2-p53通路为靶向的神经母细胞瘤治疗做一综述。

莪术醇通过Sirt1-p53信号通路诱导肝星状细胞衰老减轻肝纤维化

目的探讨莪术醇对肝纤维化的治疗作用及其可能机制。方法用不同浓度莪术醇5、10、15、20、30、45、60、80和100μmol/L培养人肝星状细胞株HSC-LX224h,采用CCK-8法检测细胞活力。选择三个浓度的莪术醇10、20、30μmol/L用于后续实验。Western blot法及免疫荧光实验检测肝纤维化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α1(Ⅰ)胶原及纤连蛋白的表达;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞;实时定量PCR检测衰老标志物p16、p21、高迁移率族蛋白A1(HMGA1)及端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA表达;Western blot法检测沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)和p53蛋白表达。结果与莪术醇0μmol/L比较,莪术醇20、30μmol/L处理后,α-SMA、α1(Ⅰ)胶原及纤连蛋白的表达下调,SA-β-Gal染色阳性细胞增加,p16、p21、HMGA1 mRNA表达和p53蛋白表达增加,TERT mRNA表达和Sirt1蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。加入Sirt1激动剂SRT 17205μmol/L后,p16和p21mRNA表达降低(P<0.01)。结论莪术醇能够通过Sirt1-p53信号通路诱导肝星状细胞衰老,从而减轻肝纤维化。

衣原体感染宿主细胞后对相关信号通路影响的研究进展

衣原体(Chlamydia)是一类专性细胞内寄生的革兰氏阴性细菌,可感染宿主细胞引起多种疾病。衣原体胞内感染可导致宿主细胞多条信号通路激活,以此调控宿主细胞的生物学行为,实现衣原体自身的生长发育周期和代谢,并引起相关疾病。本文主要综述衣原体感染过程中对PI3K/AKT、MAPKs和MDM2-p53信号通路的激活及作用,为衣原体致病机制及防治研究提供参考。

p53蛋白泛素化修饰的研究进展

p53具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,但是细胞内p53蛋白的堆积反而加速细胞衰老或凋亡,因此对p53进行严格的调控显得格外重要.泛素化、磷酸化和乙酰化是p53蛋白最主要的几种修饰形式,但近来研究表明泛素化对p53调控发挥着中心作用.MDM2是主要的负调节因子,其具有泛素连接酶的活性,早先的研究认为MDM2的作用主要是特异性结合p53并介导其在蛋白酶作用下降解,但近来的研究发现MDM2还可以介导p53的核-浆交换,这种现象在DNA损伤时尤为明显.推测MDM2介导p53的泛素化在体内可能发挥着多种调控功能.

羽扇豆醇介导MDM2-p53通路对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨羽扇豆醇介导鼠双微基因2(Mouse double microgene 2,MDM2)-p53通路对胃癌细胞生物学行为的影响及相关机制。方法:对数生长期的胃癌小鼠MFC细胞株随机分为三组。实验1组与实验2组给予10 mg/L和20 mg/L的羽扇豆醇处理,对照组以等体积的1×磷酸盐缓冲液处理。对比三组MFC细胞细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭,及MDM2-p53通路蛋白表达。结果:细胞处理后6 h与12 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移与侵袭指数、MDM2蛋白相对表达水平显著低对于对照组,实验2组也低于实验1组,对比差异都有统计学意义(P<0.05)。细胞处理后6 h与12 h,实验1组与实验2组的细胞凋亡指数、p53蛋白相对表达水平显著高于对照组,实验2组也高于实验1组,对比差异都有统计学意义(P<0.05)。结论:羽扇豆醇能促进胃癌细胞p53蛋白的表达,抑制MDM2蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,抑制胃癌的增殖、侵袭与转移,且具有剂量依赖性。

miRNA-123介导mdm2-p53通路调节胃癌细胞增殖与凋亡的作用研究

目的 探讨miRNA-123介导mdm2-p53通路调节胃癌细胞增殖与凋亡的作用。方法 选取对数生长期的CRL-5822细胞,随机分为miRNA-NC组、miRNA-123组和对照组,miRNA-NC组转染miRNA-123-mimic, miRNA-123组转染miRNA-NC,对照组行常规培养(不转染)。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室试验检测细胞侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测mdm2与p53蛋白表达。结果 转染后,miRNA-123组较miRNA-NC组和对照组,增殖指数和侵袭均偏低,差异均有统计学意义(均P<0.05);对照组和miRNA-NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miRNA-123组较miRNA-NC组和对照组,细胞凋亡指数偏高,差异均有统计学意义(均P<0.05);对照组和miRNA-NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞转染后24h与36h, miRNA-123组的mdm2蛋白相对表达水平低于对照组和miRNA-NC组,p53蛋白相对表达水平高于对照组和miRNA-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.05);对照组和miRNA-NC组的mdm2和p53蛋白相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 胃癌组织中的miRNA-123过表达,可抑制mdm2蛋白表达,促进p53蛋白表达,其作用机制与mdm2-p53通路调节有关,从而促进细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖与侵袭。

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白调控MDM2-p53通路抑制细胞凋亡的研究

目的探讨沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对细胞凋亡的影响,以及与MDM2-p53通路的关系,为阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据。方法用不同浓度的pORF5质粒蛋白以不同时间的刺激TNF-α预处理的HeLa细胞,采用Hoechst 33342染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blot检测p53的表达水平以及鼠双微体2(MDM2)的磷酸化水平;采用间接免疫荧光法分析MDM2在细胞内的定位;分别经MDM2抑制剂Nutlin3a预处理Hela细胞1 h,pORF5质粒蛋白刺激HeLa细胞24 h,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平及MDM2磷酸化水平。结果 pORF5质粒蛋白能使TNF-α诱导的细胞凋亡率降低29%;p53蛋白的表达与pORF5浓度呈现出一定的时间和浓度依赖性,当pORF5浓度达10μg/mL时,p53的表达水平随pORF5浓度的升高而显著降低(P<0.05);pORF5刺激Hela细胞8 h后p53表达开始下调,并且随时间的延长,p53的蛋白表达显著减少(P<0.05);pORF5质粒蛋白刺激HeLa细胞15 min后,MDM2开始发生磷酸化反应,30 min达到峰值;间接免疫荧光试验检测显示pORF5质粒蛋白可促进MDM2发生核转位;MDM2抑制剂Nutlin3a能上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2的表达,并能促进细胞凋亡,Nutlin3a处理组细胞凋亡率较对照组增加约11%(P<0.05)。结论 pORF5质粒蛋白通过激活MDM2-p53通路促进Bcl-2蛋白的表达和降低Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡。

预知子种子提取物对核糖体蛋白抑制HepG2肝癌细胞增殖调控作用研究

目的预知子是临床常用抗癌中药,具体作用机制仍不明确.本研究观察预知子种子提取物干预HepG2肝癌细胞后,对核糖体蛋白mRNA、蛋白水平及Mdm2-p53信号通路关键蛋白影响,部分明确预知子抑制肿瘤细胞生长的核糖体蛋白相关作用机制.方法 HepG2细胞中分别给予预知子种子提取物对照组0μg/mL、低浓度组375μg/mL和高浓度组750μg/mL,观察对细胞生长活力和周期影响,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测12个核糖体蛋白及p53 mRNA变化,蛋白质印迹法检测典型核糖体蛋白RPS26、RPSA、Mdm2、p53和细胞周期蛋白变化.结果预知子种子提取物干预后,对照组、低浓度组和高浓度组HepG2细胞活力分别为(100.000±1.509、105.060±1.000和61.130±0.700),差异有统计学意义,F=425.760,P<0.001.PCR法检测结果显示,高浓度组RPSA(F=4959.917,P<0.001)、RPS3A(F=725.900,P<0.001)、RPS8(F=350.515,P<0.001)、RPS13(F=198.316,P<0.001)、RPS16(F=41.693,P<0.001)、RPS29(F=536.835,P<0.001)、RPL6(F=119.226,P<0.001)、RPL10(F=49.339,P<0.001)、RPL15(F=35.603,P<0.001)、RPL17(F=188.221,P<0.001)和RPLP0(F=221.837,P<0.001)等11个核糖体蛋白mRNA表达下调,RPS26(F=330.023,P<0.001)mRNA表达上调.蛋白质印迹法结果显示,RPS26(t=7.365,P=0.002)、RPSA(t=4.654,P=0.010)和Mdm2(t=4.048,P=0.016)表达下调,p53蛋白水平(t=3.185,P=0.033)和mRNA水平(t=16.110,P<0.001)表达上调.干预后HepG2细胞S期比例增多,G0/G1期和G2/M期比例减少,细胞进入S期停滞.细胞周期蛋白CCND2(t=6.069,P=0.004)和CCNB1(t=5.481,P=0.005)大幅度下调,CCNE1小幅度下调(t=2.905,P=0.044).结论预知子可能通过上调或下调核糖体蛋白mRNA或蛋白表达,抑制Mdm2并激活p53,诱导HepG2细胞进入S期停滞,抑制HepG2细胞增殖.

复方浙贝颗粒药物血清对人结肠癌HCT-116细胞增殖与凋亡的影响

目的观察复方浙贝颗粒对人结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法40只Wistar大鼠随机分为对照组和复方浙贝颗粒高、中、低剂量组,每组10只。复方浙贝颗粒高、中、低剂量组分别按8、4、2 g/(kg·d)灌胃,对照组给予0.1 ml/10 g生理盐水灌胃,连续7天。于末次灌胃后1 h制备各组药物血清。采用MTT法检测各组血清对人结肠癌HCT-116细胞抑制率,经流式细胞仪定量检测各组血清诱导HCT-116细胞凋亡率,Western blot方法检测各组血清对HCT-116细胞双微体-2(MDM2)、p53、p21蛋白表达的影响。结果复方浙贝颗粒高、中、低剂量组对HCT-116细胞增殖抑制率分别为40.00%、42.37%和29.15%,凋亡率分别为18.75%、20.00%、15.32%,均高于对照组(P<0.05)。48 h时复方浙贝颗粒高剂量组HCT-116细胞MDM2、p53、p21蛋白,复方浙贝颗粒中剂量组MDM2蛋白,复方浙贝颗粒低剂量组MDM2、p53蛋白表达均较对照组升高(P<0.01);96 h时复方浙贝颗粒各剂量组MDM2蛋白表达较本组48 h明显降低,p53蛋白表达较本组48 h明显升高(P<0.01)。结论复方浙贝颗粒能抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖、促进凋亡,其作用机制可能与调节增加MDM2-p53信号通路有关。