ALA联合HPD光动力学治疗对鼠G422胶质瘤影响的研究

目的:通过鼠G422胶质瘤研究确定ALA联合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿瘤细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别。方法:以不同剂量的HPD(1、2、3、4、5 mg/kg)、ALA(20、40、60、80、160 mg/kg)、两者联合口服与静脉注射鼠G422脑胶质瘤瘤模型,随后以630nm半导体激光200mW/cm^2照射肿瘤,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较。以流式细胞仪、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,病理,肿瘤生长曲线观察治疗肿瘤,促使肿瘤细胞凋亡及死亡的最小合适剂量。结果:HPD1-2mg/kg联合ALA40-60 mg/kg给药,630半导体激光200mW/cm^2,照射20分钟组,从流式细胞仪测定细胞凋亡、死亡及电镜、病理及肿瘤生长曲线形态学观察,其是能达到较佳的细胞凋亡、死亡的最小、合适的光敏剂剂量。单纯ALA-PDT组中能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80-160mg/kg),单纯HPD-PDT组是HPD4-5mg/kg。结论:HPD1-2mg/kg配合ALA40-60mg/kg,630半导体激光200mW/cm^2,照射20分钟是能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡死亡,治疗肿瘤合适的最小光敏剂剂量。

ALA联合HPD光动力学治疗对C6胶质瘤细胞影响的研究

目的:通过细胞学水平研究确定ALA配合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别。方法:以不同剂量的ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)、两者联合与C6胶质瘤瘤细胞一起培养,随后以630nm半导体激光200mW/cm2,照射肿瘤细胞,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较。以流式细胞仪及倒置显微镜、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,寻找促使肿瘤细胞凋亡或死亡的最小合适剂量。结果:ALA40μg/ml配合HPD2.5μg/ml与C6胶质瘤细胞同时培养,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟组从倒置显微镜及电镜形态学观察及流式细胞仪测定是能达到较佳的细胞凋亡的最小光敏剂剂量。单纯ALA-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80μg/ml),单纯HPD-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡最小剂量是HPD(5μg/ml)。结论:ALA40mg/kg配合HPD2.5mg/kg,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟是能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小光敏剂剂量。

ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422脑胶质细胞肿瘤基因P16及P53变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422脑胶质细胞瘤肿瘤基因P16及P53表达的变化。方法:以不同剂量ALA(20mg/kg4、0 mg/kg、60 mg/kg、80 mg/kg1、60 mg/kg)、HPD(1 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、5mg/kg)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422脑胶质细胞肿瘤以波长630nm半导体激光照射,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20分钟,PDT后一天、三天、七天及十四天,以流式细胞仪测试各组基因P16、P53不同光敏剂组及不同时间表达的变化并与不照光对照组比较。结果:本实验中未作PDT治疗的对照组肿瘤,肿瘤生长快,P16对照组最低值12.01%.最高值15.41%,HPD-PDT组表达最低值17.12%,最高值34.735%,ALA-PDT组,表达最低值17.1%,最高值25.51%,而HPD与ALA联合治疗组表达最低值16.5%,最高值28.22%;P53对照组最低值15.02%,最高值23.16%,HPD-PDT组,表达最低值29.98%,最高值43.62%,ALA-PDT组,表达最低值25.06%,最高值33.25%,而HPD与ALA联合治疗组表达最低值28.08%,最高值41.01%。总的P16、P53光动力学治疗组表达明显高于对照组,随光敏剂剂量增加表达值渐增,HPD-PDT组表达高于ALA组,HPD1mg/kg联合、ALA60-80mg/kg,HPD2mg/kg联合ALA40-60mg/kg,HPD3-4mg/kg联合ALA20mg/kg能达到P16表达最佳值及最高值。PDT后七天表达较佳。结论:推测PDT疗法激活了P16基因及p53基因功能,促使肿瘤细胞凋亡及坏死。联合疗法HPD1mg/kg联合ALA60-80mg/kg,HPD2mg/kg联合ALA40-60mg/kg光动力学治疗表达是最佳值或最高值,这样可明显提高ALA-PDT疗效及减少HPD-PDT的皮肤光毒反应。

ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞基因P16及P53变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞瘤基因P16及P53变化。方法:以不同剂量ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞,以流式细胞仪测试基因P16及基因P53的变化。结果:本实验中未作PDT治疗的对照组,肿瘤细胞生长良好,可见P16值小于6.59%。P53值小于4%。而PDT治疗组随着光敏剂剂量的加大P16及P53基因值逐渐上升,是未作PDT治疗组的3-4倍,且两光敏剂混合组,P16及P53基因值大于单纯ALA或HPD-PDT治疗组。HPD1μg/ml联合ALA60μg/ml,HPD2μg/ml联合ALA40μg/ml就能达到HPD5μg/ml PDT治疗组P16基因及P53基因水平。结论:推测PDT疗法激活了P16基因及p53基因功能,促使肿瘤细胞凋亡及坏死。联合疗法HPD1μg/ml联合ALA60μg/ml,HPD2μg/ml联合ALA40μg/ml光动力学治疗能达到HPD常规剂量5μg/ml PDT的效果,这样可明显提高ALA-PDT疗效及减少HPD-PDT的皮肤光毒反应。

ALA联合HPD光动力学治疗对C6胶质瘤细胞细胞内钙离子变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗对C6胶质瘤细胞细胞内钙离子变化。方法:以不同剂量ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞,应用Fluo-3AM为细胞内钙离子荧光指示剂,以激光共聚焦显微镜测定对照组及光动力学组照光后培养24小时活细胞细胞内钙离子含量,及测定单激光及对照组、光动力学治疗组照光前36秒及照光20分钟至停照光后20-100分钟细胞内钙离子浓度的动态变化,每12秒测定一次。结果:空白对照组、单激光、单加光敏剂组活C6胶质瘤细胞显示钙离子荧光值,在120分钟内变化较小。而光动力学治疗组,初照光5-15分钟内荧光明显慢慢增强,以后就逐渐下降,光敏药剂量大的初5-10分钟内荧光亮度上升很快,以后下降也快,可下降为0,剂量越大变化越明显,且光敏剂ALA较HPD更明显。二光敏剂联合组以上反应更明显,HPD1-2μg/ml联合ALA40-60μg/ml与HPD 5μg/ml组动态图相似。结论:通过本实验可推测光动力学作用后细胞内钙离子超载可能在细胞凋亡及死亡中发挥重要作用。二光敏剂联合可提高疗效,降低HPD光敏剂用量,减少皮肤光毒付反应,HPD1-2μg/ml联合ALA40-60μg/ml是较合适的剂量。

ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化。方法:以不同剂量ALA(20、40、60、80、160mg/kg、)、HPD(1、2、3、4、5mg/kg)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤,应用Fluo-3AM为细胞内钙离子荧光指示剂,以激光共聚焦显微镜测定对照组及光动力学组照光后立即、一天、三天肿瘤活细胞细胞内钙离子含量,并同时测定单激光、单用光敏剂、及空白对照组鼠肿瘤细胞内钙离子表达。结果:空白对照组、单激光、单加光敏剂组鼠G422胶质瘤肿瘤显示3天内钙离子荧光值维持在较恒定值,光动力组在治疗后立即组可见钙离子值明显高于未作光动力学治疗的对照组,且与光敏剂剂量增加有关,光动力学治疗后一天及三天组肿瘤细胞内钙离子值明显低于立即组及未作光动力学治疗组,且与光敏剂剂量增加有关。ALA-PDT组较HPD-PDT组更明显。联合治疗组HPD1-2mg/kg联合LA40-60mg/kg光动力学治疗组肿瘤细胞内钙离子值接近HPD 5mg/kg光动力学治疗组。结论:通过本实验可推测光动力学作用后细胞内钙离子超载可能在细胞凋亡及死亡中发挥重要作用。二光敏剂联合可提高疗效,降低HPD光敏剂用量,减少皮肤光毒副反应,HPD1-2 mg/kg联合ALA40-60 mg/kg是较合适的剂量。