遗传性铁粒幼细胞贫血致病的ALAS2基因表达载体的构建

X连锁遗传性铁粒幼细胞贫血 (XLSA)是红系特异性δ 氨基 γ酮戊酸合酶 (δ amionlevulinicacidsyntase 2 ,ALAS2 )基因突变造成的 ,本研究构建ALAS2基因的真核表达载体 ,观察表达载体转染真核细胞后蛋白表达的情况。将获自人胎肝的ALAS2基因插入到红色荧光蛋白质粒 pDs red2 N1中 ,命名为pDs red2 N1 ALAS2 ;采用电穿孔方法将质粒转染K5 6 2细胞 ;转染后 4 8小时提取细胞总RNA ,进行RT PCR检测ALAS2基因表达 ;流式细胞术检测红色荧光蛋白表达。再采用脂质体方法将质粒转染COS7细胞 ,转染后 72小时提取细胞总RNA ,RT PCR检测ALAS2基因表达 ,荧光显微镜观察COS7细胞红色荧光蛋白表达情况。结果表明 :构建了一种 pDs red2 N1 ALAS2真核表达载体 ,提取质粒DNA经酶切、电泳可以看到在 4 70 0bp和176 4bp处存在两条电泳条带 ;全长测序证实构建的载体序列正确 ;质粒转染K5 6 2和COS7细胞后均出现阳性ALAS2基因转录产物 ;流式细胞术检测转染后K5 6 2细胞红色荧光蛋白表达的阳性细胞百分率为 19.2 % ;荧光显微镜显示转染后COS7细胞红色荧光蛋白 ,表达高峰出现在转染后第 3天 ,阳性细胞百分率为 10 .7% ,并可持续表达 10天左右。红色荧光蛋白的表达可以间接说明ALAS2基因的表达。结论

ALAS2基因在先天性铁粒幼细胞性贫血中的作用

先天性铁粒幼细胞性贫血(CSA)是以骨髓中存在环形铁粒幼细胞为特征的遗传性疾病,通常表现为小细胞低色素性贫血和铁过载。以X连锁遗传型铁粒幼细胞性贫血(XLSA)最常见,其发病与ALAS2基因突变有关。目前,CSA的诊断和治疗依赖于临床特点和基因测序的结合,但仍有相当数量CSA的基因突变不明确。通过下一代测序技术和细胞或动物模型实验,我们将进一步加深对CSA的认识。

PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性与肺癌相关性的研究

目的本研究旨在初步探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)基因脯氨酸12丙氨酸(Pro12Ala)多态性与肺癌的关系。方法选择肺癌患者和对照者各45例,收集外周血标本,采用直接测序法检测PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性,并进行比较;对两种基因型肺癌患者病理分型、分级及预后指标进行比较,并分析基因型与其相关性。结果两组间PPAR-γ2基因多态性的基因型及等位基因频率分布没有明显的差异;两种基因型肺癌患者病理分型、分级及预后指标差均不明显,无统计学意义(P>0.05),PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性与肺癌病理分型、分期及预后指标无相关性。结论PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性可能与肺癌的发生、发展及预后无关。

成都地区高血压病患者PPARγ2基因Pro12Ala多态性与血糖水平的相关性研究

目的:研究高血压病患者过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ2基因Pro12Ala多态性与血糖水平之间的关系。方法:纳入177名原发性高血压患者,其中空腹血糖(FBG)<5.6 mmol/L组65例,FBG≥5.6 mmol/L组112例,收集一般资料;分别测定空腹及餐后2小时血糖、胰岛素;对PPARγ2基因Pro12Ala多态性与各临床变量的关系进行研究。结果:FBG<5.6 mmol/L组和FBG≥5.6 mmol/L组Pro和Ala等位基因频率分别为0.333,0.034及0.602,0.031;PP和PA基因型频率分别为0.299,0.068及0.571,0.062;无AA型纯合子。以体重指数(BMI)分层后,BMI<25组内,FBG与PPARγ2基因型相关(P=0.029)。以基因型分组比较,PA组空腹血糖水平和胰岛素抵抗指数都低于PP组(P<0.05)。结论:成都地区高血压患者PPARγ2基因Pro12Ala多态性与空腹血糖水平相关,且携带Ala基因者空腹血糖水平较低,胰岛素抵抗较轻,推测该突变可能有减轻高血压病患者胰岛素抵抗,改善糖代谢异常的作用。

过氧化质体增殖物激活的受体γ2-Pro12Ala变异对常见代谢病的影响

目的 研究过氧化质体增殖物激活的受体 (PPAR)γ2 Pro12Ala变异对体脂含量及分布、胰岛素分泌及作用以及与代谢综合征的相关情况。方法 在 340例中国人 ,其中非糖尿病者(ND) 184例 ,2型糖尿病 (DM )患者 15 6例 ,用PCR下游错配引物在Ala12等位基因上引入BstU I酶切位点进行PPARγ2 Pro12Ala变异检测。结果 (1)中国人群体中Ala12携带者 (Pro/Ala及Ala/Ala基因型 )及Ala12等位基因频率分别为 0 .0 4及 0 .0 2 ,远低于白种人 (Fisher双侧确切检验P值分别为0 .0 0 5及 0 .0 0 6 ) ;(2 )PPARγ2 Pro12Ala变异与体脂相关 ,BMI≥ 2 5者中Ala12携带者频率及Ala12等位基因频率均显著高于BMI <2 5者 (Fisher确切检验P值分别为 0 .0 34及 0 .0 2 5 ) ;(3)ND中PPARγ2 Pro12Ala与腹部皮下脂肪相关。高腹部皮下脂肪截面积 (SA)亚组中Ala12携带者频率高于低SA亚组 (Fisher确切检验P =0 .0 45 )。Ala12携带者的SA值高于非携带者 (P =0 .0 0 6 )。逐步回归分析表明PPARγ2 Pro12Ala是影响SA的独立因素 (P =0 .0 12 ) ;(4 )PPARγ2 Pro12Ala在ND者中与血糖、血脂谱、血压、胰岛素分泌及作用无相关。此外 ,与糖尿病亦无相关。结论 PPARγ2 Pro12Ala变异在病因上与有密切联系的成人常见代谢病的参与因素之一。?

铁粒幼细胞贫血家系致病基因的连锁分析和造血特征

目的分析铁粒幼细胞贫血家系的致病基因和研究患者骨髓造血特征。方法用ＰＣＲ扩增家系中２例患者和７例正常人的位于Ｘｐ１１．２－１１．２１的ＤＸＳ９９１和ＤＸＳ１１９９，以及位于Ｘｐ２２．１３的ＤＸＳ１２２６微卫星片段，经变性凝胶电泳后作连锁分析；培养患者骨髓造血细胞，观察红系、粒系和巨核细胞系集落生成的特征。结果该家系患者与ＤＸＳ９９１和ＤＸＳ１１９９连锁，而这两个片段代表附近的ＡＬＡＳ２基因；与ＡＬＡＳ２基因距离较远的ＤＸＳ１２２６则不连锁。造血细胞培养研究发现，患者红系集落的生成旺盛，不加ＥＰＯ等造血因子就可自发生长；一周后红系统集落萎缩，集落大小明显小于正常对照。结论本家系属于ＡＬＡＳ２基因异常的Ｘ性连锁遗传病。患者的干细胞功能大致正常。