宫颈鳞癌中PD-L1不同抗体免疫组织化学染色的一致性分析

目的探讨宫颈鳞癌中程序性死亡配体1(PD-L1)表达情况及22C3、SP263、E1L3N 3种抗体免疫组化染色的一致性。方法收集解放军总医院两个医学中心89例复发或转移性宫颈鳞癌样本,用PD-L13种克隆号抗体22C3、SP263、E1L3N进行染色,并采用联合阳性评分(CPS)、肿瘤细胞比例评分(TPS)两种评分标准,在不同阈值下对抗体的一致性进行统计学分析。结果宫颈鳞癌在CPS阳性阈值为1时,PD-L1阳性率从高到低依次为22C3(98.31%)、E1L3N(97.75%)、SP263(93.90%);CPS为10时,阳性率依次为E1L3N(76.40%)、22C3(72.88%)、SP263(69.51%);TPS阈值为1%时,阳性率依次为E1L3N(95.51%)、22C3(93.22%)、SP263(92.68%);TPS为10%时,阳性率依次E1L3N(65.17%)、22C3(64.41%)、SP263(60.98%)。当CPS为1或10时、TPS为1%或10%时,E1L3N与22C3、SP263与22C3、SP263与E1L3N均表现较好的一致性(Kappa=0.66~0.98)。无论使用CPS或TPS,组内相关系数检验显示3个克隆号抗体判读数据有高度一致性(ICC分别为0.987、0.984)。结论E1L3N、SP263与22C3之间具有较高的可互换性,为临床检测PD-L1在宫颈癌组织中的表达情况,提供了更多选择。

转化生长因子β1及其受体在着床期小鼠子宫内膜中的免疫组织化学研究

目的 进一步证实转化生长因子 β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)在胚泡着床过程中的生物学作用。 方法 利用昆明小鼠 ,在着床前后不同时期取材 ,通过改良的免疫组织化学方法 ,检测了 TGFβ1及其受体 (TGFR1)在子宫内膜中的表达状况。 结果 受精后第 4d,子宫内膜表面上皮和腺上皮细胞中 TGFβ1及其受体均较未孕期增加 ,成纤维细胞周围的细胞外基质 (extracellular matrix,ECM)也呈 TGFβ1阳性着色。受精后第 5、6 d,TGFβ1及其受体主要表达于初级蜕膜带 (prim ary decidual zone,PDZ)。随着胚泡植入的深入 ,TGFβ1及其受体广泛分布于蜕膜细胞。 结论 TGFβ1及其受体的表达与胚泡植入过程密切相关。

Hes1在成年小鼠脑中表达的免疫组织化学分析

背景:近年来的研究显示,在胚胎神经系统发育过程中,Hes1的表达调控对保持神经干细胞的数量、调控其分化至关重要。此外,成年个体内处于静止期的纤维母细胞重新获得分裂增殖的能力需要Hes1表达的上调。这表明Hes1在成体中也与某些潜在干细胞的增殖具有密切的关系。因此研究Hes1在成体神经干细胞中的表达及其与成体神经细胞生成的关系也就被提上日程。但Hes1在成年个体神经系统的表达至今未明。目的:观察和分析小鼠脑中不同部位Hes1的表达及Hes1阳性细胞的细胞类型。方法:12只成年雄性C57BL/6小鼠随机数字表法分为单染组和双染组,每组6只。单染组直接取材,采用免疫组织化学技术检测Hes1在小鼠脑中各部位的表达。双染组小鼠以200mg/kg Brdu的剂量每天腹腔注射1次,连续注射3d,第4天取材,采用双标记物染色观察分析海马区Hes1阳性细胞的细胞类型。结果与结论:在所有观察的解剖部位中,Hes1表达于所有存在神经细胞的部位,Brdu阳性细胞几乎全部表达Hes1,NeuN阳性细胞全部表达Hes1,而神经胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞则完全不表达Hes1。由此可知,Hes1表达于神经细胞和神经干细胞中,胶质细胞不表达Hes1。

口腔粘膜下纤维性变组织中内皮素1的免疫组织化学和定量研究

目的 :探讨ET 1在口腔粘膜下纤维性变 (OSF)发病机制中的作用。方法 :采用免疫组化染色SABC法和图像分析技术 ,对OSF早、中、晚期各 10例、口腔扁平苔藓 (OLP) 10例以及正常人 10例的颊粘膜组织中ET 1表达进行定量分析。结果 :①OSF组织中ET 1免疫阳性物质超量表达 ,正常及OLP组织中ET 1表达微弱 ;②OSF早、中、晚期组织中ET 1含量显著高于正常 (P <0 0 1) ,且早、中期显著高于晚期 (P <0 0 1) ;③OSF早、中期组织ET 1含量显著高于OLP(P <0 0 1) ,晚期间质ET 1含量显著高于OLP(P <0 0 5 ) ,上皮ET 1含量两者差异不显著 (P >0 0 5 ) ;④口腔粘膜中上皮和间质的ET 1含量呈显著正相关 (P <0 0 5 )。结论 :ET 1在OSF的表达具有特异性 ,且可能影响OSF病变的发生发展。

cbfa1在人牙乳头细胞中的免疫组织化学研究

目的 :构建 pcDNA3-cbfa1重组质粒 ,瞬时转染人牙乳头细胞 ,观察cbfa1在转染前后的表达。方法 :用EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切pcDNA3空载体和 pGEM - 5z -f -cbfa1质粒 ,电泳回收后进行连接 ,连接产物转化DH5α ,进行酶切鉴定和PCR分析。采用脂质体法瞬时转染人牙乳头细胞 ,制备细胞爬片 ,免疫组织化学染色。结果 :共挑出 7个阳性转化子 ,酶切和PCR分析结果均显示重组质粒构建成功。正常人牙乳头细胞中cbfa1表达阴性 ,瞬时转染 2 4h后 ,cbfa1表达阳性。结论 :成功构建了 pcDNA3-cbfa1真核表达载体 ,人牙乳头细胞无cbfa1的表达 ,当转染正义的cbfa1重组质粒后出现cbfa1的表达 。

IL-1及VEGF在大鼠皮肤切创愈合过程中的免疫组织化学表达

目的:探讨白细胞介素1(IL-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化与损伤时间的关系,以期为法医病理学皮肤损伤时间判定提供有效的免疫组织化学指标。方法:51只雄性SD大鼠随机均分为17组(每组3只),随机选取13组大鼠背部皮肤行切割创,在伤后不同时间(5、10、30 min及1、3、5、7、9和12 h以及1、3、5和7 d)处死大鼠作为生前损伤组;另取3组大鼠,脱颈处死后5、10及30 min在背部行切割创,作为死后伤对照组;取余下1组大鼠背部皮肤作为正常对照组。应用免疫组织化学技术,检测生前损伤组、死后伤对照组和正常对照组大鼠不同损伤时间的生前伤、死后伤及正常皮肤组织中IL-1及VEGF的表达变化。结果:在生前损伤组,IL-1于伤后30 min,即在上皮组织和肉芽组织(巨噬细胞和成纤维细胞)中呈阳性表达,并持续至伤后5 d,IL-1阳性细胞率在损伤后3 h内较低,伤后5 h达到峰值(49.87%±3.42%),随后有所下降,但伤后3 d达第2次峰值(47.56%±7.52%),而后逐渐恢复至正常水平;VEGF于损伤后3 h在表皮组织中呈阳性表达,且持续至伤后10 d。死后伤对照组与正常对照组IL-1及VEGF的表达比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论:VEGF和IL-1随损伤时间变化呈规律性表达,VEGF和IL-1可作为法医学皮肤损伤时间判定的有效指标。

成年大鼠睾丸Smad1和Smad5的免疫组织化学研究

目的 :探讨骨形态形成蛋白的细胞内信号传导分子Smad1和Smad5蛋白在成年大鼠睾丸内的表达。 方法 :应用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸镍铵增强技术 ,检测成年大鼠睾丸Smad1和Smad5蛋白的表达和定位。 结果 :Smad1蛋白表达于大鼠睾丸精曲小管的各级生精细胞的胞质内 ,呈淡染的紫蓝色颗粒 ,胞核为阴性 ,免疫染色阳性细胞主要包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞 ;而Smad5蛋白阳性染色不明显 ,只有睾丸间质细胞呈弱阳性反应 ,免疫反应阳性物质主要定位于细胞质。 结论 :Smad1蛋白主要表达于睾丸精曲小管各级生精细胞 ,Smad5蛋白表达于间质细胞 ,为揭示TGF β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨CyclinD1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义。方法用免疫组化SP法分别检测CyclinD1和CyclinB1在58例鼻咽癌组织标本中的表达。结果CyclinD1和CyclinB1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);CyclinD1和CyclinB1阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P<0.05);鼻咽癌组织中CyclinD1和CyclinB1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关。结论CyclinD1和CyclinB1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义。

液相芯片与免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌ERCC1和RRM1表达的比较研究

目的:切除修复交叉互补基因1(exsicion repair cross-complementing group 1,ERCC1)和核糖核苷酸还原酶M1(ribonu cleotide reductase M1,RRM1)的表达水平可预测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)对化疗的敏感性。旨在评价免疫组织化学检测的蛋白水平与液相芯片检测的mRNA水平的临床应用价值。方法:采用免疫组织化学和液相芯片方法分别检测42例非小细胞肺癌组织中ERCC1、RRM1的蛋白表达和mRNA表达水平,非参数相关性分析二者表达的相关性。结果:两种方法检测的非小细胞肺癌组织中ERCC1和RRM1蛋白表达与mRNA表达的一致率分别为52.3%(22/42)和76.2%(32/42);两种方法检测RRM1和ERCC1蛋白表达和mRNA表达呈正相关(r=0.778,P=0.010;r=0.277,P=0.076)。结论:免疫组织化学检测的RRM1和ERCC1的蛋白水平与液相芯片检测的mRNA水平具有较好的一致性和相关性,二种方法同时检测可以增加临床应用的敏感性和特异性。

免不1号和2号治疗免疫性不育雄鼠的组织学和免疫组织化学研究

用中药复方免不 1号、免不 2号治疗免疫性不育雄鼠 ,观察睾丸、附睾组织学和免疫组化的变化。用精子抗原免疫昆明种雄性小白鼠 ,建立免疫性不育动物模型 ;同时分别饲喂中药复方免不 1号、免不 2号 ,醋酸强的松 ,生理盐水 ;从组织学和免疫组化等方面观察免疫性不育症的变化。结果显示免疫性不育雄鼠血清、精囊液抗精子抗体高 ,睾丸间质、睾丸曲细精管界膜、精原细胞、附睾管上皮细胞免疫复合物沉积多 ,睾丸每曲细精管精子和晚期精子细胞减少。中药免不 1号和2号能降低抗精子抗体 ,清除免疫复合物的沉积 ,恢复曲细精管精子和晚期精子细胞数。结果表明 :免不 1号和 2号通过调节全身免疫系统 ,清除循环和局部的抗精子抗体、免疫复合物 ,提高精子和精子细胞数 。

卵巢切除大鼠椎体松质骨中IL-1β、IL-6免疫组织化学研究

卵巢切除大鼠椎体松质骨中ＩＬ－１β、ＩＬ－６免疫组织化学研究韩利华，王全平，刘建，朱潇玲绝经后骨质疏松症的发病机制目前尚不清楚，研究发现ＩＬ－１、ＩＬ－６等细胞因子参与骨代谢调节。细胞因子主要通过自分泌与旁分泌的方式参与调控骨的吸收与形成，而对骨质疏...

大鼠视网膜中HAP1的免疫组织化学定位及不同光照条件对HAP1表达的影响

目的 探讨亨廷顿蛋白相关蛋白 1(huntingtinassociatedprotein 1,HAP1)是否存在于视网膜内及是否与视觉有关。方法 对正常大鼠眼球壁用ABC法进行免疫组织化学染色 ,观察HAP1在视网膜中的定位 ;用半定量免疫印迹方法(Westernblotting)检测不同光照条件对大鼠视网膜中HAP1表达的影响。结果 HAP1较广泛地分布在大鼠视网膜各层 ,但以内核层及外核层中免疫反应较强 ,阳性反应产物主要定位在节细胞层和内核层 /外核层中部分细胞胞体内 ;其余各层中 ,HAP1免疫反应较弱 ,阳性产物呈弥散分布 ,未见明显的阳性胞体。在连续处于黑暗环境中 72小时大鼠视网膜中 ,HAP1表达较常规光照动物明显减少 ,而连续光照 72h大鼠视网膜内HAP1表达无明显变化。结论 HAP1在视网膜中的存在及不同光照条件对视网膜HAP1表达的影响表明 ,HAP1可能与视觉活动有关。

盐酸多奈哌齐对拟VaD大鼠海马CA_1区NR1及NR2B免疫组织化学表达的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对拟血管性痴呆大鼠海马神经元N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚单位R1(NMDAR1,NR1)和R2B(NMDAR2B,NR2B)的免疫组织化学表达的影响。方法采用双侧颈总动脉反复夹闭、再通,并腹腔注射硝普钠法制备模型,用盐酸多奈哌齐溶液灌胃,Y-型迷宫试验观察其行为学改变,用免疫组织化学技术观测大鼠海马神经元NR1、NR2B的表达变化。结果盐酸多奈哌齐组大鼠海马CA1区NR1表达明显降低,与模型组比较有显著性差异(均P<0.01),与假手术组相比差异无显著性;NR2B表达较模型组明显增高(P<0.01),与假手术组比较无显著性差异。结论盐酸多奈哌齐有可能通过降低NR1的表达,提高海马NR2B的表达,从而改善拟血管性痴呆大鼠的学习、记忆成绩。

实验性糖尿病大鼠肺组织AGEs、TGF-β1、CTGF免疫组织化学分析

目的探讨实验性糖尿病(DM)大鼠肺组织晚期糖基化终末产物(AGEs)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的变化及其相关性。方法48只SD雄性大鼠随机分为DM组和对照组,每组24只。链脲佐菌素(STZ)60mg/kg尾静脉注射制造DM模型。分别于造模成功后4、12、20周末取材。免疫组织化学方法观察肺组织AGEs、CTGF、TGF-β1的变化,并进行图像分析。结果DM大鼠肺泡上皮细胞、支气管黏膜上皮细胞、血管内皮细胞及平滑肌细胞可见大量AGEs阳性表达,平均灰度值低于对照组(P<0.05)。随着DM病程的发展,AGEs阳性表达逐渐降低(P<0.01);4周DM大鼠支气管黏膜上皮细胞、血管内皮细胞、肺间质细胞可见少量CTGF、TGF-β1阳性细胞,12、20周时可见大量CTGF、TGF-β1阳性细胞,平均灰度值均低于对照组(P<0.01);Pearson相关分析显示,DM大鼠肺组织AGEs与CTGF、TGF-β1之间呈显著正相关(γ=0.939、0.904;P<0.01),CTGF与TGF-β1亦呈正相关(γ=0.878;P<0.01)。结论DM大鼠肺组织内AGEs随病程的延长其表达明显增加,并与CTGF、TGF-β1正相关。

免疫组织化学方法测定TGF-β_1在鼠根尖周炎中的表达

目的 了解TGF β1与大鼠急性根尖周炎的关系。方法 取 16只SD大鼠建立鼠根尖周炎动物模型 ,制作根尖周组织切片 ,用免疫组织化学方法测定TGF β1在根尖周炎中的表达。结果 免疫组化研究显示TGF β1阳性表达细胞分布于根尖周和牙槽骨缺损处 ,在急性期 (1～ 3周 )根尖炎症阶段有高表达 ,表达细胞多为巨噬细胞、淋巴细胞和成纤维细胞 ;而在急性期和慢性期 (第 4周 )均未见成骨细胞TGF β1表达。结论 在早期 (1～ 4周 )根尖炎症阶段未见成骨细胞TGF β1表达 。

免疫组织化学和荧光原位杂交检测肺腺癌ROS1表达的对比

目的 比较免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）和荧光原位杂交（fluorescent in situhybridization,FISH）技术在检测肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因的差异性和一致性,评估IHC在临床上的应用价值。方法 应用IHC和FISH技术对332例肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因进行检测,比较两者检测的结果和相关性,并探讨ROS1融合基因与临床病理特征之间的关系。结果 332例肺腺癌中FISH阳性者13例,阴性者319例,ROS1融合基因阳性率为3.9%;ROS1蛋白表达结果：0者312例,1＋者2例,2＋者5例,3＋者13例,ROS1蛋白过表达率为6.0%;经FISH检测312例ROS1蛋白表达为0的标本无ROS1融合基因,2例1＋的标本中也无ROS1融合基因;5例2＋的标本中有2例ROS1融合基因,13例3＋的标本中11例有ROS1融合基因;IHC检测0和1＋、2＋、3＋标本FISH检测阳性符合率分别为0（0/314）、40%（2/5）和84.6%（11/13）;IHC检测ROS1蛋白为2＋～3＋的标本中72.2%（13/18）显示ROS1融合基因,0～1＋患者中无1例有ROS1融合基因（Kappa系数=0.831,P〈0.01）;IHC检测ROS1蛋白表达的敏感性和特异性分别100%和98.4%。结论 IHC检测ROS1蛋白表达和FISH检测ROS1融合基因,两种方法有较高的符合率,一致性较好,IHC有较高的敏感性和特异性,可作为临床检测肺腺癌ROS1融合基因的简单而有效的方法。

低氧训练影响大鼠心肌组织缺氧诱导因子-1α的免疫组织化学研究

研究不同运动训练后采用不同程度低氧处理,对心肌组织HIF- 1α蛋白表达的促进作用。采用3×3析因设计试验,将健康雄性SD大鼠72只,随机分为9组,采用免疫组织化学及计算机显微图像分析方法,检测HIF- 1α在心肌组织中的定位及含量,分析低氧和运动训练2种不同的处理因素对心肌组织HIF- 1α蛋白表达的单独效应、主效应及交互效应。结果表明随着低氧和训练因素的介入,HIF- 1α蛋白表达增多,低氧训练最能促进HIF- 1α的蛋白表达。低氧处理及运动训练的主效应有差别,低氧处理、运动训练的单独效应中以超低氧处理、低氧训练的效应最强,并且低氧训练与低氧处理、与超低氧处理对心肌组织HIF- 1α蛋白表达具有交互作用,而常氧训练与低氧处理、与超低氧处理对心肌组织HIF- 1α蛋白表达不具有交互作用。

大鼠脊髓损伤后IGF-1和Bcl-2表达变化的免疫组织化学研究

目的探讨大鼠脊髓损伤(SCI)后胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和Bcl-2的表达规律,为临床治疗SCI及法医学损伤时间推断提供依据。方法自制改良Allen’s打击装置致大鼠T13段脊髓不完全损伤,免疫组化S-P法检测正常及伤后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d、14d大鼠脊髓组织中IGF-1和Bcl-2的表达。结果正常大鼠脊髓组织内有低水平的IGF-1和Bcl-2表达。SCI后IGF-1表达即呈升高趋势,3d达高峰,阳性细胞以神经元和胶质细胞为主,14d时下降至正常水平。Bcl-2在伤后的表达呈现双峰现象,即伤后1d时Bcl-2免疫阳性细胞首次数达峰值,此后开始下降,3d时又开始升高,5d时又达高峰,并较前一峰值高。14d时与对照组无差别。达第一峰时Bcl-2免疫阳性细胞主要为脊髓神经元,而后一峰则以胶质细胞为主。IGF-1和Bcl-2的表达与正常组有统计学意义(P<0.05)。结论SCI后IGF-1和Bcl-2基因表达开始升高,可协同发挥神经元保护作用,且IGF-1可上调Bcl-2的表达。二者可用于临床SCI的治疗以及法医学损伤时间推断。

PD-L1(28-8)实验室自建平台免疫组织化学检测与性能验证

目的从PD-L1(28-8)浓缩型抗体性能验证角度出发,比较多平台的染色结果,旨在建立适宜的免疫组化染色条件,以满足PD-L1实验室自建平台检测(laboratory developed test,LDT)技术广泛运用的需求。方法设计扁桃体等多种正常组织块"羊膜卷"对照及高、中、低表达的肿瘤组织芯片对照,验证并确认PD-L1(28-8)在DAKO Omnis(1∶50+Linker)、Roche Ultra(1∶50+Linker)、DAKO ASL(1∶40+Linker)及手工(Manual)(1∶20+Linker)的染色条件,对已知PD-L1阳性的49例非小细胞肺癌存档蜡块进行测试,观察PD-L1(28-8)在上述四种平台染色的一致性。结果DAKO Omnis、Roche Ultra、DAKO ASL和手工(Manual)PD-L1(28-8)LDT表达例数为:当Cutoff值1%≤TC<50%,阳性例数分别为12、13、13、14例;Cutoff值TC≥50%时,阳性例数分别为24、23、23、11例;Cutoff值TC<1%时,在DAKO Omnis、Roche Ultra、DAKO ASL48平台上检测的阴性病例均为13例,手工(Manual)染色阴性病例则为24例。基于上述3种阈值,三种自动检测平台间的相关性分析结果显示:Roche Ultra、DAKO ASL48两者秩相关系数r=1;Roche Ultra/DAKO ASL48与DAKO Omnis的秩相关系数r=0.98;手工(Manual)与DAKO Omnis之间的秩相关系数r=0.88,手工(Manual)与Roche Ultra、DAKO ASL48之间的秩相关系数r=0.87,上述秩相关系数差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PD-L1(28-8)LDT检测在DAKO Omnis、ASL48、Roche Ultra平台上一致性好,提示PD-L1(28-8)浓缩型抗体适用于带放大组份的检测平台,官方推荐的检测方法目前可被采纳为金标准。在可行的性能验证完善和多组织对照条件下,可推荐DAKO Omnis、Roche Ultra和DAKO ASL48三个检测平台进行LDT染色,手工(Manual)染色不适合PD-L1(28-8)的检测。