丹参酮ⅡA通过Nrf2调节ALDOC减轻海马神经元放射性损伤的机制

目的探索丹参酮ⅡA通过Nrf2调控ALDOC的表达,从而促进海马神经元放射性损伤保护作用的分子机制。方法选择海马神经元细胞株HT 22为研究对象,予分组处理:对照组(Control)/单纯丹参酮ⅡA处理组(Tan)/单纯照射组(RT)/照射+丹参酮ⅡA处理组(RT+Tan),检测各组细胞ALDOCmRNA及蛋白水平的表达情况。构建ALDOC稳定过表达及干扰的细胞株,检测ALDOC的表达水平对糖酵解相关酶及自噬相关蛋白表达的影响。丹参酮ⅡA处理HT 22后检测Nrf2及ALDOC的表达水平,siRNA干扰细胞株Nrf2表达,再次检测其ALDOC表达水平。利用免疫荧光检测丹参酮ⅡA联合放射线照射后HT 22细胞Nrf2的变化。结果与对照组相比,RT+Tan组HT-22细胞ALDOC的mRNA及蛋白表达水平均出现明显上调。过表达ALDOC的细胞株,射线照射后的细胞存活率显著提高(F=126.13,P<0.05),凋亡比例降低(F=98.677,P<0.05);干扰ALDOC的表达,细胞则出现了相反的变化。ALDOC能增加经放射线照射后的HT 22细胞糖酵解,且促进自噬相关蛋白的表达。丹参酮ⅡA处理后,Nrf2及ALDOC表达明显上调,而抑制Nrf2后,ALDOC表达下降,免疫荧光显示丹参酮ⅡA促进Nrf2由细胞浆转移至细胞核。结论丹参酮ⅡA可能是通过Nrf2调节糖酵解酶ALDOC的表达改变从而调控糖酵解及自噬,对海马神经元放射性损伤起到保护作用。

脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1表达的研究

目的探讨脊髓源神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1的表达变化情况。方法从孕17天Wistar胚胎大鼠取出脊髓组织,制成细胞悬液,采用含EGF和bFGF的无血清限定性培养基培养,然后进行诱导分化,观察脊髓源神经干细胞向胆碱能神经元分化的情况,应用荧光定量PCR方法分析Aldoc和Stmn1基因在脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的过程中的表达变化情况。结果神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元后,经免疫荧光检测有ChAT阳性细胞表达;Aldoc基因的表达量在胆碱能神经元较神经干细胞低(P<0.05);Stmn1基因的表达量则在诱导分化后较神经干细胞升高(P<0.05)。结论 Aldoc对神经干细胞的干性维持有重要作用,Stmn1在胆碱能神经元的成熟过程中起作用。

免疫共沉淀验证HBx蛋白与ALDOA、ALDOB和ALDOC相互作用

目的;利用免疫共沉淀技术验证乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与醛缩酶A(ALDOA)、ALDOB和ALDOC之间在肝细胞内存在直接相互作用。方法;利用脂质体法将含HBx;编码基因的FLAG标签真核表达载体pFLAG-CMV-2-HBx转染Huh7肝癌细胞;48h后裂解细胞;进行免疫共沉淀实验(CO-IP);并通过Western;blot检测免疫沉淀复合物确定HBx蛋白与肝细胞内源性ALDOA、ALDOB和ALDOC存在直接相互作用。结果;用Anit-FLAG抗体对细胞裂解液进行免疫沉淀实验;FLAG-HBx蛋白可以将ALDOA、ALDOB和ALDOC分别沉淀;用Anit-ALDOA、Anit-ALDOB和Anit-ALDOC抗体分别进行免疫沉淀实验;ALDOA、ALDOB和ALDOC均能将FLAG-HBx蛋白沉淀。结论;HBx蛋白与ALDOA、ALDOB和ALDOC在肝细胞内均存在直接相互作用;为进一步研究HBx蛋白的致病机制奠定基础;为阐述醛缩酶在乙型肝炎病毒相关肝癌过程发挥的作用提供依据。

基于定量蛋白质组学探讨西黄丸抗乳腺增生的作用机制

目的基于定量蛋白质组学技术明确西黄丸抗乳腺增生(hyperplasia of mammary glands,HMG)中乳腺组织的差异蛋白并验证,探讨其作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组和西黄丸组,每组10只。除空白组外,肌注雌孕激素建立HMG大鼠模型,为期30 d。给药西黄丸14 d后,观察各组大鼠表观形态变化,HE染色观察乳腺组织病理改变,定量蛋白质组学技术筛选各组差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),并进行生物信息学分析和Western blot验证。结果与模型组比较,西黄丸组表观病理形态明显改善,大鼠乳头高度直径明显降低(P<0.01),组织病理程度明显缓解。定量蛋白质组学鉴定出乳腺组织4299个DEPs,对西黄丸组与空白组相对模型组变化一致的14个DEPs进行生物信息学分析,发现与肌肉系统过程的调节、肌肉收缩调节、DNA复制和DNA复制启动前过程有关。Western blot结果表明,与模型组比较,西黄丸组大鼠乳腺组织ACLY与ALDOC蛋白表达水平明显降低,BIN1蛋白表达水平明显增加(P<0.01)。结论西黄丸可能通过调控BIN1、ACLY及ALDOC蛋白水平,调控DNA复制、DNA复制启动前和肌肉系统过程的调节、肌肉收缩调节等途径发挥抗HMG作用。