复发性流产患者胎盘绒毛中FTO mRNA和ALKBH5 mRNA水平表达及临床价值研究

目的 探讨胎盘绒毛组织中肥胖相关蛋白(fat mass and obesity associated protein,FTO)mRNA和AlkB同源蛋白5(Alk B homologous 5,ALKBH5)mRNA水平与复发性流产的相关性。方法 选取2019年12月~2021年1月深圳市中西医结合医院产科接收的98例复发性流产患者为复发性流产组,同期选取正常早孕人工流产者96例作为对照组。比较两组一般资料;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组受试者胎盘绒毛组织FTO mRNA和ALKBH5mRNA水平;采用Pearson法分析复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA与ALKBH5 mRNA水平相关性;采用单因素及多因素Logistic回归分析影响复发性流产的因素。结果 复发性流产组胎盘绒毛组织FTO mRNA(0.72±0.16),ALKBH5 mRNA(0.64±0.18)水平低于对照组(1.02±0.24,1.01±0.21),差异均有统计学意义(t=10.263,13.185,均P <0.05)。复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA与ALKBH5 mRNA水平呈正相关(r=0.537,P <0.05)。流产次数> 3次的复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA(0.40±0.12),ALKBH5 mRNA(0.47±0.11)水平低于流产次数3次患者(0.86±0.18,0.72±0.14),差异具有统计学意义(t=12.615,8.561,均P <0.05)。单因素Logistic回归分析结果显示,孕囊大小为复发性流产发生的危险因素[OR(95%CI):2.025(1.468~2.794),P <0.05],FTO mRNA,ALKBH5 mRNA为复发性流产发生的保护因素[OR(95%CI):0.730(0.548~0.972);0.655(0.492~0.873),均P <0.05]。多因素Logistic回归分析结果显示,FTO mRNA和ALKBH5 mRNA为复发性流产发生的独立保护因素[OR(95%CI):0.674(0.519~0.874),0.541(0.392~0.747),均P <0.05]。结论 复发性流产患者胎盘绒毛组织FTO mRNA和ALKBH5 mRNA低表达,二者为复发性流产发生的独立保护因素。

间变性淋巴瘤激酶在治疗非小细胞肺癌中的作用及潜在医学应用

在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗过程中,随着靶向表皮生长因子受体剂(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂的使用,不少患者出现了耐药,耐药的主要原因有EGFR位点的突变,旁路激活等原因。在旁路激活中主要有间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)等通路的激活。最近有权威研究发现ALK与免疫治疗有密切的关系。该文从ALK的结构和生理功能,ALK的小分子抑制剂,ALK的生物学功能及其与NSCLC相关的应用现状进行综述,并展望了未来的发展方向,从而使ALK更好地应用于NSCLC的治疗。

EML4-ALK与EGFR基因突变共存型非小细胞肺癌研究进展

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)占肺癌的80%-85%。分子靶向治疗是目前NSCLC最热门也是最具前景的领域之一,其中的热点分子包括表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(echinoderm microtubuleassoci atedprotein like4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)等。既往研究认为EML4-ALK融合基因与EGFR突变不能共存。近期陆续报道了EML4-ALK融合基因与EGFR突变共存的病例。本文就EML4-ALK融合基因及EGFR突变基因的分子结构、发生率和目前已报道双突变患者的临床特点等进行综述。

ALK、K-ras蛋白表达与非小细胞肺癌病理关系研究

目的：探讨ALK、K-ras蛋白表达与非小细胞肺癌的病理关系。方法分别采用免疫组织化学放大聚合物法、EUvison法检测120例NSCLC患者手术切除石蜡标本中ALK、K-ras蛋白的表达情况，分析ALK和K-ras蛋白的阳性表达与病理指标之间的关系。结果本研究中120例患者ALK蛋白阳性表达17例（14.17%）， ALK蛋白主要位于肿瘤细胞的细胞浆内，少数位于细胞膜上；K-ras蛋白阳性表达66例（55.00%），K-ras蛋白广泛分布于肿瘤细胞的细胞浆内和细胞膜上；ALK和K-ras蛋白均在抽烟史、病理类型和分化程度分布上差异有统计学意义：ALK蛋白在有抽烟史的患者中阳性表达率显著低于无抽烟史者，在腺癌中阳性表达率显著高于鳞癌，在高～中分化癌中阳性表达率显著低于低分化癌，差异具有统计学意义（P〈0.05）；K-ras蛋白在有抽烟史的患者中阳性表达率显著高于无抽烟史者，在腺癌中阳性表达率显著高于鳞癌，在高～中分化癌中阳性表达率显著高于低分化癌，差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 ALK和K-ras蛋白的表达与NSCLC患者是否有抽烟史、临床病理类型以及肿瘤分化程度有紧密联系。

非小细胞肺癌与EML4-ALK融合基因的关系及其检测方法

目前,肺癌已经成为世界范围内发病率及死亡率最高的肿瘤之一。随着分子生物学研究的飞速进展,肺癌的内科治疗已经从传统的化疗、放疗发展为个性化的靶向治疗。针对多种靶基因突变的靶向治疗为肺癌患者延长生命、提高生活质量带来希望。此文就最新的非小细胞肺癌靶基因EML4-ALK相关问题进行综述。

13例EML4-ALK融合基因阳性非小细胞肺癌的临床病理分析

目的探讨棘皮动物微管相关类蛋白4(EML4)-间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合基因阳性非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床病理特征。方法回顾性分析13例EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC患者的临床病理特征,采用HE染色观察组织病理学特征,免疫组化染色法检测组织胸苷酸合成酶(TS)的表达情况,DNA扩增后直接测序法检测组织表皮生长因子受体(EGFR)及K-Ras的突变情况,并分析该亚型肺癌患者培美曲塞的疗效。结果 13例EML4-ALK融合基因阳性NSCLC患者均为腺癌,男性5例,女性8例,中位年龄48岁,4例有吸烟史。10例NSCLC组织为腺泡样结构,其中6例伴有胞内或胞外黏液;所有患者均未检出EGFR和K-Ras基因突变,3例TS高表达,10例TS低表达;7例曾接受培美曲塞化疗方案,疾病控制率为85.7%,中位疾病进展时间为5.5个月。结论 EML4-ALK融合基因阳性NSCLC多见于不吸烟的年轻女性腺癌患者,多为伴有黏液产生的腺泡样结构,不同时合并EGFR和K-Ras突变,组织中TS低表达,大部分对培美曲塞化疗较敏感。

非小细胞肺癌中ALK蛋白表达与临床病理相关

目的探讨间变性淋巴瘤激酶(ALK)与非小细胞肺癌(NSCLC)的病理特征之间的关系。方法用VENTANA ALK(D5F3)免疫组织化学法(IHC)检测125例NSCLC患者手术切除的石蜡标本中ALK蛋白的表达情况,用荧光原位杂交(FISH)检测ALK蛋白表达阳性病例EML4-ALK融合基因表达情况,分析ALK蛋白的表达与NSCLC临床病理特征及预后之间的关系。结果 125例患者中,ALK蛋白阳性表达15例(12.0%),主要定位于细胞质内,少数位于细胞膜上;ALK蛋白在有吸烟史患者中的阳性表达率显著低于无吸烟史者,在腺癌中阳性表达率显著高于非腺癌,在高-中分化癌中阳性表达率显著低于低分化癌(P<0.05);Kaplan-Meier分析显示ALK阳性的患者预后较阴性好(P<0.05)。15例ALK蛋白阳性病例经FISH验证,10例为FISH阳性。结论 ALK蛋白的表达与NSCLC患者是否有吸烟史、临床病理类型以及肿瘤分化程度有紧密联系。IHC可以作为可靠的ALK筛查手段,提高ALK的检出率。FISH检测对确诊ALK蛋白阳性肺癌具有重要意义。

非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因检测结果的初步分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因的突变情况,及其与NSCLC临床病理特征和预后的关系。方法采用突变扩增阻滞系统检测26例NSCLC组织中EML4-ALK融合基因的9种突变和表皮生长因子受体(EGFR)的18、19、20、21外显子突变,进一步分析EML4-ALK融合基因突变与NSCLC临床病理特征和总生存期(OS)的关系。结果 26例NSCLC患者中检测到6例EML4-ALK融合基因突变。EML4-ALK融合基因突变与年龄、吸烟史、临床分期、组织分化和EGFR突变有关,与病理类型、性别、标本类型和血清癌胚抗原无关(P>0.05)。EML4-ALK融合基因阳性者的中位OS为9个月,低于阴性者的12个月,但差异无统计学意义(P=0.460)。结论 NSCLC中EML4-ALK融合基因突变多见于无吸烟史或少量吸烟、年龄较小、临床分期较晚、组织分化较差、无EGFR突变的患者。

癌蛋白NPM-ALK关键磷酸化位点对细胞周期的影响及其机制研究

目的:探讨NPM-ALK蛋白关键磷酸化位点Tyr644和Tyr664对细胞周期的影响及相关的分子机制。方法:建立NPM-ALK和NPM-ALK^(644,664)稳定表达的Jurkat细胞以及瞬时转染的293T细胞,检测各个细胞系的周期分布;应用软琼脂集落形成实验检验野生型NPM-ALK与双点突变型NPM-ALK致瘤能力的差异;利用蛋白质印迹法检测NPM-ALK关键磷酸化位点对下游相关蛋白表达、修饰的调控作用。结果:野生和突变NPM-ALK在瞬时转染的293T细胞和稳定转染的Jurkat细胞中成功表达,转入双点突变型NPM-ALK的Jurkat细胞与转入野生型NPM-ALK的细胞相比呈现出明显的细胞S期阻滞;酪氨酸激酶抑制剂PPP对野生型NPM-ALK转染的Jurkat细胞杀伤效果最强,对双点突变型NPM-ALK转染的细胞的杀伤作用与阴性对照无明显差异;随着NPM-ALK的转入,下游与细胞生长相关分子STAT3、AKT和ERK的磷酸化水平有所升高(P<0.05),双点突变型NPM-ALK转入后,相关蛋白的磷酸化水平与野生型相比显著降低(P<0.05)。结论:癌蛋白NPM-ALK的Tyr644和Tyr664两个关键磷酸化位点的突变会引起细胞S期阻滞和对药物PPP敏感性的降低,其机制可能与NPM-ALK下游的细胞生长相关分子的磷酸化表达变化相关。

ALCL染色体移位的间变性淋巴瘤激酶的表达及其与预后的关系

本研究应用组织芯片技术探讨间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma,ALCL)中染色体移位产生的间变性淋巴瘤激酶(ALK)蛋白的表达及其与患者年龄和预后的关系。建立包含30例ALCL及2例对照组织共96点阵的组织芯片,采用免疫组织化学SP法检测ALK蛋白表达,并应用SPSS软件进行统计学分析。结果显示:①ALK蛋白在2例皮肤原发ALCL患者中表达均为阴性,28例系统性ALCL中有20例(71.4%)表达为阳性,其表现主要为细胞浆和(或)细胞核棕黄色;②ALK蛋白阳性组的年龄低于ALK蛋白阴性组,两者统计学差异具有显著性(p<0.05);③ALK蛋白阳性组的预后好于ALK蛋白阴性组,两者统计学差异具有显著性(p<0.05)。结论:ALK蛋白的表达在ALCL中有很高的发生率,尤其是在低年龄组的患者,它可以作为ALCL的诊断、鉴别诊断和判断预后的一个独立重要指标。

原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤

报告1例原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤。患者男,80岁。因右小腿丘疹、结节伴瘙痒2个月就诊。体格检查发现右小腿胫前数十个孤立的丘疹、结节。皮损组织病理检查示真皮全层大细胞弥漫浸润,细胞核呈间变性;免疫组化染色示CD30(+),间变性淋巴瘤激酶(ALK-1)(-)。结合临床,诊断为原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤。

日粮营养水平对肉鹅血清钙磷、碱性磷酸酶及胫骨钙磷的影响

试验选用216只1日龄东北肉鹅,随机分为9个处理,每个处理设4次重复,每个重复6只试鹅,采用四因素3水平L9(34)正交试验设计,通过血清生化试验和胫骨成分测定试验,探讨1～28日龄东北肉鹅日粮代谢能、粗蛋白、钙和非植酸磷水平对血清钙磷、碱性磷酸酶以及胫骨灰分、钙磷的影响。结果表明:日粮粗蛋白和钙水平对血清磷含量的影响极显著(P<0.01),日粮粗蛋白、钙和非植酸磷水平对血清碱性磷酸酶影响显著(P<0.05),日粮粗蛋白水平对胫骨磷含量影响显著(P<0.05),日粮非植酸磷水平对骨钙含量和胫骨灰分影响显著或极显著,血清磷与血清碱性磷酸酶存在较强的负相关性(r=-0.85)。

骨折延迟愈合患者血清TGF-β1、BMP-2、ALP及血液流变学指标研究

目的探讨骨折延迟愈合患者血转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)、骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)及血液流变学指标变化。方法:选取67例骨折延迟愈合患者(观察组)和67例骨折正常愈合患者(对照组)为研究对象,比较两组患者年龄、性别构成、骨折严重情况、骨折固定、感染及患者功能活动情况。检测两组患者骨折后12周血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数、全血黏度及血清TGF-β1、BMP-2、ALP水平,并进行对比分析。结果 :观察组中60岁以上患者43例(64.18%),严重骨折41例(61.19%),内固定不稳9例(13.43%),感染11例(16.42%),功能活动不合理15例(19.40%),各项指标发生比例均大于对照组(P<0.05)。观察组各血液流变学指标均明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.05)。观察组患者血清TGF-β1、BMP-2、ALP水平均明显低于对照组患者,差异具有显著性(P<0.05)。结论:骨折延迟愈合与患者年龄、骨折严重程度、内固定、感染以及功能活动情况有关,且患者血清TGF-β1、BMP-2、ALP明显降低,血液微循环状态也较差。

微乳头型肺腺癌患者术后临床病理学特征及影响因素分析

目的目前术后微乳头型肺腺癌患者预后影响因素的相关研究较少。文中旨在探讨术后微乳头型和非微乳头型肺腺癌患者的临床病理特征及影响因素。方法回顾性分析2015年6月1日至2017年12月31日就诊于郑州大学附属肿瘤医院呼吸三科384例肺腺癌患者的术后临床资料。根据术后病理是否含微乳头分为:微乳头型组(术后微乳头型肺腺癌,n=82)、对照组(术后非微乳头型肺腺癌,n=302)。检测间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合蛋白的表达情况,并对其临床病理特征进行相关性分析,探讨其术后危险因素。结果微乳头型组ALK融合蛋白阳性率(12.20%)、支气管侵犯率(48.78%)、脉管癌栓发生率(25.61%)明显高于对照组(0.33%、30.79%、0.99%);EGFR突变率(51.22%)及<60岁人数(34.15%)低于对照组(64.24%、50.99%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示:患者ALK融合蛋白表达情况、有无脉管癌栓、年龄是肺腺癌患者术后病理是否含微乳头成分的危险因素(P<0.05)。结论 ALK融合蛋白可成为临床判断微乳头型肺腺癌的重要指标之一。临床医师应注重ALK融合蛋白表达情况、脉管癌栓、年龄等危险因素,以降低微乳头型肺腺癌的发生率。

晚期非小细胞肺癌患者胸水液基细胞学蜡块中新抗体D5F3检测的临床价值

目的探讨晚期非小细胞肺癌患者胸水液基细胞学蜡块中ALK新抗体D5F3检测的临床价值。方法选择200例经胸膜活检确诊的非小细胞肺癌且胸水发现癌细胞患者的胸水,将其制成液基细胞学蜡块,应用ALK新型抗体D5F3检测该基因蛋白表达情况,分别从阴性、阳性(1～3+)对比其在两种标本中的表达异同。结果 200例液基细胞学蜡块标本检测显示,9例ALK阳性(1～3+),191例ALK (-),阳性率4.5%。阳性胸水的组织学类型均为腺癌,其中,1例(+),5例(2+),3例(3+);≤60岁的6例,>60岁的3例(中位年龄51岁),差异有统计学意义(P<0.05);男性5例,女性4例。与同一患者的胸膜活检标本ALK表达情况完全一致,符合率为100%。结论 ALK蛋白阳性多见于晚期肺腺癌中较年轻的患者,D5F3新抗体在晚期NSCLC患者的胸膜活检组织及胸水液基细胞学蜡块中表达情况一致。胸水液基细胞块可作为检测ALK蛋白的样本。对原发性肺腺癌合并胸膜转移出现恶性胸腔积液的患者,可根据胸腔积液沉渣包埋标本ALK蛋白表达指导临床靶向治疗。

基于CRISPR/Cas13a的EML4-ALK融合基因检测方法的建立

[目的]构建基于CRISPR/Cas13a蛋白的SHERLOCK技术平台,并将其应用于肺癌EML4-ALK融合基因的检测。[方法]构建EML4-ALK融合基因的质粒标准品;利用RPA和PCR技术分别扩增目的基因后进行SHERLOCK检测并比对结果,比较基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的灵敏度,评估SHERLOCK检测目的基因及多种非目标基因的特异性。[结果]成功构建EML4-ALK融合基因表达质粒标准品;基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的相对荧光值无显著差异,最低检测下限为10 copies/μL,且在5 min内荧光达到平台期;SHERLOCK技术仅对EML4-ALK融合基因有阳性检测信号,对EML4、ALK、EGFR T790M和EGFR L858R基因无阳性检测信号。[结论]基于SHERLOCK技术的EML4-ALK融合基因检测方法具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优势,有望为肺癌EML4-ALK融合基因的早期诊断提供重要依据。

EML4-ALK 融合基因在Ⅰ期肺癌患者中分布趋势及临床意义

目的：检测Ⅰ期肺癌患者EML4-ALK融合基因突变情况，初步探讨EML4-ALK融合基因在Ⅰ期肺癌患者中的突变分布特征及其在肺癌治疗中的临床意义。方法收集2013年2月至2014年12月在上海市第一人民医院分院胸外科接受手术治疗，病理分期为Ⅰ期的256例肺癌患者肿瘤组织，提取RNA，逆转录成cDNA，采用ARMS法对EML4-ALK融合基因进行检测，根据阳性质控、阴性质控和RNA质控对EML4-ALK融合类型分析判断。结果256例Ⅰ期肺癌患者中17例（6.64％） EML4-ALK融合基因突变，肺腺癌的突变率（16／207，7.73％）高于肺鳞癌（1／39，2.56％）、肺腺鳞癌（0／4，0）和大细胞癌（0／5，0）的突变率；年龄＜63岁肺癌患者的突变率（14／139，10.07％）显著高于年龄≥63岁的肺癌患者的突变率（3／117，2.56％），P ＝0.009；EML4-ALK 融合与肿瘤侵及脏层胸膜组发生率（9／80，11.25％）显著高于未侵及脏层胸膜组发生率（8／176，4.55％），P＝0.045；EML4-ALK在早期肺癌中更倾向于1型融合。结论 EML4-ALK融合基因的发生与患者的年龄和肿瘤是否侵及脏层胸膜相关，在Ⅰ期肺癌患者中多发生1型融合。