间充质干细胞外泌体联合ALR15mRNA减轻APAP引起的肝细胞凋亡

目的:探讨间充质干细胞外泌体(MSC-Exos)联合肝再生增强因子(ALR15)mRNA对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝细胞凋亡的影响。方法:通过NAT粒径检测、TEM电镜检测以及Western Blot鉴定提取的MSCExos。通过免疫荧光和Western Blot鉴定体外合成ALR15 mRNA。通过荧光染色、流式细胞术和Western Blot检测外泌体联合ALR15 mRNA对APAP引起的肝细胞凋亡的影响。结果:成功分离获得了MSC-Exos,并体外成功合成了ALR15 mRNA。外泌体联合ALR15 mRNA可进入肝细胞,通过抑制ROS的生成使APAP诱导的肝细胞凋亡减轻,且外泌体联合ALR15 mRNA比仅添加外泌体的抗凋亡效果更好。结论:MSC-Exos联合ALR mRNA可通过抑制ROS产生减轻APAP诱导的肝细胞凋亡,为干细胞外泌体联合ALR15 mRNA治疗APAP引起的肝细胞凋亡提供一个新的治疗思路。

受限空间气泡雾化尘-雾粒径耦合试验研究

为揭示细颗粒粉尘与雾滴粒径之间对位配置降尘规律,建立受限空间气泡雾化尘-雾粒径耦合试验系统,采用Spraytec粒度仪、直径为1.5 mm的内气外液型喷嘴等仪器,模拟风流扰动下无尘源、释放煤质尘源2种状态6种气液比(ALR)试验条件,测试研究粉尘粒径、雾滴粒径(XNS)及降尘效率之间的影响关系。数值拟合得到ALR、XNS分别与全尘效率(η)的Gompaertz、Parabola函数关系式,以及ALR、X_(NS)分别与4个粒径区间的分级降尘效率(η_(<2μm)、η_(25μm)、η_(510μm)、η_(>10μm))的Gompaertz函数关系式。模拟得出捕集呼吸性粉尘(Stokes直径d≤5μm)ALR、XNS分别为0.4~0.6、15~25μm,捕集可吸入类粉尘(5μm≤d≤10μm)ALR、X_(NS)分别为0.4~0.5、25~30μm。

ERK在ALR抑制免疫过程中的变化及意义

目的观察肝再生增强因子(ALR)对外周血单核细胞增殖时ERK的影响,以探明ALR免疫抑制相关机理。方法梯度离心法分离健康人外周单核细胞,用ConA 5μg/ml刺激细胞增殖,选定最佳研究时间;观察不同剂量ALR抑制功能,选用最佳抑制剂量;利用Western blot检测ALR抑制细胞增殖时ERK的磷酸化改变。结果 ConA刺激细胞增殖最佳时间是60 h,ALR能抑制细胞增殖,并呈剂量依赖关系,30μg/ml ALR抑制效果最显著;ALR对单核细胞无直接增殖作用。ConA能引起ERK含量和磷酸化明显增加,ALR则抑制ConA对ERK的刺激,以抑制ERK2最明显。结论 ALR可能通ERK的含量和抑制ERK2的磷酸化抑制细胞增殖。

肝再生增强因子通过增加调节T细胞数量保护小鼠急性肝损伤

目的研究肝再生增强因子(ALR)保护急性肝损伤的作用及机制。方法将30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、急性肝损伤组和ALR干预组。急性肝损伤组小鼠按2 m L/kg体质量的剂量予以腹腔注射500 m L/L四氯化碳(CCl4)矿物油溶液1次。ALR干预组于CCl4注射前8 h尾静脉注射ALR质粒,正常对照组注射等量生理盐水注射液。收集小鼠肝组织和血液标本,HE染色观察肝组织病理形态学变化;生化法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;流式细胞术检测肝组织中调节性T细胞(Treg)的数量,实时定量PCR(qRT-PCR)检测肝组织Foxp3、ALR、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。结果 ALR干预组小鼠肝组织中ALR mRNA表达水平显著高于急性肝损伤组和正常对照组,急性肝损伤组与正常对照组相比无明显差异;流式细胞术检测结果显示ALR干预组小鼠肝组织中CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞为(5.90±0.10)%,高于急性肝损伤组的(4.23±0.46)%和正常对照组的(2.93±0.74)%,急性肝损伤组显著高于正常对照组;ALR干预组小鼠肝组织中Foxp3 mRNA表达水平高于急性肝损伤组和正常对照组,急性肝损伤组高于正常对照组,但差异无统计学意义;ALR干预组与急性肝损伤组相比,IL-6 mRNA、TNF-αmRNA表达水平降低,而与正常对照组相比无明显变化,急性肝损伤组与正常对照组相比,IL-6 mRNA、TNF-αmRNA表达水平明显升高。结论 ALR通过上调Treg数量保护小鼠急性肝损伤,可能与Treg下调肝脏IL-6、TNF-α表达有关。

ALR中表面活性物质对氧气液传质影响

在气升式内环流反应实验装置中,添加乙醇和乙酸异戊酯作为表面活性物质考察了氧的气液传质性能.结果表明,在纯水和添加表面活性物质的情况下,较大气速范围内,氧的气液体积传质系数随气速提高而增加.添加表面活性物质可强化气液传质,两种物质的浓度对体积传质系数也有一定影响,且其影响在气速较高的情况下更为显著.提出乙醇分子在界面形成单分子层从而形成电荷分布的观点,并以此观点对乙醇影响氧的气液传质性能进行了分析,同时对添加乙酸异戊酯时体积传质系数出现峰值的情况进行了讨论.

Na^+,K^+-ATPase调节肝再生增强因子促HepG2细胞增殖

采用四甲基噻唑盐(M TT)法检验肝再生增强因子(ALR)对H epG 2细胞增殖作用;[3H]-T dR掺入测定细胞DNA合成;采用无机磷比色法测定细胞N a+,K+-ATPase的酶活力。结果表明:ALR通过促进H epG 2细胞DNA合成,使细胞增殖,并存在剂量效应正相关性(P<0.01);ALR对N a+,K+-ATPase酶活呈剂量时间依赖型影响;奎巴因可以通过抑制细胞N a+,K+-ATPase影响ALR对H epG 2细胞增殖促进作用。因此,N a+,K+-ATPase能参与调节ALR促进H epG 2细胞的增殖。

大鼠肝脏再生增强因子cDNA的克隆及其序列分析

目的：克隆大鼠肝脏再生增强因子（ＡＬＲ）ｃＤＮＡ，并对其序列进行分析。方法：建立大鼠２／３肝切除模型，从再生肝组织中提取总ＲＮＡ，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出大鼠ＡＬＲｃＤＮＡ，亚克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ载体，并将ＤＮＡ序列及其推测的氨基酸序列与Ｇｅｎｅｂａｎｋ作同源性比较。结果和结论：克隆到大鼠ＡＬＲｃＤＮＡ，经核苷酸序列测定证实序列完全正确，其核苷酸序列没有任何突变，它与酵母ＥＲＶ１ｃＤＮＡ有较高的同源性，核苷酸序列同源性达５４．９９％，氨基酸序列同源性达４７．０１％，并发现氨基酸序列中含有锌指蛋白结合区域。

中药治疗肝纤维化大鼠对ALR基因表达的影响

目的:从分子水平探测中药治疗肝纤维化的作用及机制。方法:利用CCL4复合因素建立SD大鼠肝纤维化模型。实验动物分成正常对照、模型、中药治疗三组,分别检测各组生化、肝纤维化指标和肝组织中ALR mRNA表达变业。结果:1.ALT、AST、A/G、HA、PCⅢ、LN、PLD各指标:模型组均高于对照组(P<0.01),中药治疗组低于模型组(P<0.01),并且,HA、PCⅢ、LN、PLD的降低与病理组织反应肝纤维化的好转程度一致;2.肝组织中ALR mRNA的相对表达量:中药治疗组、模型组明显高于对照组(P<0.01),中药治疗组高于模型组(P<0.01)。结论:联联合检测生化、肝纤维化指标可提高肝纤维化早期诊断;肝纤维化时肝组织ALR mRNA的高表达可逆转肝纤维化。

两级CSTR亚硝化启动及稳定运行试验研究

采用两级CSTR反应器对实际生活污水亚硝化的启动过程及稳定运行主要影响因素进行了研究.通过向生活污水里投加（NH4）2SO4来提高进水氨氮浓度,并逐渐调整两级反应器的曝气强度至DO浓度分别为（1.5±0.12）,（0.35±0.1）mg/L,历经45d即实现了亚硝化的启动,亚硝化率保持在90.3%以上,氨氧化率保持在91.2%以上低氨氮生活污水运行时,通过第一级反应器中三组DO/ALR的效果对比,表明DO/ALR在1.2-2.0mgO2/（gN·d）时亚硝化效果最好.降低氨氮浓度以及增大HRT两种情况下导致ALR改变时,维持上述DO/ALR范围依然可以保证亚硝化的稳定.

人肝再生增强因子单克隆抗体的制备:以非纯化的大肠杆菌表达抗原筛选杂交瘤

目的 :利用杂交瘤技术、以非纯化的大肠杆菌表达重组蛋白作为筛选抗原 ,制备小鼠抗人肝再生增强因子(hALR)的单克隆抗体。方法 :用实验室纯化的重组hALR 硫氧环蛋白融合蛋白免疫BALB c小鼠 ;小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合后经HAT选择培养基筛选杂交瘤 ;以重组质粒pQE30 hALR与空质粒pQE30在大肠杆菌中诱导表达后的细菌裂解产物作为筛选抗原和对照抗原 ,用ELISA方法筛选能分泌抗hALR单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞克隆 ;进一步以ELISA方法和免疫印迹方法检测该杂交瘤细胞产生的抗体对真核细胞表达的重组hALR及人体血清中天然hALR的反应性。结果 :成功筛选出一株能稳定分泌抗hALR单克隆抗体的杂交瘤细胞 ;其产生的抗体能对真核细胞表达的重组hALR及人体血清中天然的hALR发生特异的抗原抗体反应。结论 :大肠杆菌表达的重组蛋白在以空质粒表达产物作为对照下 ,不经过任何纯化步骤也能够用于单克隆抗体制备中的杂交瘤筛选 ;hALR单克隆抗体为深入研究hALR提供了研究手段。

基因表达谱芯片技术筛选肝再生增强因子反式调节基因

目的:为了阐明人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)的表达对于肝细胞基因表达谱的影响, 我们应用基因芯片技术,对于转染和未转染的HepG2细胞进行了分析. 方法:从HepG2细胞RNA中用反转录聚合酶链反应法(RT- PCR)扩增出ALR编码区DNA,常规分子生物学技术构建ALR的真核表达载体pcDNA3.1(-)-ALR,利用脂质体转染技术转染HepG2细胞,ALR的表达以Western blot杂交技术证实.从转染和非转染细胞HepG2种提取总mRNA,逆转录为cDNA,并进行基因芯片技术分析. 结果:经过限制性内切酶分析和序列测定,证实pcDNA3.1 (-)-ALR构建正确.ALR在HepG2细胞中的表达以Western blot杂交技术得到证实.对于ALR重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达谱,利用基因芯片技术进行分析.结果表明,2种基因的表达水平上调,24种基因的表达水平下调.这些基因包括淀粉酶α、肿瘤坏死因子受体、金属蛋白酶1组织抑制因子、性激素相关蛋白等基因,相信这些类型的基因在ALR所发挥的生物学效应起到重要的作用. 结论:ALR对于肝细胞基因表达谱存在一定影响;基因芯片技术是分析蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径,有助于了解ALR对肝细胞和其他生物学功能的调节作用.

10G EPON中一种基于ALR的节能机制研究

提出了一种适用于10G EPON的ALR节能机制,并详细阐述了其在10G EPON系统中的设计思路。该节能机制采用了基于带宽的单阈值控制策略和双向控制帧信息交换机制,降低了ONU的功率损耗。仿真结果验证了该节能机制的有效性。

鱼腥藻PCC7120质粒上毒素-抗毒素基因对alr9029/asr9028的初步研究

指出了大肠杆菌的毒素-抗毒素系统(TAs)能介导解离后致死机制维持细菌质粒的稳定性和参与环境胁迫诱导细菌生长抑制或死亡,在鱼腥藻PCC7120质粒上的基因对alr9029/asr9028具有与TA系统较高的同源性.为了证实该基因对属于TA系统,通过生物信息学分析了alr9029/asr9028的遗传结构,设计特异性引物,扩增得到大小为198 bp的asr9028和387 bp的alr9029.PCR产物经Bam H I和HindШ双酶切后被插入p MD18-T和p ET-30a中,依次构建克隆载体和表达载体.经SDS-PAGE电泳检测,含有His6标签的表达蛋白相对分子量分别为12.4k Da和19.2 k Da,且为可溶性蛋白.故初步认定asr9028为抗毒素基因,alr9029为毒素基因,二者共同构成一个TA系统.

微生物胞内酶(细胞)在气升式生物反应器中的大规模生产

气升式生物反应器由于周期变压和供氧特性在生产微生物胞内酶（细胞）时具有优良的性能，酶活力和稳定性的提高、发酵周期的缩短、单位能耗的降低、生产能力的提高，均显示了该反应器在传质、混合、流场特性、能耗等综合性能优越于机械搅拌发酵罐。

鱼腥藻PCC7120染色体MazEF同源基因对asr0757/alr0758的初步研究

鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758,经NCBI比对显示其与大肠杆菌中的毒素-抗毒素基因Maz EF具有较高的同源性,且具有毒素-抗毒素系统基因的保守遗传结构,为研究其是否属于Maz EF家族系统基因,构建同时含有asr0757和alr0758基因的双启动子选择性表达载体,先选择性诱导了该基因对的表达,再验证了其表达产物对细菌生长的影响.结果显示:成功诱导表达出了目的蛋白asr0757(13.5KD)和alr0758(17.5KD),当单独诱导asr0757基因表达时,细菌生长状况不受影响,单独诱导alr0758表达时细菌生长明显受到抑制,同时诱导asr0757和alr0758基因时细菌生长恢复正常,说明asr0757/alr0758构成具有生物功能的Maz EF家族系统基因对,具有毒性与抗毒性功能.

气体环流生化反应器的研究及进展

介绍了气体环流生化反应器的特点、工作原理以及在工业上的一些应用，指出该类型反应器主要的特性参数为气含率、液体循环速度和传氧速率；对这些特性参数的测量、评价和预计作了概要评述，同时也指出了该类型反应器研究的不足之处，并就改进工作作了展望．

中药对大鼠中毒性肝纤维化ALR表达丰度的影响

目的 :从分子水平检测中药预防肝纤维化的作用及机理。方法 :利用CCl4复合因素对SD大鼠制造肝纤维化模型 ,然后用中药灌胃进行预防 ,检测其生化指标、肝纤维化指标、病理情况以及肝组织中AL RmRNA表达量。结果 :HA、PCⅢ、LN、PLD的升降与病理组织切片反映的肝纤维化程度相一致 ,在肝纤维化形成的同时给予中药预防 ,ALRmRNA的表达增强。结论 :联合检测生化、肝纤维化指标 ,可提高肝纤维化早期诊断 ;通过促进ALR的表达可延缓或减轻肝硬化的发生。

微生物胞内酶(细胞)在气升式生物反应器中的大规模生产

气升式生物反应器由于周期变压和供氧特性在生产微生物胞内酶（细胞）时具有优良的性能，酶活力和稳定性的提高、发酵周期的缩短、单位能耗的降低、生产能力的提高，均显示了该反应器在传质、混合、流场特性、能耗等综合性能优越于机械搅拌发酵罐。