夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元形态学的影响

目的:观察夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元形态学的影响。方法:本实验以ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠为实验对象,选用经PCR鉴定的ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠24只,按照随机数字表法将小鼠随机分为电针组、手针组和模型组(均n=8只),取同窝野生型小鼠8只作为阴性对照组。于小鼠日龄60天开始干预,电针组针刺双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴,躯干同侧2 Hz电针治疗;手针组针刺双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴;模型组予以捆绑固定,20 min/次,2次/周,共4周;阴性对照组不做任何处置。于小鼠日龄120天时取腰膨大组织进行HE染色和尼氏染色来观察各组小鼠腰髓前角运动神经元胞体及胞核的状态并对运动神经元进行计数,透射电镜观察腰髓前角神经元超微结构变化。结果:HE染色可见模型组小鼠腰髓前角运动神经元数目明显减少,神经细胞结构不清、固缩,胞质胞核染色不清,核固缩,出现空泡状改变;与模型组比较,手针组和电针组小鼠腰髓前角运动神经元数目增多,神经细胞结构形态有所改善,空泡化减少,且电针组效果优于手针组。尼氏染色可见模型组小鼠腰髓前角运动神经元数目明显减少,非神经细胞增多,病变的神经元出现尼氏体不清,核固缩,细胞体积减小;与模型组比较,手针组和电针组小鼠腰髓前角运动神经元数目增多,神经细胞结构形态有所改善,能够明显减轻运动神经元的丢失,且电针组效果优于手针组。运动神经元计数:模型组小鼠腰髓前角运动神经元数目明显减少(P<0.01);手针组和电针组小鼠腰髓前角运动神经元数目较模型组增多(P<0.05或P<0.01),且电针组较手针组增多更明显(P<0.05)。透射电镜可见模型组小鼠腰髓前角神经细胞萎缩,细胞膜皱缩,线粒体不同程度肿胀,嵴出现断裂、减少,有些线粒体虽可辨认,但已呈空泡状,核膜凹陷变形或部分破裂,异染色质聚集成块,变性的神经细胞周围可见胶质细胞围绕形成卫星现象;与模型组比较,手针组和电针组小鼠腰髓前角神经细胞超微结构有所改善,且电针组改善更明显。结论:夹脊电针能够改善ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元形态学变化,其效果优于手针治疗。

夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元P38 MAPK影响的研究

目的:通过夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠的干预,观察其对小鼠腰髓脊髓前角运动神经元P38、P-P38表达,旨在证实针刺对神经元细胞的保护作用,为夹脊电针治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)提供实验依据。方法:选取ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠18只,按随机数字表法随机将其分为电针组、手针组、模型组,每组各6只,阴性对照组选取同窝野生型小鼠6只。在小鼠出生后第60天开始进行干预。电针组:双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴针刺,疏波刺激;手针组:双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴针刺,每10 min捻转1次;模型组、阴性对照组:同一时间,同一时长抓握、捆绑处理。共4周。小鼠出生120天时进行PP38MAPK、P38MAPK免疫组织化学法检测,并用图像分析仪对每张图片阳性表达的平均光密度(mean density)及累积光密度(IOD)进行测定和统计分析。结果:模型组P-P38、P38表达及P-P38/P38比值均明显比阴性对照组升高,且具有极显著性差异(P<0.01)。与模型组和手针组相比,电针组表达明显降低(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,虽然手针组比值有所降低,但无显著性差异(P>0.05)。说明夹脊电针可以明显降低ALS-G93A小鼠腰髓前角运动神经元P-P38、P38表达及P-P38/P38比值。结论:夹脊电针对发病中期的ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元P-P38表达有下调作用,抑制P38MAPK的活化,从而起到有效保护神经元细胞的作用。

夹脊电针对ALS-SOD1G93A转基因小鼠脊髓前角运动神经元β-catenin及GSK-3β表达的影响

目的探究夹脊电针对ALS-SOD1^G93A转基因小鼠腰髓前角运动神经元β-catenin及GSK-3β表达的影响。方法选取18只ALS-SOD1^G93A转基因阳性雌性小鼠为实验对象,随机分为模型组、手针组、电针组,每组6只,另取6只同窝野生型雌性小鼠为阴性对照,小鼠8周龄时开始实验:阴性对照组不给予任何干预;模型组给予捆绑处理4周;手针组于双侧L1-2、L5-6夹脊穴给予普通针刺治疗4周;电针组于双侧L1-2、L5-6夹脊穴给予电针治疗4周。期间观察小鼠一般活动状况,并通过转棒实验评价小鼠协调性、力量和平衡能力。于16周取小鼠腰膨大L1-6腰髓,釆用免疫组化S-P法检测脊髓β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β的表达水平。结果与对照组相比,模型组转棒时间从12周开始逐渐减少,手针组、电针组从13周开始减少(P<0.05)。与模型组相比,手针组、电针组转棒时间下降趋势较为缓慢,差异有统计学意义(P<0.05).β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β主要在小鼠脊髓前角运动神经元细胞质中表达。与对照组相比,模型组小鼠脊髓前角β-catenin表达下降(P<0.05);与模型组相比,手针组、电针组β-catenin、β-GSK-30表达升高,p-GSK-3β/GSK-3β比值增加(P<0.05);与手针组比较,电针组β-catenin、p-GSK-3β表达升高,p-GSK-3β/GSK-3β比值升高(P<0.05)。结论夹脊电针通过抑制GSK-3β的活性,上调前角运动神经元β-catenin,对神经元细胞产生保护作用。

夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)小鼠腰髓中p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响研究

目的探究p38 MAPK/NF-κB信号通路在夹脊电针治疗肌萎缩侧索硬化-超氧化物歧化酶1^(G93A)(ALS—SOD1^(G93A))转基因小鼠的作用机制。方法选取45只ALS-SOD1^(G93A)转基因阳性雌性小鼠为研究对象,随机分为模型组、手针组、电针组,每组各15只,另取15只同窝野生型雌性小鼠为对照组,小鼠60 d龄时开始实验:对照组、模型组每周给予捆绑固定20 min 2次,手针组给与普通针、电针组采用全能脉冲电疗仪给与电针治疗,每周2次刺激双侧L_(1～2)、L_(5～6)夹脊穴,共治疗4周。120 d取小鼠腰膨大L_(1～6)腰髓,采用尼氏染色、透射电镜观察进行形态学检测,采用免疫组织化学法检测p38、p-p38表达,免疫荧光检测p65核移位,蛋白免疫印迹法检测全称肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、核因子-κB抑制因子(IκB-α)、p38、p65、p-IκB-α、p-p38、p-p65的表达,实时定量PCR(qPCR)检测TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达。结果模型组神经元数目明显减少(P<0.05),手针组与电针组形态学均有较大改善、电针组改善更佳。模型组炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA水平上升,与模型组及手针组比较,电针组TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA明显降低(P<0.05)。模型组检出大量p38、p-p38阳性细胞分布于脊髓灰质前角,与模型组比较,手针组与电针组p-p38表达减弱,电针组减弱程度更大;与对照组比较,模型组p-IκB-α、p-p65含量升高(P<0.05);与模型组相比,手针组与电针组p-IκB-α、p-p65含量下降(P<0.05)。手针组与电针组均抑制p65入核过程,其中电针组抑制更加明显。结论夹脊电针通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,对腰髓前角运动神经元产生保护作用,缓解ALS病情的进展,为夹脊电针临床推广提供了理论依据。

丁苯酞单独或联合应用利鲁唑对hSOD1^(G93A)转基因小鼠影响

目的观察丁苯酞(NBP)在肌萎缩侧索硬化(ALS)治疗的应用前景。方法通过转轮实验、抓力实验、步长测量及发病期、生存期指标观察NBP联合利鲁唑(合用药)、单独利鲁唑、单独NBP对SOD1G93A转基因鼠的影响。结果 90d时:各组间各实验指标无明显差异;120d时:1转轮实验,三个用药组均优于对照组;合用组优于NBP组,但不优于利鲁唑;利鲁唑组有优于NBP组的趋势;2步长测量,三个用药组与对照组相比较,合用组优于NBP组及利鲁唑组,但P>0.05;利鲁唑组并不优于NBP组(P>0.05);3抓力实验,三个用药组均优于对照组;合用组优于NBP及利鲁唑组;利鲁唑组与NBP组比较,P>0.05;4发病时间与生存期,用药组均能推迟小鼠发病时间,与对照组相比,P<0.05;合用组优于NBP组,但与利鲁唑组相比,P=0.12>0.05;NBP组和利鲁唑组相比,P=0.27>0.05;就生存时间而言,各用药组均能延长小鼠生存时间,与对照组相比,P<0.05;合用组优于NBP组,与利鲁唑组相比,P>0.05;NBP组与利鲁唑组相比,P>0.05。结论 NBP或利鲁唑单独或联合应用均可以提高ALS模型小鼠运动协调能力,延长生存期。联合用药比单独用NBP更能延长小鼠生存期。