AM251对糖尿病视网膜病变大鼠ICAM-1及VEGF表达的影响

目的探讨大麻素1受体拮抗剂AM251对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜细胞间黏附因子(ICAM)-1和视网膜血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组,正常对照组又分为正常生理盐水对照组(NC组)、正常AM251干预组(NC-C组),糖尿病模型组又分为糖尿病视网膜病变组(DR组)、AM251干预组(DR-C组)。糖尿病模型组予腹腔注射链脲佐菌素55 mg/kg复制糖尿病视网膜病变模型.AM251干预组给予AM 251 0.5 mg/kg腹腔注射,1次/d,连续12 w,其余两组给予等量生理盐水腹腔注射。每周监测血糖、体质量,AM251干预12 w后通过直接及间接眼底镜观察眼底;水合氯醛麻醉下取眼,心脏取血,免疫组织化学法检测视网膜VEGF的变化、Western印迹法分别检测ICAM-1、VEGF的变化,ELISA法测视网膜组织ICAM-1、VEGF的变化及血清中s ICAM-1的变化。结果与正常对照组相比,模型组VEGF、ICAM-1水平明显升高(P<0.05),经AM251干预后,DR-C组VEGF、ICAM-1较DR组降低(P<0.05),较正常组仍升高(P<0.05)。结论AM251可减少糖尿病视网膜病变大鼠视网膜ICAM-1、VEGF的表达,改善视网膜的超微结构,这可能是对糖尿病视网膜病变的保护机制之一。

AM251对糖尿病脑病大鼠认知功能和海马区细胞凋亡的影响

目的观察AM251对糖尿病脑病大鼠认知功能及海马区神经细胞存活的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病脑病组、AM251治疗组,除正常对照组外,其他各组腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg复制糖尿病脑病模型,AM251治疗组分别给予AM251 0.5 mg/kg腹腔注射,每天一次,其余两组给予等量生理盐水腹腔注射,1个月后进行外迷宫测试其学习记忆能力,断头取脑,免疫组织化学法、Western印迹法分别检测N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性融合蛋白(NSF)蛋白表达的变化,TUNEL法检测海马区神经细胞凋亡。结果糖尿病脑病组大鼠学习记忆能力明显低于正常对照组(P<0.05),TUNEL阳性细胞增多(P<0.05),酪氨酸磷酸化指标NSF表达增加(P<0.05),AM251治疗组大鼠较糖尿病组学习成绩升高(P<0.05),TUNEL阳性细胞减少(P<0.05),NSF表达减少(P<0.05)。结论 NSF表达增高可能与糖尿病大鼠海马神经元凋亡及认知功能障碍有关,AM251可以通过降低NSF的表达,减少神经元凋亡,从而对糖尿病大鼠学习与记忆障碍有一定程度的改善。

大麻素受体1拮抗药类似物AM251对糖尿病肾病模型大鼠肾组织足细胞损伤的保护作用研究

目的:研究大麻素受体1(CB1)拮抗药类似物AM251对糖尿病肾病模型大鼠肾组织足细胞损伤的保护作用。方法:将大鼠随机分为阴性对照(生理盐水)组、对照[1 mg(/kg·d)AM251]组、模型组和AM251干预[建模+1 mg(/kg·d)AM251]组,每组10只。后2组建立糖尿病肾病模型,建模成功后腹腔注射相应药物,12周后检测各组大鼠24 h尿蛋白量、血肌酐清除率(Ccr)、肾质量/体质量(KW/BW)、血清生化指标和肾组织中CB1和肾组织足细胞裂隙蛋白Nephrin、Podocin蛋白的表达,并观察肾组织和足细胞病理变化。结果:与阴性对照组比较,对照组大鼠各检测指标差异无统计学意义(P>0.05),模型组和AM251干预组大鼠24 h尿蛋白量、KW/BW、血清生化指标和肾组织中CB1表达均明显增加(P<0.05),Ccr和足细胞中Nephrin、Podocin蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组比较,AM251干预组大鼠24 h尿蛋白量、KW/BW明显降低(P<0.05),Ccr和足细胞中Nephrin、Podocin蛋白表达均明显增强(P<0.05),其余组间差异无统计学意义(P>0.05)。阴性对照组和对照组大鼠肾组织和足细胞形态正常,模型组大鼠肾组织和足细胞有明显糖尿病肾病的病理改变,AM251干预组大鼠糖尿病肾病的病理改变较模型组均改善。结论:AM251对糖尿病肾病模型大鼠足细胞病变具有保护作用,部分机制可能与上调足细胞中Nephrin、Podocin蛋白的表达有关。

大麻素受体1对肾癌细胞786-O增殖及迁移能力的影响

目的探索大麻素受体1(CB1)在肾癌组织中表达及对肾癌细胞系786-O相关生物学功能的影响。方法采用免疫组化实验方法检测肾癌组织标本中CB1表达情况;应用CB1拮抗剂AM251处理786-O肾癌细胞株,观察细胞的增殖及迁移能力的改变。结果免疫组化结果显示相对于癌旁组织,肾癌组织中CB1表达量较高;通过CB1拮抗剂AM251处理后,786-O肾癌细胞增值能力明显下降:25μmol/L组48h和72h抑制率分别为28.09±2.99和32.83±1.53;50μmol/L组48h和72h抑制率分别为78.59±5.69和88.02±5.34,其IC50在48h和72h分别为(38.20±4.75)μmol/L和(35.30±4.80)μmol/L;经过CB1拮抗剂AM251处理后迁移能力发生显著下降:与对照组细胞迁移数目(184.33±11.06)相比,20μmol/L AM251处理组(114±9.64,P=0.001 7)、30μmol/L AM251处理组(41.67±3.51,P=0.001 5)随着药物浓度的升高迁移细胞呈明显减少趋势。结论 CB1可能参与肾癌发生发展,为寻找潜在的新的治疗靶点提供理论依据。

反复电针对佐剂性关节炎大鼠伏膈核尾状核内大麻素CB1受体表达的影响

目的:研究大麻素CB1受体是否参与电针镇痛。方法:以完全弗氏佐剂造成AA大鼠模型,在电针治疗四次后以大麻素CB1受体拮抗剂AM251进行干预,检测各组大鼠缩爪反射潜伏期(PWL)的变化,并应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)和Western blot检测伏膈核、尾状核内CB1受体mRNA和蛋白质表达情况。结果:(1)电针治疗后大鼠PWL延长,电针+AM251组的电针镇痛效果显著弱于电针组(P<0.01);(2)电针+AM251组较电针组大鼠伏膈核、尾状核内CB1受体mRNA表达水平显著降低(P<0.01),但与假模型组和模型组比较,无显著性差异(P>0.05)。(3)Western blot结果与FQ-PCR结果一致:电针+AM251组较电针组大鼠伏膈核、尾状核内CB1受体蛋白质表达水平显著降低(P<0.01)。但与假模型组和模型组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:AM251能够翻转电针后大鼠伏膈核、尾状核内CB1受体的高表达,减弱电针镇痛作用,提示CB1受体可能参与电针镇痛作用。