伴AML1/ETO融合基因的急性髓系白血病中枢神经系统复发1例病例报告及文献复习

患者于2012年10月确诊为急性髓系白血病并伴有AML1/ETO融合基因,经2年的诱导、巩固化疗后缓解,随访期间病情稳定。2020年8月因视力下降检查确诊为白血病中枢神经系统复发,脑脊液荧光原位杂交技术检测提示AML1-ETO阳性。予全身化疗、腰椎穿刺加鞘内注射,治疗过程中病情进展,出现马尾神经综合征,自动出院后随访期间病情得到缓解,更长久的疗效还需持续跟踪。

实时定量RTPCR监测儿童AML患者AML1/ETO融合基因的临床价值

为了探讨实时定量RT PCR(real timeRT PCR)监测儿童AML患者AML1 ETO融合基因的临床价值 ,筛选出AML1 ETO阳性患儿 14例 ,以连续稀释的AML1 ETO质粒作为标准品建立标准曲线 ,应用实时定量RT PCR监测其初治及随访期 5 8份骨髓中AML1 ETO融合基因 ,用SPSS软件进行统计学分析研究其和临床的关系。结果显示 :实时定量RT PCR监测AML1 ETO基因的敏感度可达 10 - 5,重复性好。 12份初治标本的AML1 ETO∶GAPDH比值平均为 0 .6 4 8,该比值与骨髓中幼稚细胞数的比值无相关性。微小残留白血病 (MRD)定量水平检测发现 ,化疗 1个月时 6例患儿AML1 ETO的量无明显下降 (高于 5× 10 - 2 ) ,其中 3例早期复发 ,1例晚期复发 ;另 4例患儿有明显下降 (低于 10 - 2 ) ,均长期存活。化疗 3个月时 5例高于 5× 10 - 3者中 3例复发 ;另 6例低于 5× 10 - 3者中 1例复发。 6个月后持续高于 10 - 3者 3例均复发。MRD定量水平动态检测发现 ,在化疗中MRD持续在高水平 (>5× 10 - 3)者 4例全部临床复发 ,复发时间在 3个月到半年 ;4例持续低于 10 - 3,维持在 10 - 4- 10 - 6 ,一直处于骨髓缓解期 ;1例化疗中从 10 - 5上升到 10 - 3,5个月后临床复发。 3例持续缓解超过 9个月的患儿仍可检测到融合基因 ,约 10 - 5- 10 - 6 。结论 :实时?

儿童急性髓性白血病M2型AML1/ETO融合mRNA检测及其临床意义

目的 研究AML1/ETO融合mRNA在儿童急性髓性白血病M2型中的表达及其对残留白血病监测及预后的指导意义。方法 通过逆转录酶 /聚合酶链反应 (RT PCR)方法扩增M2型患者的AML1/ETO融合mRNA ,并结合临床资料综合分析。结果 3 6例AMLM2中 2 7例AML1/ETO融合基因阳性 ,占 75 %;RT PCR方法阳性率明显高于染色体分析 ;AML1/ETO融合基因阳性病人缓解率 ( 74 %)高于阴性病人 ( 5 6%) ;通过AML1/ETO融合mRNA的检测可监测体内残留白血病情况 ,AML1/ETO阳性病人经治疗后转阴并持续阴性者预后好 ;而持续阳性者预后差 ;由阴性转阳性者可预示复发。结论 RT PCR检测AML1/ETO融合mRNA为更敏感的细胞遗传学诊断方法 ,定期检查可以监测体内微小残留白血病 ,为治疗、预后判断提供了有效手段。

骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO融合基因的相关性分析

目的:分析骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO融合基因的关系。方法:对32例急性粒细胞性白血病患者进行AML1/ETO融合基因检测,并比较分析检出率。结果:本组32例AML1/ETO融合基因阳性22例,总检出率为68.75%,其中M2b型患者AML1/ETO融合基因检出率达95.0%,显著高于其他分型(P<0.01)。结论:骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO融合基因的关系在某一分型上表现为较高的相关性,但特异性较低。

AML1/ETO融合基因在儿童急性髓系白血病M2诊断中的应用

目的:探讨AML1/ETO融合基因检测对儿童急性髓系白血病(AML)M2诊断的价值。方法:通过骨髓24h短期培养法培养细胞,采用R显带技术分析核型,应用荧光原位杂交技术(FISH)检测AML1/ETO融合基因。结果:26例AML-M2患者中,12例检出t(8;21),占46.2%;1例未检出t(8;21),占3.8%;13例核型正常,占50.0%。t(8;21)核型的标本,FISH结果均为阳性,阳性细胞的比例均在80%以上;未检出t(8;21)的标本,FISH结果均为阳性,阳性细胞的比例均在51%～75%。结论:AML1/ETO融合基因检测灵敏度更高,是诊断AML-M2的可靠方法,可作为细胞遗传学的重要补充。

应用RT/PCR技术检测急性粒细胞白血病M2型AML1/ETO融合基因转录本的研究

目的 :探讨检测AML1 ETO融合转录本在t( 8;2 1)急性粒细胞白血病M 2型 [M 2 /t( 8;2 1]的临床诊断和预后判断中的意义。方法 :用半筑巢式逆转录聚合酶链反应 (RT/PCR)技术检测AML1/ETO融合基因转录本 ,应用Southernblot技术及限制性内切酶技术检测PCR产物的特异性。结果 :在 19例AML M 2中共检出 10例存在AML1/ETO融合基因转录本 ,阳性率为 5 2 .6 % ,2例MDS中 1例为阳性 ,其余病例包括 3例M4均为阴性 ,第一轮PCR的检测水平为 1/ 10 3 10 4 个细胞 ,第二轮PCR的敏感性达 1/ 10 4 10 5个细胞 ,说明该技术的敏感性很高。结论 :半筑巢式RT/PCR技术是一种快速、简便、灵敏、可靠的检测AML1/ETO融合转录本的方法 ,对M2 /t( 8;2 1)

急性髓系白血病AML1/ETO融合基因检测及其临床意义

目的 了解急性髓系白血病中AML1 /ETO融合基因表达情况及相关临床意义。 方法 应用RT PCR技术检测159例初发未治急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞(MNC)AML1 /ETO融合基因及R显带技术检测染色体,并对部分病人进行追踪检测及随访。 结果 159例未经选择的初发急性髓系白血病病人中, 31例(19. 5% )有t(8; 21) (q22;q22 )易位, 36例( 22. 6% )表达AML1 /ETO融合基因,所有t(8; 21)阳性的病人均存在AML1 /ETO融合基因。AML1 /ETO融合基因阳性病人缓解率为80. 6%(29 /36),高于阴性病人(M3 除外)的60. 2% (56 /93);AML1 /ETO阳性病人经治疗后转阴并持续阴性者预后好,而持续阳性者预后差,由阴性转阳性者可预示复发。14例持续缓解超过18个月的病人AML1 /ETO融合基因仅1例为阳性。 结论 (1)RT PCR法检测AML1 /ETOmRNA敏感、快速,定期检测可监测微小残留病变。(2)单次PCR法扩增AML1 /ETO融合基因优于巢式PCR法。

骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO融合基因阳性的关系

t(8;21)(q22;q22)使21号染色体上的AML1基因与8号染色体上的ETO基因发生融合,形成AML1/ETO融合基因,产生一种嵌合蛋白,作为主要的抑制物改变了正常AML1-CBF(核结合因子)B这种与造血干细胞分化有关的转录复合物的生理功能,导致白血病的发生。急性髓细胞白血病(AML)部分成熟型的M2b亚型是我国学者于50年代末提出的,具有髓外浸润率高、治疗反应好、完全缓解率高、缓解期长等特点,其特异性遗传标志为8号与21号染色体的长臂在二区二带断裂并相互移位[t(8;21)(q22;q22)],AML1基因重排可作为诊断本病的分子标志。以往文献报导M2b出现AML1/ETO融合基因阳性率占95%以上,AML其他各亚型亦可出现,但极为少数。王平等报导AML1/ETO融合基因在M2b中占100%,AML1/ETO融合基因阳性AML在骨髓涂片中能检测到异形中幼粒细胞。肖志坚等总结30例AML1/ETO阳性病例M2b占26例。巩文玉等报道46例AML1/ETO融合基因阳性AMI患儿M2b仅占19.6%。笔者收集35例AML1/ETO融合基因阳性骨髓涂片标本,观察其白血病细胞形态,探讨细胞形态与AML1/ETO融合基因阳性的关系。

成人急性非淋巴细胞白血病M2型患者AML1/ETO融合基因mRNA表达及其临床意义

目的分析成人急性非淋巴细胞性白血病M2型患者AML1/ETO(AE)融合基因的表达,并探讨其与临床表现,疗效的关系以及在预后判断中的意义。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应技术分析成人急性非淋巴细胞性白血M2患者AE融合基因mRNA表达,并比较其与临床表现、治疗缓解率的关系。通过随访,评价其在预后判断中的意义。结果在23例成人急性非淋巴细胞性白血M2患者中,12例可检测到AE融合基因mRNA表达,为所检测患者的52.2%(12/23),其中,11例为M2a,1例为M2b。与AE融合基因mRNA表达阴性患者比较,AE融合基因mRNA表达阳性患者年纪较轻,外周血白细胞计数较低,临床上易出现发热,出血。经治疗后,AE融合基因mRNA表达阳性患者缓解率为75.0%,而AE融合基因mRNA表达阴性患者缓解率为36.4%。经8个月随访发现,1例AE融合基因mRNA表达阴性患者在缓解后第4个月复发并出现脑内转移而死亡,另1例在缓解后第7个月复发。而AE融合基因mRNA表达阳性患者在8个月的随访中无一例复发。结论在成人急性非淋巴细胞性白血病M2患者中50%以上表达AE融合基因mRNA,AE融合基因mRNA表达阳性患者更易出现发热,出血倾向,但治疗效果较好,预后良好。

AML1/ETO融合基因阳性急性髓细胞性白血病合并髓系肉瘤2例并文献复习

目的分析AML1/ETO融合基因阳性急性髓细胞性白血病(AML)合并髓系肉瘤的诊断、治疗和预后。方法回顾性分析广西医科大学第一附属医院收治的2例AML1/ETO融合基因阳性AML合并髓系肉瘤患者的临床资料,并复习文献。结果2例患者均为AML1/ETO融合基因阳性AML-M2,其中1例初治时诊断双侧乳腺髓系肉瘤,多次化疗未缓解,放弃治疗;1例胃体髓系肉瘤发病初治后完全缓解,后复发多处侵犯,化疗效果差,放弃治疗。结论髓系肉瘤应始终作为AML患者髓外浸润的检测重点以便早期发现隐蔽病灶,有软组织肿块的AML患者应及时行免疫组化、流式细胞术、荧光原位杂交和分子分析等检查协助诊断,做到早发现、早诊断、早治疗。强化巩固化疗仍是髓系肉瘤的主要治疗方案,在有合适供者的情况下尽早进行造血干细胞移植。在治疗过程中要注意预防或治疗中枢神经系统白血病。

AML1/ETO+融合基因阳性的AML患者骨髓细胞形态学分析

目的探讨AML1/ETO[t(8;21)(q22;q22)]融合基因阳性的急性髓细胞白血病(AML)的骨髓细胞形态学特点。方法对66例AML(M1,M2a,M2b,M5,MDS-RAEB-Ⅱ)骨髓片用瑞氏染液染色后,按照国内AML分型标准进行观察分析;进行荧光原位杂交技术(FISH)检测AML1/ETO融合基因。结果 M2a52例,M2b8例,M52例,M12例,MDS-RAEB-Ⅱ2例,AML1/ETO融合基因阳性为34.84%,其中(14/52)26.9%,(8/8)100%,(0/2)0%,(0/2)0%,(1/2)50%。回顾分析AML1/ETO阳性病例骨髓涂片,都检测到多少不一的异形中幼粒细胞。AML1/ETO阳性病例在治疗过程中首次化疗完全缓解(CR)率为78.4%(9例M2a、8例M2b及1例RAEB-Ⅱ),4例M2a2次化疗后达到CR,1例M2a5次化疗仍为NR。结论 AML-M2b都有AML1/ETO融合基因改变,AML1/ETO融合基因阳性AML在骨髓涂片中能检测到异形中幼粒细胞。

应用实时荧光定量RT-PCR检测急性髓系白血病患者aml1／eto融合基因的临床意义分析

本研究目的旨在构建实时荧光定量RT-PCR(RQ-RT-PCR)方法检测用的am l1/eto融合基因的RNA标准品,并以此作为工具监测急性髓系白血病M2患者微小残留病(MRD)的状态。应用定性的RT-PCR筛选患者标本中的am l1/eto融合基因,经体外扩增转录,得到1010拷贝数RNA标准品,并对37例患者骨髓/外周血标本进行了检测。结果表明:构建的RNA标准品具有线形良好的标准曲线,扩增效率较高,特异性较好;患者初诊组和复发组的目的基因am l1/eto的相对值的平均值高于完全缓解组(CR)(p<0.05);随访的患者中初诊时目的基因am l1/eto的相对值很高,完全缓解时降低,复发时明显升高。初诊和CR两个时间点目的基因am l1/eto的相对值相差2个数量级以上时,病人的复发危险性相对较小,如果am l1/eto基因的相对值持续升高,则提示患者的预后较差。结论:RQ-RT-PCR方法检测am l1/eto融合基因的敏感性和特异性比较高,可信度和稳定性较好;对am l1/eto融合基因阳性患者MRD定量动态监测有助于初步评价治疗效果,估计患者的复发危险度,因此有望成为确定强化治疗的时机、延长病人完全缓解期的重要手段。

地西他滨与CHAG方案治疗AML1/ETO阳性复发难治急性髓系白血病的临床效果

目的分析地西他滨与阿糖胞苷+高三尖杉酯碱+阿克拉霉素+重组人粒细胞集落刺激因子(CHAG)方案治疗急性髓系白血病1/ETO融合基因(AML1/ETO)阳性复发难治急性髓系白血病(AML)的临床效果。方法选取2015年7月至2020年7月河南科技大学第一附属医院收治的AML1/ETO阳性复发难治AML患者80例,按随机数字表法分为两组,对照组(39例)接受CHAG方案,研究组(41例)在对照组基础上接受地西他滨治疗。评价两组疗效,对比两组血象指标、血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平、血清血管内皮生长因子(VEGF)水平、不良反应、生存情况。结果研究组有效率(73.17%)高于对照组(51.28%)(P<0.05)。治疗后两组白细胞计数(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)均高于治疗前(P<0.05),且研究组WBC、HGB、PLT均高于对照组(P<0.05)。治疗后两组血清bFGF、VEGF水平均低于治疗前(P<0.05),且研究组血清bFGF、VEGF水平均低于对照组(P<0.05)。两组各不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。截至2021年7月,对照组随访期内共16例患者死亡,6个月生存率79.49%、1 a生存率58.97%;研究组随访期内共7例患者死亡,6个月生存率85.37%、1 a生存率82.93%。log-rank检验结果提示,两组生存情况有统计学意义(P<0.05)。结论地西他滨与CHAG方案能有效提高AML1/ETO阳性复发难治AML患者的临床效果,改善血象,调节血清bFGF、VEGF水平,延长生存时间,且未增加不良反应发生。

定量监测AML1-ETO融合基因表达水平在急性髓系白血病治疗中的临床价值

目的探讨急性髓系白血病治疗过程中AML1-ETO融合基因表达水平的变化规律。方法采用基于Taq-Man探针的RQ-PCR技术,以AML1-ETO融合基因为靶分子,定量监测15例急性髓系白血病患者初诊和随访时融合基因的表达水平,分析该基因表达水平的变化与临床特征的相关性。结果患者初诊时,AML1-ETO融合基因的表达水平为198%~788%,该基因的表达水平与相应的骨髓幼稚细胞比例及患者年龄、性别、初诊外周血白细胞计数、血红蛋白量和血小板计数之间均无相关性（P〉0.05）;长期缓解（〉1年）患者该基因表达水平降至0.001%~0.01%;复发患者该基因表达水平较缓解时升高,并提前于骨髓细胞形态学复发;AML1-ETO融合基因表达水平大于0,并不能提示临床复发。结论应用RQ-PCR技术对AML1-ETO融合基因进行定量监测,是判断和追踪该基因阳性的白血病患者疗效的良好指标,可以较好地反映患者微小残留病的动态变化。

AML1-ETO融合蛋白对BCL-2基因表达的影响

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因BCL-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A/E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检测cleaved caspase-3蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测转染细胞和对照组细胞以及AML-M2患者白血病细胞BCL-2 mRNA的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与BCL-2基因启动子之间直接的相互作用情况。结果表明:AML1-ETO转染细胞的凋亡率明显增加,且检测到cleaved caspase-3蛋白的表达;转染了AML1-ETO的U937细胞系和具有AML1-ETO融合基因的AML-M2患者中,BCL-2的mRNA表达水平显著下调;转染细胞沉淀富集的AML1-ETO直接结合的DNA中含有BCL-2基因的启动子序列。结论:BCL-2是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调BCL-2的表达。

丙戊酸钠逆转AML1-ETO融合蛋白转录抑制作用的研究

目的:探讨组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(valproic acid,VPA)逆转AML1-ETO融合蛋白转录抑制作用。方法:VPA处理t(8;21)急性白血病细胞株Kasumi-l细胞后,应用流式细胞术检测髓系分化抗原CD11b表达水平的变化,DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡变化,分子生物学半定量RT-PCR的方法检测粒-单核细胞刺激因子(GM-CSF)和半胱氨酸天冬氨酸酶7(Caspase7)mRNA表达水平的变化。结果:VPA诱导Kasumi-1细胞的髓系分化抗原CD11b表达的阳性率增加,并呈现时间及剂量依赖性;②VPA诱导Kasumi-1细胞凋亡,出现的典型梯形DNA条带;③VPA诱导AML1靶基因GM-CSF和凋亡相关因子Caspase7的mRNA表达水平的增加,呈时间和剂量依赖性。结论:丙戊酸钠可以通过抑制脱乙酰化酶的活性,消除AML1-ETO融合蛋白转录抑制,诱导细胞分化和凋亡。

AML1-ETO融合蛋白致急性髓系白血病机制及靶向治疗

AML1-ETO 基因是急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia,AML）中最常见的融合基因之一,由 t （8；21）（q22；q22）染色体易位导致位于21q22上的 AML1基因（又名RUNX1基因）与8q22上的ETO基因（又称为RUNX1T1或 MTG8基因）融合而成[1],其表达产物为 AML1-ETO 融合蛋白。大约12%-15%的 AML 患者有 t（8；21）,90%的M2b 亚型存在 AML1-ETO 融合基因,其阳性可作为 M2b的诊断依据。AML1-ETO融合基因阳性的 AML 患者对化疗较为敏感,部分患者可获治愈,且预后良好。近年来, AML1-ETO融合蛋白与 AML造血干细胞或祖细胞基因突变引起 AML的机制及其潜在靶向治疗研究已成为热点,本文就此进展作一综述。

融合蛋白AML1-ETO对C/EBPα基因表达的影响

背景:已有研究显示AML1-ETO可以通过包括抑制C/EBPα的功能在内的机制引起分化的阻滞。目的:观察AML1-ETO对髓系分化相关基因C/EBPα表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。方法:应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937、U937-MOCK和U937-A/E1细胞表面抗原CD11b、CD14的表达;荧光实时定量PCR检测C/EBPαmRNA的表达;免疫印迹法检测C/EBPα蛋白的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与C/EBPα基因启动子之间直接的相互作用情况。结果与结论:AML1-ETO转染细胞的细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达明显下降,且转染了AML1-ETO的U937细胞系中,C/EBPα的mRNA与蛋白水平均下调,转染细胞沉淀富集的DNA中含有C/EBPα基因的启动子序列。结果提示C/EBPα是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调C/EBPα的表达。

急单白血病伴t(8;21)和AML1/ETO融合基因阳性的遗传效应分析一例

白血病是造血干细胞来源的克隆性恶性肿瘤，现已发现大多数白血病都伴有染色体的改变，染色体异常与白血病的发生发展密切相关，一些特异性染色体异常不仅与白血病的FAB分型具有明显相关性，而且具有独立的预后价值。染色体畸变可作为监测急性白血病缓解、复发和CML急变的重要指标。

地西他滨对AML1-ETO阳性急性髓系白血病细胞中PD-L2分子表达的影响

背景复发难治性AML1-ETO融合基因阳性的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者预后差。程序性细胞死亡蛋白-配体2(programmed cell death-ligand 2,PD-L2)是参与白血病免疫逃逸的重要分子,研究去甲基化药物对白血病细胞中PD-L2分子表达的影响,对于优化用药方案具重要意义。目的分析AML1-ETO融合基因阳性的AML细胞中PD-L2分子启动子区甲基化水平及DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(decitabine,DAC)对其表达的影响。方法以AML1-ETO融合基因阳性AML细胞系Kasumi-1以及两对AML1-ETO沉默(SKNO-1-PGK,SKNO-1-siA/E)或诱导细胞系(U937-MT,U937A/E,U937A/E+ZnSO4)为模型,采用终浓度为2.5μmol/L的DAC或0.1%二甲基亚砜(对照)处理细胞72 h,其中Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系设置0.25μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L 3个浓度梯度。采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PD-L2 DNA启动子区特异性位点的甲基化水平;采用逆转录实时定量PCR技术检测PD-L2 mRNA表达水平。结果Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系中PD-L2 DNA启动子区呈高甲基化水平,DAC处理后该区域DNA甲基化水平下降(94.3%vs 90.7%,88.6%vs 83.6%)。2.5μmol/L DAC处理后的Kasumi-1、SKNO-1-PGK、SKNO-1-siA/E、U937A/E细胞中PD-L2 mRNA的相对表达水平均显著高于对照组(P均<0.05);特别是DAC处理后,沉默AML1-ETO基因的细胞系中PDL2表达增加(SKNO-1-siA/E与SKNO-1-PGK相比上升35.80%,P=0.031),过表达AML1-ETO基因的细胞系中PD-L2表达减少(U937A/E+ZnSO4与U937A/E相比下降95.51%,P=0.036)。经DAC处理后的Kasumi-1和SKNO-1-PGK细胞系中,PD-L2 mRNA表达呈浓度依赖性递增(Kasumi-1:r2=0.87;SKNO-1-PGK:r2=0.93。P均<0.05)。结论AML1-ETO阳性AML细胞中PD-L2基因的表达受DNA甲基化调控,AML1-ETO可能参与了PD-L2基因表达的抑制。