双色双融合荧光原位杂交检测成人急性白血病PML/RARα、MLL、AML1/ETO基因重排

目的探讨双色双融合荧光原位杂交技术(DC-DF-FISH)在成人急性白血病(Acute Leukemia,AL)中的应用价值。方法应用DC-DF-FISH检测我院26例AL患者相应的AML1/ETO、MLL、PML/RARa融合基因,并与常规R-显带技术进行比较。结果 26例AL患者中,R-显带发现4例存在标记染色体,检出率15.4%(4/26),17例为正常核型和其他异常核型,未检出包含11q23染色体异常,DC-DF-FISH检测发现8例特异目的基因为阳性,包括R-显带检测出的4例,检出阳性率30.8%(8/26)。结论双色双融合荧光原位杂交技术是检测成人急性白血病PML/RARα、MLL、AML1/ETO基因重排的可靠方法,适用于AL的诊断、疗效判定及微小残留病灶的检测。

联合检测AML1-ETO及其9a异构体在微小残留白血病监测中的意义

目的研究AMLl-ET0及其9a异构体在急性髓系白血病M2型中治疗前后及复发时的表达水平的变化,探讨其对微小残留白血病监测的意义。方法选择2010年1月至2014年1月46例急性髓系白血病患者为研究对象,均经联合化疗获得完全缓解,骨髓采集时间在初诊时、诱导化疗结束时、随访每6个月检测1次以及复发时,随访时间为3年。利用RQPCR方法监测AML1-ETO及9a异构体融合基因的表达水平,总结分析两者的表达水平与临床参数之间的相关性。结果在46例确诊伴有t (8;21)的AML-M2患者的骨髓标本中有41例检测到AE9a异构体,占89.13%。21例复发患者均检测到AE9a异构体;41例AE及AE9a均阳性患者,21例复发,20例未复发,复发组平均表达水平高于未复发组,并且两组对比,AE9a比AE高的更明显(P<0.01);经化疗获完全缓解后,AE、AE9a表达水平均下降,但复发组下降的百分比低于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05);比较复发组AE、AE9a化疗前后的变化发现,AE下降的水平明显高于AE9a (P<0.01);缓解期间,21例复发患者中14例AE9a在AE表达低水平时即出现升高甚至异常升高。结论 AE9a与AE共表达于伴有t (8;21)的AML-M2患者中,AE9a异构体对标准化疗的敏感性较AE差。作为微小残留白血病的监测,同时检测AE及AE9a两者表达水平的变化比单独检测AE融合基因能更早地预示疾病复发趋势,从而可提前进行临床干预,降低患者的复发率,提高患者的长期生存率。

伴有t(2;21;8)(p12;q22;q22)急性髓系白血病M2的MICM特征与诊断的探讨

本研究应用形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学(M ICM)分型技术联合检测伴有复杂变异核型t(2;21;8)(p12;q22;q22)的急性髓系白血病(AML-M2),并探讨其特征及诊断意义。取患者骨髓涂片行瑞氏-姬姆萨染色和细胞化学染色进行骨髓细胞形态学FAB分型;流式细胞术(FCM)检测白血病细胞免疫表型;新鲜骨髓细胞短期培养法常规制备染色体标本,RHG显带技术进行核型分析,采用双色双融合AML/ETO探针及全染色体涂染(CP)探针检测有丝分裂中期荧光原位杂交(FISH)信号,并与常规R显带细胞遗传学检测结果进行比较分析,巢式RT-PCR检测AML1-ETO融合转录本。结果表明:病例1原始粒细胞伴嗜酸粒细胞及单核细胞比例增高;病例2符合以异常中幼粒细胞增高为主的AML-M2b;染色体核型分析结合FISH检测证实两例患者均存在t(2;21;8)(p12;q22;q22)复杂核型;AML1/ETO融合基因转录本阳性,免疫表型显示CD34和HLA-DR共表达,伴CD19和CD56表达。结论:应用WHO提出的细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学技术(M ICM)联合检测的实验室诊断方法对准确诊断复杂变异核型t(2;21;8)(p12;q22;q22)AML的分型具有重要意义。

t(8;21)急性髓系白血病发病机制的研究进展

近50%的急性髓系白血病可以找到染色体易位,常见的染色体易位是t(8;21)(q22;q22)。这种易位使21号染色体上的aml1(runx1)基因与8号染色体上的eto(mtg8,runx1t1)基因相互融合形成aml1/eto融合基因。最初对于t(8;21)急性髓系白血病发病机制的研究一直着重在造血转录激活因子AML1转化为白血病抑制因子,在靶基因调控水平上阻碍髓系细胞分化,aml1/eto融合基因在造血分化过程关键点抑制作为肿瘤抑制因子的造血转录因子。目前认为,t(8;21)染色体易位及二次突变引起造血干细胞减少的系别限制性及基因组不稳定性是引发aml1/eto融合基因阳性白血病的主要原因。本文就aml1/eto融合基因及其剪接变异体在调控干细胞更新、阻断造血分化及与各造血系统特异的转录因子相互作用的分子机制进行综述。

t(8;21) AML白血病干细胞克隆起源的研究

目的探讨t(8;21)白血病干细胞克隆起源时间.实验方法用LD-PCR或LDI-PCR联合序列分析确定t(8;21)断裂区基因组DNA序列,根据所得序列设计病人特异性引物,用PCR方法检测患者Guthrie cards AML1-ETO融合基因;用RT-PCR检测脐带血AML1-ETO融合基因,阳性标本进一步用Real-time PCR进行AML1-ETO融合基因阳性细胞定量并用FISH检测用MiniFACS分取的CD33+和CD19+细胞组分t(8;21)易位.结果10例t(8;21)/AML患者中5例Guthrie cards AML1-ETO融合基因阳性;520份脐带血1份AML1-ETO融合基因阳性,脐血中AML1-ETO(+)细胞为1/2×104,仅CD33+细胞组份有t(8;21)易位.结论部分t(8;21)/AML患者其白血病干细胞克隆起源于胎儿期.

Aml1基因异常与儿童急性白血病相关研究进展

诸多研究发现细胞遗传学改变在急性白血病发生中起重要作用。其中以涉及aml1基因的改变最为常见。aml1基因为正常造血必需基因之一,在儿童急性白血病中约1/3以上的患儿可以检测到aml1基因的异常,其中t(12;21)和t(4;21)主要见于儿童急性淋巴细胞白血病。期望通过对儿童急性白血病中aml1基因易位的研究,能够揭示儿童急性白血病发生的机制,为儿童急性白血病的临床诊断治疗提供新的靶点。本文就aml1基因的结构与功能,儿童急性淋巴细胞白血病中aml1基因异常和儿童急性髓系白血病中aml1基因异常等问题的研究进展作一综述。

t(8;21)儿童急性髓细胞性白血病临床和生物学特征

目的 了解儿童 t(8;2 1)急性髓细胞白血病 (acute myeloid leukemia,AML)的临床和生物学特征。方法 对 4 1例儿童 t(8;2 1) AML 作了回顾性分析 ,取同期诊治的 19例 t(8;2 1)阴性 AML作为对照组。分析临床、形态学、染色体、免疫表型和分子生物学等资料。结果 本组 t(8;2 1) AML占同期连续的6 0例儿童急性 AML的 6 8.3% ,其中典型易位 2 9例、变异易位 2例、单纯 8q-各 2例、t(8;2 1)为特征的近四倍体 2例和隐匿易位 6例。 37例 (80 .4 % )为 M2型 AML ,大多有下述形态学改变 :白血病细胞有核凹陷、近核浅染区、胞浆嗜碱性、伴有成熟分化和核浆发育不平衡等 ;有 CD13高表达抗原 ;绘逆转录 -聚合酶链反应检测的 2 3例均检出 AML 1/ ETO融合基因转录本 ,包括正常核型的 6例 ;t(8;2 1) AML与对照组相比 ,完全缓解率差异无显著性 (82 .4 % vs 75 % ,P>0 .0 5 ) ,但复发率的差异有显著性 (10 .7% vs 4 1.7% ,P<0 .0 5 )。结论 t(8;2 1) AML 是儿童 AML中最常见的类型 ,主要和 M2型有关 ,具有独特的形态学、免疫学和临床特征。