磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白自噬通路在支气管肺发育不良中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。方法将A549细胞(腺癌人类肺泡基底上皮细胞)一定条件培养后分成对照组、支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组。支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组高氧环境培养,置于37℃、85%氧气孵化箱中培养48 h,前者不加药剂、后者加10μmol/L的雷帕霉素干预;对照组常规环境培养,置于37℃、5%二氧化碳孵化箱中培养48 h,不加药剂。利用高氧构建支气管肺发育不良的细胞模型,利用蛋白质印迹实验和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证自噬对高氧处理后A549细胞肺泡表面标志物合成蛋白复合物(SPC)、水通道蛋白5(AQP5)的影响,利用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测自噬对高氧处理后A549细胞增殖的影响,利用蛋白质印迹实验验证PI3K/Akt/mTOR自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。结果蛋白质印迹实验和RT-qPCR实验表明自噬激活剂雷帕霉素挽救了高氧处理后A549细胞SPC、AQP5表达的下调。EdU实验表明雷帕霉素显著促进了高氧处理后A549细胞的增殖,EdU阳性细胞百分比高于支气管肺发育不良组[(0.48±0.06)比(0.36±0.02)](P<0.05)。蛋白质印迹实验显示雷帕霉素干预后的A549细胞中的磷酸化-PI3K、磷酸化-Akt、磷酸化-mTOR、自噬选择性底物P62的表达水平显著降低,微管相关蛋白1轻链3的表达水平显著上升(均P<0.05)。结论PI3K/Akt/mTOR自噬通路在支气管肺发育不良中发挥着重要作用。

植物雷帕霉素靶蛋白激酶研究进展

植物雷帕霉素靶蛋白(target of rapamycin,TOR)作为信号和代谢调节中枢,通过磷酸化修饰整合营养、能量和环境信号,感知植物体内能量变化,调节植物生长发育和环境适应过程。在本文中,我们回顾了TOR的发现历程,总结了以往和近期植物TOR的信号通路研究进展(包括新发现的部分上游效应因子和下游调控路径),TOR在植物胚胎发生、分生组织形成、养分利用、开花和衰老等不同生长发育阶段或代谢过程中的重要作用,以及响应非生物胁迫和生物胁迫的生物学机制,还展望了TOR激酶在未来的研究热点方向及其在农业生产中的应用。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路在肺部疾病中的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamyc in,PI3K/Akt/mTOR)是细胞内重要信号通路,在细胞生长、增殖、分化和蛋白合成等过程中起重要作用。肺癌、哮喘、肺动脉高压、肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病(chronic pulmonary obstructive disease,COPD)等疾病是呼吸系统常见疾病,其病理机制涉及细胞增殖及凋亡等,与PI3K/Akt/mTOR信号通路关系密切。

磷脂酰肌醇-3磷酸激酶/AKT/雷帕霉素靶蛋白信号通路参与中枢神经损伤保护与修复的研究进展

中枢神经细胞对各种损伤刺激耐受差,损伤后神经修复困难。因此促进神经保护增强神经再生能力已成为神经治疗关键。磷脂酰肌醇-3磷酸激酶/AKT/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路是调节细胞周期的重要通路,在细胞增殖、生长、分化过程中起中心调控作用,在神经损伤过程中通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路可减少神经细胞死亡,促进神经修复。该文对PI3K/AKT/mTOR信号通路在中枢神经损伤保护作用、修复机制及可能风险作一综述,探讨将PI3K/AKT/mTOR信号通路作为靶点治疗中枢神经疾病。

基于NOD2介导的AMPK/mTOR信号通路探讨宫颈癌细胞恶性行为的机制

目的 基于核苷酸结合寡聚化结构域受体2(NOD2)介导的AMP活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨宫颈癌(CC)细胞恶性行为的机制。方法 生物信息学分析确定NOD2在CC组织中的表达。将靶向NOD2(shNOD2)、shRNAs阴性对照(shNC)以及NOD2过表达(NOD2)质粒和载体(Vec)转染CC细胞。通过CCK-8测定、集落形成和Transwell细胞侵袭测定来确定NOD2对CC细胞生长的影响。通过高通量RNA测序(RNA-Seq)进行转录组分析。Western blot试验检测细胞系中NOD2、AMPK/mTOR信号通路和自噬蛋白的表达。24只雌性BALB/c裸鼠随机分为4组,每组6只:载体组(Vec组)、NOD2过表达组(NOD2组)、shNC组和shNOD2组。构建小鼠远处转移模型,监测肺转移的荧光强度,计数肺转移结节的数量。结果 在线数据库分析显示,NOD2在CC组织中表达明显高于正常组织,并且不同分期的CC中NOD2的mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。此外,NOD2的高表达与较差的总生存期和无病生存期相关(P<0.05)。NOD2过表达对CC细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭具有促进作用,而NOD2敲低则相反。与体外结果一致,在转移的小鼠尾静脉注射模型中,NOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较Vec组增加(P<0.05),而shNOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较shNC组减少(P<0.05)。RNA-Seq结果显示NOD2表达与AMPK信号激活、mTOR信号抑制、自噬调节途径激活和自噬体形成显著相关。与shNC组相比,shNOD2组磷酸化AMPK、LC3蛋白表达水平减少(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平增加(P<0.05);与Vec组相比,NOD2组LC3、AMPK蛋白表达水平增加(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平减少(P<0.05)。与shNC组相比,shNOD2组GFP-mRFP-LC3的点积累减少(P<0.05);与Vec组相比,GFP-mRFP-LC3的点积累增加(P<0.05)。结论 NOD2可能通过AMPK/mTOR信号促进CC增殖、迁移和侵袭,其作用机制部分涉及自噬激活。

基于AMPK/mTOR信号通路探讨人参-黄芪对人胃癌细胞自噬的影响

目的:探究益气扶正药人参-黄芪对人胃癌细胞自噬的影响,并探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的作用机制。方法:将人胃癌细胞株(SGC-7901)随机分为对照组(人参-黄芪0 mg/ml)和人参-黄芪组(1、2、4、8、16、32、64 mg/ml),经药物处理后,CCK-8法观察人胃癌细胞增殖情况;筛选最佳浓度并将其作为后续实验中的实验组;MDC免疫荧光染色观察细胞自噬情况;Western blot法检测人胃癌细胞自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3B)及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白(AMPK、p-AMPK、mTOR及p-mTOR)的表达情况。结果:CCK-8法结果显示,人参-黄芪组人胃癌细胞增殖作用降低(P<0.01),且呈浓度依赖性;MDC染色荧光检测显示实验组的荧光强度显著增强(P<0.01),表明人参-黄芪可以诱导人胃癌细胞产生自噬;Western blot结果显示,实验组的Beclin-1、LC3B、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平上升(P<0.01),p-mTOR/mTOR蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论:人参-黄芪配伍能够抑制人胃癌细胞的增殖、促进人胃癌细胞自噬,其机制可能与激活AMPK/mTOR信号通路相关。

解毒祛瘀方通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路逆转乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的机制研究

目的探讨解毒祛瘀方通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的逆转作用及机制。方法采用低浓度逐步加量诱导法建立乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株MCF-7C,并分为空白对照组、解毒祛瘀方(2.5 g/L)组、他莫昔芬(10μmol/L)组、他莫昔芬(10μmol/L)+解毒祛瘀方(2.5 g/L)组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)(10μg/L)+他莫昔芬(10μmol/L)+解毒祛瘀方(2.5 g/L)组。采用噻唑蓝法验证MCF-7C细胞的耐药性、解毒祛瘀方的细胞毒性以及对MCF-7C细胞他莫昔芬耐药性的影响。利用流式细胞术检测细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法检测各组MCF-7C细胞中PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白的表达。结果 MCF-7C细胞对他莫昔芬的耐药指数为7.20;而经解毒祛瘀方(2.5 g/L)协同作用后,MCF-7C细胞对他莫昔芬的耐药指数为2.02。他莫昔芬+解毒祛瘀方组MCF-7C细胞凋亡率明显高于他莫昔芬组[(56.72±7.25)%比(13.24±0.76)%],同时p-PI3K[(0.37±0.06)比(0.68±0.07)]、p-Akt[(0.17±0.02)比(0.51±0.05)]、p-mTOR[(0.10±0.02)比(0.39±0.02)]蛋白表达量也明显低于他莫昔芬组(均P <0.05)。而加入PI2K/Akt通路激活剂IGF-1后,IGF-1+他莫昔芬+解毒祛瘀方组MCF-7C细胞增殖抑制率和凋亡率较他莫昔芬+解毒祛瘀方组均明显降低(均P <0.05)。结论解毒祛瘀方可逆转乳腺癌细胞他莫昔芬的耐药性,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路活化有关。

在肿瘤细胞模型中联合应用磷脂酰肌醇3激酶/蛋白酶B通路抑制剂BEZ235和细胞外调解蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶通路抑制剂U0126的效果

目的探讨通过联合应用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白酶B(AKT)通路抑制剂BEZ235和细胞外调解蛋白激酶(ERK)通路抑制剂U0126抑制膜受体酪氨酸激酶/PI3K/AKT/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路与ERK/丝裂原活化蛋白激酶通路对细胞增殖的影响。方法以磷酸酶和张力蛋白同源物缺失(PTEN-/-)的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)系作为研究对象,联合应用PI3K、mTOR双重抑制剂BEZ235及ERK激酶抑制剂U0126,通过MTT和Western blot方法检测药物对细胞增殖的影响。结果 BEZ235及U0126对PTEN-/-MEF细胞均有抑制作用,二者半数抑制浓度分别为6.257 nmol/L及22.85μmol/L。但联合应用BEZ235与U0126,二者表现为拮抗的作用方式。结论在PTEN缺失的细胞系中或PTEN突变的肿瘤的联合靶向治疗中,不推荐应用BEZ235与U0126联合使用。

虎杖苷调节AMPKα/mTOR信号通路对慢性肾衰竭大鼠细胞自噬和肾纤维化的影响

目的:探讨虎杖苷(PD)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠细胞自噬、肾纤维化及腺苷酸激活蛋白激酶(AMPKα)/雷帕霉素(mTOR)信号通路的影响。方法:将50只SD大鼠随机选择10只作为对照组(C组),其余构建CRF大鼠模型并随机分为模型组(CRF组)、虎杖苷组(PD组,30 mg/kg)、阳性肾康灵组(阳性组,1.5 g/kg)、PD组+mTOR激活剂MHY1485组(PD+MHY1485组,30 mg/kgPD+10 mg/kg MHY1485),每组10只。给药结束后,试剂盒检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)的浓度;HE、Masson、TUNEL染色观察肾组织损伤和细胞凋亡情况;Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3及AMPKα/mTOR通路蛋白表达。结果:与C组相比,CRF组肾组织出现肾小管结构异常,管腔扩张,细胞肿胀,胶原沉积等损伤,BUN、Scr水平、胶原沉积分数、细胞凋亡率、mTOR蛋白水平显著升高(P<0.05),Beclin1、LC3、p-AMPKα/AMPKα水平显著降低(P<0.05);与CRF组相比,PD组、阳性组肾组织损伤明显改善,BUN、Scr水平、胶原沉积分数、细胞凋亡率、mTOR蛋白水平显著降低(P<0.05),Beclin1、LC3、p-AMPKα/AMPKα水平显著升高(P<0.05)。而MHY1485可减弱PD对CRF大鼠肾损伤的改善作用。结论:PD可能通过调控AMPKα/mTOR通路促进细胞自噬,减轻肾纤维化,改善CRF大鼠肾损伤。

槲皮素通过小分子核糖核酸196b调节磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路从而抑制骨肉瘤细胞增殖研究

目的:探讨槲皮素抗骨肉瘤细胞增殖的可能机制。方法:体外培养骨肉瘤细胞系MG-63、143B和U2OS,用25,50和100μmol/L的槲皮素干预后,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测小分子核糖核酸196b(miR-196b)的水平。随后利用miR-196b抑制剂,联用100μmol/L槲皮素后通过CCK8检测细胞的存活率;通过划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭;通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的表达。结果:槲皮素上调了三种骨肉瘤细胞中miR-196b的水平,且呈现剂量依赖性。在应用miR-196b抑制剂后,miR-196b的表达水平被显著抑制。槲皮素能够显著抑制骨肉瘤细胞的生长,但在联用miR-196b抑制剂后,槲皮素抑制骨肉瘤细胞增殖的作用被减弱。划痕和Transwell实验结果显示,槲皮素能够显著抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭,但在联用miR-196b抑制剂后,槲皮素抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭的作用被减弱。此外,槲皮素显著抑制了骨肉瘤细胞中p-mTOR、p-AKT和p-PI3K的表达,对mTOR、AKT和PI3K的表达则无明显影响。联用miR-196b抑制剂后,p-mTOR、p-AKT和p-PI3K的表达显著上升,与单用槲皮素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素通过上调miR-196b调节PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

大黄素对胆管癌QBC939细胞生长及磷酸肌醇3激酶／蛋白激酶B／雷帕霉素靶蛋白信号通路表达的影响

目的观察大黄素在体外对胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用及其对磷酸肌醇3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt）／雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号转导通路的影响。方法用大黄素作为干预因素，时间效应组以含大黄素的培养液分别培养QBC939细胞不同时间，剂量效应组分别用不同浓度大黄素的培养液与QBC939细胞共培养；检测细胞增殖，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中B淋巴细胞／白血病-2（bcl-2）mRNA表达，Westernblot检测细胞中bcl-2、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、核因子（NF）-κB、磷酸化NF—κB（p-NF-κB）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白质的表达。结果10、20、40、80μmol/L大黄素对QBC939细胞增殖抑制率分别为17．3％、28．6％、46．5％和66．4％（P〈0．05），bcl-2、p-Akt、NF-κB、p-NF—κB、mTOR、p-mTOR表达明显下降，Akt表达无变化。结论大黄素抑制QBC939细胞增殖，可能通过抑制P13K／AkVmTOR信号转导途径。

磷酸肌醇3激酶及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路联合抑制对大肠癌细胞生长的影响

表皮生长因子受体（EGFR）及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在靶点中最具代表性，但单独应用EGFR抑制剂埃罗替尼及mTOR抑制剂雷帕霉素不能充分抑制肿瘤的生长，使埃罗替尼及雷帕霉素在肿瘤化疗单一用药有很大的障碍。本实验拟对多通路联合抑制大肠癌细胞生长进行研究。

肿瘤中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路和Notch通路间的信号交互作用

肿瘤细胞利用胚胎形成过程中用于细胞分化的各种信号通路,通过对其异常调节,以实现肿瘤自身的生长.磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路和Notch信号通路在促进肿瘤细胞增殖、维持干细胞干性方面至关重要,也是国内外研究热点.近年研究证实这两条通路之间存在着信号交互作用,经磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）相互调控,为肿瘤靶向治疗提供了新思路.

微小RNA⁃199⁃3p通过一磷酸腺苷活化蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白通路抑制高糖诱导的白色脂肪细胞分化

目的探讨微小RNA(miR)-199a-3p与2型糖尿病(T2DM)病理特征关系及其对白色脂肪细胞分化和脂肪炎症调控的分子机制。方法收集2015年6月~2018年4月就诊于我院的131例T2DM患者(T2DM组)与146例健康志愿者(NC组)的临床资料。采用RT-qPCR检测外周血has-miR-199a-5p、has-miR-199a-3p、has-miR-199b-5p和has-miR-199b-3p水平;采用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、瘦素、脂联素、内脂素、抵抗素和白细胞介素-6(IL-6)含量,并探讨其与miR-199a-3p的相关性。3T3-L1细胞经高糖、低糖和分化诱导处理后,采用RT-qPCR检测3T3-L1细胞中has-miR-199a-3p含量,ELISA检测TNF-α和IL-6含量;油红O染色观察miR-199a-3p类似物(mimics)处理高糖诱导的3T3-L1脂滴形成;Western blot检测mimics干预高糖处理3T3-L1细胞中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶P85亚基(p-P85)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3b)、葡萄糖转运体-4(GLUT-4)、磷酸化信号传导与转录激活因子-3(p-STAT3)、磷酸化一磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、NAD-依赖性去乙酰化酶(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)蛋白表达。采用Pearson相关分析评估各变量间的相关性。结果T2DM组患者血浆miR-199a-3p、miR-199b-5p和miR-199b-3p均明显低于NC组(P<0.05)。重度T2DM组患者miR-199a-3p含量明显低于轻、中度T2DM组(P<0.05)。T2DM组血浆miR-199a-3p含量与空腹胰岛素(FIns)、空腹血糖(FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、TNF-α及IL-6呈负相关(P<0.05)。高糖组miR-199a-3p含量高于对照组,分化的脂肪细胞内miR-199a-3p含量明显高于3T3-L1细胞(P<0.05),mimics组油脂滴数量明显低于阴性对照组。高糖+抗miR-199a-3p组的p-AMPK、p-mTOR、SIRT-1和PPAR-γ蛋白表达均明显低于高糖组(P<0.05),两组IRS-1、p-P85、p-AKT、p-GSK3b和Glut-4蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论T2DM患者外周血中miR-199a-3p呈低表达,且与血糖、胰岛素抵抗、脂肪因子和炎症因子含量呈负相关,其可能通过调控AMPK/mTOR及PPAR-γ和SIRT-1蛋白表达,影响IL-6和TNF-α炎症因子释放参与白色脂肪细胞炎症和脂肪细胞分化再生。

长链非编码RNA LINC01235通过调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路影响胃癌进展的机制

目的探讨长链非编码RNA LINC01235在胃癌中的表达及其作用机制。方法肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库检测LINC01235在胃癌及癌旁组织的表达;分析LINC01235对胃癌患者预后的价值;收集新鲜胃癌及癌旁组织验证生物信息学结果。调控人胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901中LINC01235表达,检测细胞增殖、侵袭和转移能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测调控LINC01235的表达对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。应用SAS 9.4软件进行统计学分析,t检验分析实验结果。结果TCGA数据分析表明与癌旁组织比较,LINC01235在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织(6.340±1.705比3.115±1.558,Z=10.026,P<0.05),且LINC01235高表达的患者预后较差(χ^(2)=6.902,P<0.05)。临床标本验证结果与生物信息学结果相符。蛋白质印迹结果显示,胃癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化雷帕霉素靶(p-mTOR)的表达水平高于癌旁组织(p-Akt为1.154±0.459比0.326±0.150,t=9.392,P<0.01;p-mTOR为0.665±0.310比0.270±0.121,t=6.501,P<0.01)。在MGC-803细胞中上调LINC01235后细胞的增殖能力显著比对照组增强(24 h为0.203±0.027比0.142±0.042,t=2.993,P<0.05;48 h为0.503±0.106比0.247±0.064,t=5.064,P<0.01;72 h为0.917±0.118比0.55±0.11,t=5.573,P<0.01)、侵袭和转移能力显著比对照组增强(139.333±22.151比57.833±15.639,t=-7.362,P<0.01;111.667±15.016比73.667±14.024,t=-4.530,P<0.01);在SGC-7901细胞中抑制LINC01235的表达后细胞的增殖能力显著比对照组降低(48 h为0.425±0.133比0.667±0.091,t=-3.678,P<0.01;72 h为0.565±0.157比0.945±0.200,t=-3.661,P<0.01)、侵袭和转移能力显著比对照组降低(50.667±13.231比141.167±15.224,t=10.991,P<0.01;57.667±14.348比166.167±25.631,t=9.048,P<0.01)。在MGC-803细胞中上调LINC01235表达后p-Akt、p-mTOR、细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)表达比对照组增强(p-Akt为0.851±0.138比0.366±0.138,t=-4.304,P<0.05;p-mTOR为0.830±0.177比0.128±0.020,t=-6.826,P<0.01;Cyclin E1为0.745±0.122比0.436±0.137,t=-2.917,P<0.05),而人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)表达则比对照组减弱(0.256±0.098比0.725±0.108,t=5.570,P<0.01);在SGC7901细胞中抑制LINC01235表达后p-Akt、p-mTOR、Cyclin E1表达比对照组减弱(p-Akt为0.544±0.146比1.370±0.209,t=5.612,P<0.01;p-mTOR为0.740±0.108比1.249±0.119,t=5.486,P<0.01;Cyclin E1为0.744±0.085比1.040±0.148,t=3.004,P<0.05),而PTEN表达则比对照组增强(1.021±0.184比0.338±0.134,t=-5.197,P<0.01)。结论LINC01235在胃癌组织中表达增强且与患者预后有关,LINC01235可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性参与胃癌的进展。

雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的影响及机制研究

目的:研究雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的影响及其机制。方法:将HeLa细胞分为对照组和雷帕霉素低、中、高剂量(10、30、100 nmol/L)组,药物作用48 h后,MTT法检测细胞活力,计算抑制率;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)磷酸化水平,以及基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。结果:与对照组比较,雷帕霉素各剂量组细胞的抑制率增加(P<0.01),迁移细胞数目和侵袭细胞数目减少(P<0.01),MMP-2、MMP-9、Vimentin表达水平降低(P<0.01或P<0.05),E-cadherin表达水平增强(P<0.01或P<0.05),Akt及mTOR磷酸化水平降低(P<0.01)。结论:雷帕霉素可通过Akt/mTOR信号通路抑制He La细胞的侵袭转移。

黄芪多糖对糖尿病心肌病大鼠AMPK-mTOR通路的调控机制研究

目的:研究黄芪多糖对糖尿病心肌病(DCM)大鼠的干预作用,阐明黄芪多糖对糖尿病心肌病大鼠心肌AMPK-mTOR信号通路的影响,探讨黄芪多糖对糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用。方法:80只健康雄性SD大鼠,随机选取10只作为对照组,其余70只采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射复制DCM模型。将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、黄芪多糖组、氯喹组、黄芪多糖+氯喹组。连续给药8周后,超声心动图评价大鼠的心脏功能,HE染色观察心肌组织的病理变化,Masson染色检测大鼠心肌纤维化程度,蛋白质印迹法测定心肌组织中AMP活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR蛋白的表达,实时PCR检测心肌组织AMPK、mTOR mRNA的表达情况。结果:与对照组比较,模型组大鼠左室收缩末内径(LVESD)、左室舒张末内径(LVEDD)、mTOR蛋白、p-mTOR蛋白、mTOR mRNA明显升高,左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、AMPK、p-AMPK、AMPK mRNA明显降低(均P<0.01)。与模型组比较,黄芪多糖组组LVEDD、LVESD、mTOR蛋白、p-mTOR蛋白明显降低,LVEF、LVFS、AMPK蛋白、p-AMPK蛋白明显升高(均P<0.01)。与黄芪多糖组比较,黄芪多糖组+CQ组大鼠心肌p-AMPK蛋白、AMPK mRNA水平明显降低,mTOR、p-mTOR、mTOR mRNA水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪多糖能调节AMPK-mTOR信号通路上相关蛋白及的mRNA表达,激活AMPK-mTOR信号通路,进而发挥对糖尿病心肌病的保护作用。

AMPK/mTOR信号通路在肿瘤中的研究现状

肿瘤是信号传递过程中发生紊乱,导致细胞无限增生而形成的恶性结果。针对异常传递通路的深入研究,以发现可用的高效作用靶点是目前关于肿瘤治疗的研究热点。单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路在细胞和个体水平维持能量及氧化还原平衡方面起着举足轻重的作用,信号传递异常可能打破这种平衡而引发肿瘤。该文将对AMPK/m TOR信号通路及其激动剂在肿瘤中的研究现状进行综述。

氯胺酮通过抑制蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导B103细胞自噬产生抗帕金森病的作用及分子机制

目的 探讨氯胺酮通过诱导B103细胞自噬产生抗帕金森病 （Parkinson＇s disease, PD）的作用及分子机制。 方法 以B103细胞为实验模型，分别以不同浓度氯胺酮（0、100、200、400 μmol/L）及400 μmol/L氯胺酮＋5 mmol/L 3-methyladenine（3-MA）处理后，采用噻唑蓝［3-（4，5-dimenthyl-2-thiazolyl-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide， MTT）］染色法检测细胞增殖率；应用吖啶橙与Lyso-Tracker Red染色，荧光显微镜检测细胞自噬；Western blot检测相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3（microtubulesas sociated protein light， LC3）、蛋白激酶B（protein kinase B， Akt）、p70S6K、雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin， mTOR）、α-synuclein（α-syn）及β-synuclein（β-syn）蛋白的表达。 结果 不同浓度氯胺酮作用于神经母细胞瘤B103细胞7 d后，MTT染色法检测结果显示，100、200、400 μmol/L分别与0 μmol/L比较，细胞增殖抑制率差异无统计学意义（P〉0.05）；吖啶橙与Lyso-Tracker Red染色结果提示，随着氯胺酮浓度增加，自噬作用逐渐增强（P〈0.05）；Western blot结果显示，400 μmol/L较0 μmol/L自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、磷酸化（phospho， p）-Akt、p-p70S6K以及 p-mTOR表达减少，LC3-Ⅱ、Beclin-1表达增多（P〈0.05）；此外，400 μmol/L较0 μmol/L表达PD标志性蛋白α-syn减少而β-syn增多（P〈0.05）。自噬抑制剂（3-MA，5 mmol/L）预处理可逆转氯胺酮对B103细胞的上述作用（400 μmol/L＋3-MA与400 μmol/L比较，P〈0.05）。 结论 氯胺酮通过抑制Akt/mTOR信号转导通路诱导B103细胞自噬并降解α-syn从而产生抗PD的作用。

利拉鲁肽通过AMPK/mTOR信号通路诱导自噬改善肝脂肪变性

目的:探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路在利拉鲁肽(LG)改善肝细胞脂肪变性中的作用及机制。方法:动物实验:将小鼠分为对照组、模型组和LG组,各10只,对照组普通饲料喂养,另2组高脂饲料喂养建立肝脂肪变性模型。LG组应用LG腹腔注射0.6 mg·kg^(-1)·d^(-1),另2组应用等量0.9%氯化钠溶液,连续4周。检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、低密度脂蛋白(LDL)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG);应用HE染色和油红O染色观察肝细胞形态、脂肪变性和脂滴情况;应用蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AMPK、p-mTOR及自噬蛋白LC3B、Beclin1表达情况。细胞实验:应用棕榈酸(PA)诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,分为模型组(PA)、LG组(PA+LG)和AMPK抑制剂组(PA+LG+Compound C)。应用免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3B的表达;应用Western blotting法检测p-AMPK、p-mTOR、LC3B、Beclin1的蛋白表达情况。结果:动物实验:模型组ALT、AST、LDL、TC、TG升高,应用LG后下降,差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01);HE染色、油红O染色发现,模型组肝细胞可见大片脂肪变性、大量融合脂滴,LG组脂变减轻、脂滴含量减少。Western blotting结果显示,模型组p-AMPK、LC3B、Beclin1的蛋白表达下降,而LG组中升高,模型组p-mTOR升高,而LG组中降低(P<0.05~P<0.01)。细胞实验:免疫荧光染色LC3B发现,LG组较模型组增加,而AMPK抑制剂组,LC3B的表达受到抑制;Western blotting结果示:和模型组相比,LG组p-AMPK、LC3B、Beclin1的蛋白表达升高,而应用AMPK抑制剂后表达受抑制,而p-mTOR相反,差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:LG通过AMPK/mTOR通路来改善肝细胞脂肪变性,自噬可能参与其中。