大鼠胃黏膜组织Syk、Survivin蛋白、P53及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性

目的探讨大鼠胃黏膜组织Syk、P53、Survivin及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性。方法将48只体重180~200 g SD大鼠分为A、B、C、D 4组。A组给予生理盐水作为对照组。B组、C组和D组,采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导建立大鼠胃癌模型,1~8周给予大鼠自由饮水,水中的MNNG溶液浓度为100μg/ml(内含4 mg/l吐温20和20 mg/l的维生素D3);9~16周MNNG溶液浓度增加至150μg/ml,17~24周MNNG溶液浓度为180μg/ml。分别于第8周(B组)、第16周(C组)及第24周(D组)处死大鼠取材。HE染色切片观察大鼠胃黏膜组织病理改变,并采用Western blot检测胃黏膜Syk蛋白和Survivin蛋白水平,Q-PCR法测定胃黏膜P53和AMP-18 mRNA的表达。结果HE染色结果显示A组、B组胃黏膜组织结构正常,无炎性细胞浸润;C组胃黏膜局部有破损,细胞核增大、轻度异型,提示胃癌早期;D组胃黏膜下层及肌层有炎性细胞浸润,细胞形态不规则,核质比增大,表明胃癌进展期。免疫组化提示B组、C组和D组胃黏膜组织Syk蛋白水平明显下降(P<0.05),Survivin蛋白含量显著增加,与A组均有统计学差异(P<0.05)。Q-PCR表明C组和D组胃黏膜组织P53 mRNA表达上调,AMP-18 mRNA表达下调,且D组胃癌进展后,P53和AMP-18 mRNA水平与B组有统计学差异(P<0.05)。结论大鼠胃黏膜组织Syk蛋白、AMP-18 mRNA表达随着胃癌病变程度的进展明显下降,而Survivin蛋白、P53表达则显著上升。

KRT18与mRNA及长链非编码RNA互作调控椎间盘髓核细胞损伤的机制

背景:椎间盘中差异表达的RNA结合蛋白在椎间盘退变中发挥着关键作用,其中RNA结合蛋白KRT18水平的降低与椎间盘退行性病变相关,但其在椎间盘髓核细胞中的具体作用尚未完全确定。目的:探讨KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合互作对椎间盘髓核细胞的影响及机制。方法:对因腰部骨折或椎间盘退行性病变而接受椎间融合术的患者进行人体髓核组织取样获得正常髓核细胞和退变髓核细胞,并进行iRIP-seq、功能富集分析以及DNA微阵列分析,随后根据分析结果在髓核细胞中敲低KRT18,通过蛋白免疫印迹及qRt-PCR在蛋白和RNA水平检测相关基因水平的表达。结果与结论:通过iRIP-seq分析发现GUAAUC和AGCCUC序列中存在大量的KRT18结合位点,表明KRT18可参与调控RNA的转录、翻译、稳定性或在细胞信号传导途径中发挥作用。其能够与成熟的mRNA稳定结合,其中表达较高的基因包括CRLF1及IGFBP4等,同时与其结合的长链非编码RNA的峰值基因包括SNHG25、SNHG12、NEAT1、USP32、EIF4A2和CDH4,这些基因多涉及细胞凋亡、炎症等多种生物过程,并且能介导细胞外基质代谢的相关通路,KRT18能够调控它们的稳定性、转运、翻译、剪接等多个方面的功能,进而影响基因的表达和细胞功能。实验结果验证了在髓核细胞中敲低KRT18,细胞外基质代谢水平被抑制出现失衡,导致体外椎间盘退变。该研究首次从KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合的角度探讨其调控机制,并推测了KRT18在椎间盘退变发病机制中的潜在功能,为今后KRT18关键功能的研究奠定了基础。

大鼠胃窦黏膜AMP-18mRNA表达减少与胃癌分化程度的关系

目的：探讨大鼠胃窦黏膜AMP-18的减少或缺失与胃癌分化程度的关系。方法：将SD大鼠分成A、B、C、D 4组（每组5只）,体重160～250 g,用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱导大鼠胃癌模型。将MNNG用蒸馏水配成100μg/m L的溶液,内含4 mg/L的吐温20及20 mg/L的维生素D3,装入避光饮水瓶中喂饲大鼠8周;第9～16周将MNNG的浓度增至150μg/m L;第17～24周给予180μg/m L的MNNG溶液。14、18、22和24周分别处死4组大鼠进行取材。各组分别进行HE染色切片和Q-PCR法检测大鼠胃窦黏膜AMP-18 m RNA的表达情况。结果：通过参照胃癌分期标准,HE染色切片显示,A、B组胃窦黏膜细胞无明显变化,C组为早期胃癌,D组为进展期胃癌,Q-PCR也显示C组、D组胃黏膜的AMP-18 mRNA表达均明显下降。结论：AMP-18 mRNA在早期和进展期胃癌表达明显下降。

补肾强督方对强直性脊柱炎患者外周血IL-18、IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平的影响

目的探讨补肾强督方治疗强直性脊柱炎(AS)的可能作用机制。方法30例AS患者予补肾强督方进行治疗,疗程为6个月。研究AS患者及健康志愿者外周血中白细胞介素18(IL-18)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4 mRNA(IL-4 mRNA)表达水平及经补肾强督方治疗前后AS患者外周血中IL-18、IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平的变化。结果AS患者外周血单个核细胞IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA表达水平及IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA较正常对照组显著增高(P<0.001)。经用补肾强督方治疗后,IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA表达水平及IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA明显下降(P<0.001)。AS患者红细胞沉降率水平与IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA表达水平呈极显著相关(P<0.001);C反应蛋白水平与IL-18 mRNA表达水平呈显著相关(P<0.05),与IFN-γ mRNA表达水平呈非常显著相关(P<0.01)。结论AS患者外周血中IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA水平比正常组明显升高;用补肾强督方治疗后,患者IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA水平均有明显下降。

慢性阻塞性肺疾病患者外周血淋巴细胞NLRP3 mRNA的表达及血清IL-1β、IL-18检测的意义

目的通过对慢阻肺患者外周血淋巴细胞NLRP3 mRNA及血清中炎症介质IL-1β、IL-18的检测,探讨NLRP3炎症小体在慢阻肺发病中的作用。方法选取60例确诊AE慢阻肺患者,根据有无呼吸衰竭,分为2组,每组30例,急性加重期患者经治疗症状体征好转达到缓解期水平后作为慢阻肺组,同期门诊健康体检者30例作为健康对照组。采用ELISA检测各个组血清中IL-1β、IL-18的浓度,采用PCR检测各组中NLRP3 mRNA的表达量。结果 AECOPD组和慢阻肺缓解组患者的NLRP3 mRNA表达量和血清中IL-1β和IL-18的浓度均显著高于健康对照组(P<0.05);AE慢阻肺组患者的NLRP3 mRNA表达量和血清中IL-1β和IL-18的浓度均显著高于慢阻肺缓解组(P<0.05);慢阻肺合并呼吸衰竭患者的NLRP3 mRNA表达量和血清中IL-1β和IL-18的浓度显著高于未合并呼吸衰竭患者(P<0.05);慢阻肺患者NLRP3 mRNA表达量与血清中IL-1β、IL-18的浓度呈正相关,相关系数r分别为0.69和0.70(P<0.05);IL-1β的浓度与IL-18的浓度呈正相关,相关系数r=0.65(P<0.05)。结论 NLRP3和IL-1β、IL-18参与慢阻肺的炎症反应,其浓度升高导致慢阻肺病情严重程度增加。

内标18S rRNA和-βactin mRNA比较:肉鸡十二指肠SGLT1 mRNA的发育规律

β-actin mRNA和18S rRNA因其在相同试验条件下的稳定表达，而被广泛用作内标基因来确定目的基因的表达量。试验分别使用这2种内标基因，用相对定量RT—PCR的方法对肉鸡（0-58d）十二指肠钠葡萄糖共转运载体1（Sodium glucose cotransporter 1，SGLT1）的发育规律进行了分析研究，比较不同内标基因对SGLT1 mRNA表达水平检测结果的影响，以确定两者在一致试验条件下表达的相似度。结果表明，分别以β-ctin mRNA和18S rRNA作为内标，SGLT1 mRNA表达发育规律完全一致，均表现为2～30d不断升高，44d下降，58d回升；2d和44d的SGLT1 mRNA丰度显著低于16d（P〈0．05）和30d（P〈0．05），58d的SGLT1 mRNA表达水平显著低于30d（P〈0．05）。提示这2种管家基因均可以作为内标用于肉鸡肠道转运载体基因mRNA发育规律的相对定量研究。

原发性肾小球肾炎患者外周血IL-18 mRNA表达的研究

目的探讨白细胞介素 18( IL- 18)在原发性肾小球肾炎 ( PGN)中的作用。方法采用反转录多聚酶链反应 ( RT-PCR)及酶联免疫吸附法 ( EL ISA)测定 11例正常人及 4 6例不同病程 PGN患者外周血单核细胞 ( PBMC) IL- 18m RNA表达量及血浆中 IL- 18分泌水平。结果肾功能代偿期原发性肾小球肾炎患者 PBMC IL- 18m RNA表达量及血浆中 IL- 18的水平与正常对照组无统计学差异 ,而伴有肾功能损害的 PGN患者则显著增高 ,且与肾功能损害相平行 ;直线相关分析显示 :血浆内IL- 18水平与 Scr呈正相关、与 Ccr呈负相关、与 2 4 h尿蛋白排泄量不相关。结论外周血 IL- 18不参与 PGN早期的发病过程 ,但当疾病进一步发展至伴有肾功能不全时 ,IL-

AMP-18,一种新发现的胃黏膜保护因子

AMP-18是一种新发现的由胃腺体上皮细胞合成的小分子蛋白质,独特表达于胃黏膜,机体其他部位少见,胃癌组织中表达缺失．AMP-18 由185个氨基酸组成,除去N端信号肽(20个氨基酸)后大小约18 ku,第54-150个氨基酸组成高度保守的结构域(BRICHOS区域)承担主要的生理功能．AMP-18由胃腺体上皮细胞以胞吐的方式分泌到胃黏液中,他的合成和分泌与个体生长发育有关,并受福斯高林、吲哚美辛、地塞米松等药物的影响．目前发现 AMP-18的生理功能主要有促进胃黏膜上皮细胞的有丝分裂,促进细胞的迁徙,促胃肠黏膜损伤的修复,保持胃肠黏膜的完整等．

18α-甘草酸下调“胶原蛋白凝胶三明治”培养的大鼠肝细胞P450酶活性及mRNA表达

研究 18α 甘草酸 (18α GA)对肝细胞主要细胞色素P4 50 (CYP)药物代谢酶的影响 ,并初步探讨其分子机理 .采用“胶原蛋白凝胶三明治”培养的原代大鼠肝细胞 ,加 18α GA孵育 ,酶学测定CYP1A1(7 乙氧基异口恶唑O 脱乙基酶 ,EROD) ,CYP2E1(苯胺羟化酶 ,ANH)和CYP3A(红霉素N 脱甲基酶 ,ERD)活性 ,逆转录聚合酶链反应测定CYP1A1,CYP2E1和CYP3A1mRNA表达水平 .结果可见 ,18α GA浓度依赖性 (50～ 4 0 0mg·L- 1)抑制大鼠肝细胞EROD ,ANH和ERD活性 ,2 0 0mg·L- 1作用最强 ,抑制率分别可达 59.6 % ,6 9.7%和 4 4 .7% ,且呈时间依赖性 ,于d 4达高峰 ;浓度依赖性 (50～ 2 0 0mg·L- 1)抑制CYP1A1,CYP2E1和CYP3A1mRNA表达水平 ,分别可达 4 4 .5% ,58.1%和 37.0 % .上述结果表明 18α GA在转录水平下调大鼠肝细胞CYP1A1。

内毒素血症大鼠心肌TLR4与IL-18 mRNA表达的变化

目的 :观察内毒素 (LPS)血症时心肌组织Toll样受体 4 (Toll likereceptor 4 ,TLR4 )及IL 18 mRNA表达的变化 ,探讨TLR4与IL 18在LPS急性心肌损伤中的作用。方法 :运用RT PCR与ELISA分别检测心肌TLR4和IL 18mRNA的表达及心肌组织匀浆TNF α浓度。结果 :LPS组心肌中TLR4与IL 18 mRNA表达分别比正常对照组显著增强 (1 5 1± 0 0 7)vs(0 85± 0 0 3) ,(1 6 5± 0 0 4 )vs(0 5 6± 0 0 3) ,心肌组织匀浆中TNF α浓度显著增高 (0 6 7± 0 0 2 )ug lvs(0 39± 0 0 5ug l)。结论 :LPS血症时心肌组织TLR4功能及其介导的信号转导作用加强 ,IL 18分泌增加 ,表明二者在LPS血症心肌损伤中起重要作用。

E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒16/18型阳性患者分流的可行性

目的探讨E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒61(HPV)16/18型阳性患者分流的可行性。方法选取HPV 16/18型阳性的200例患者作为研究对象。所有患者均进行E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查及阴道镜活检检查。以病理结果为金标准,评估E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查对HPV 16/18型感染者的高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)及以上病变的诊断效能。结果在200例HPV 16/18型感染者中,阴道镜活检HSIL及以上病变的检出率仅为29.5%(59/200)。共107例患者HPV E6/E7 mRNA阳性,56例患者液基细胞学阳性。HPV E6/E7 mRNA阳性者HSIL及以上病变检出率高于阴性者(P<0.05);随着宫颈病变病理级别的提高,HPV E6/E7 mRNA阳性率呈升高趋势(均P<0.05),但液基细胞学异常率差异无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA诊断HSIL及以上病变的灵敏度、特异度分别为86.44%、60.28%,液基细胞学的灵敏度、特异度分别为25.42%、70.92%,HPV E6/E7 mRNA的灵敏度高于液基细胞学(P<0.05)。结论E6/E7 mRNA检测对HPV 16/18型感染者的HSIL及以上病变具有较好的诊断效能,或可用于患者的进一步分流,以降低阴道镜的转诊率。

脓毒症患儿外周血单个核细胞中微小RNA-466和GPR18 mRNA的表达及诊断价值

目的探讨微小RNA-466(miRNA-466)和G蛋白偶联受体18(GPR18)mRNA在脓毒症患儿外周血单个核细胞中的表达及诊断价值。方法选取中山大学附属第八医院儿科2017年10月至2019年6月收治的脓毒症患儿90例为病例组,选取体检健康儿童60例为对照组,检测两组外周血白细胞计数(WBC)和C反应蛋白(CRP)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血单个核细胞中miRNA-466和GPR18 mRNA相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线比较WBC、CRP及外周血单个核细胞中miRNA-466和GPR18 mRNA相对表达量对患儿脓毒症的诊断价值。结果病例组WBC、CRP水平,外周血单个核细胞中miRNA-466和GPR18 mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.05)。病例组CRP水平(r=0.472,P<0.01),外周血单个核细胞中miRNA-466相对表达量(r=0.489,P<0.001)和GPR18 mRNA相对表达量(r=0.507,P<0.001)均与序贯器官衰竭评分(SOFA评分)呈正相关。外周血单个核细胞中miRNA-466和GPR18 mRNA表达水平呈正相关(r=0.618,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,CRP水平、miRNA-466和GPR18 mRNA相对表达量诊断脓毒症的曲线下面积分别为0.758(95%CI:0.669~0.817)、0.901(95%CI:0.813~0.969)和0.858(95%CI:0.761~0.917)。联合检测miRNA-466和GPR18 mRNA时诊断脓毒症的曲线下面积为0.947(95%CI:0.898~0.981),灵敏度为90.9%,特异度为93.9%。结论脓毒症患儿外周血单个核细胞中miRNA-466和GPR18 mRNA表达升高,联合检测可提高脓毒症诊断效能。

食管癌组织中ADAMTS1、ADAMTS18基因mRNA的表达及其意义

目的探讨ADAMTS1和ADAMTS18基因在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测70例食管鳞状细胞癌组织及癌旁正常组织中ADAMTS1、ADAMTS18的mRNA表达,并分析基因表达与临床病理资料之间的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中ADAMTS1、ADAMTS18基因的mRNA表达水平显著低于相应的癌旁正常组织(P<0.01);分组后经统计学分析发现,食管鳞状细胞癌患者的性别、年龄与ADAMTS1、ADAMTS18基因mRNA的表达均无统计学相关(P>0.05),ADAMTS1基因mRNA在有淋巴结转移组的表达量高于无淋巴结转移组(P<0.05),ADAMTS18基因mRNA的表达在两组间的差异无统计学意义(P>0.05);高中分化鳞癌组ADAMTS18基因的mRNA相对表达量高于低分化鳞癌组相对表达量(P<0.05),ADAMTS1基因的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);按照TNM分期进行统计分析,Ⅰ+Ⅱ期ADAMTS1、ADAMTS18的mRNA相对表达量与Ⅲ+Ⅳ期的mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论ADAMTS1及ADAMTS18基因的表达缺失或降低可能与食管鳞状细胞癌的发生有关,且ADAMTS1基因mRNA的表达水平可能与食管鳞状细胞癌的淋巴结转移密切相关,而ADAMTS18基因mRNA的高表达可能会促进食管鳞状细胞癌组织的分化。

AMP-18在胆汁对胃黏膜细胞损伤中的作用

目的通过大鼠实验模型及人胃黏膜细胞培养技术探讨AMP-18在胆汁对胃黏膜细胞损伤中的表达。方法健康雌、雄性各半SD大鼠44只,分成4组:全反流模型(DGR)组、结扎胆管(BDL)组、全反流模型+结扎胆管(DGR+BDL)组、对照(C)组。手术后12周处死大鼠。胃黏膜上皮细胞GES-1培养:以不同浓度(500μmol/L,1 000μmol/L)甘氨胆酸钠(GC),甘氨脱氧胆酸钠(GDC),甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC),牛磺胆酸钠(TC),牛磺脱氧胆酸钠(TDC),牛磺鹅脱氧胆酸钠(TCDC),石胆酸(LCA),胆酸(CA)及脱氧胆酸(DCA),不同浓度(1 500μmol/L,2 000μmol/L)混合胆盐及混合胆酸作用后,用RT-PCR法检测大鼠胃黏膜、人胃黏膜上皮细胞AMP-18mRNA的表达。结果大鼠胃黏膜AMP-18表达,DGR较DGR+BDL、BDL及C组减少,差异有统计学意义(P<0.05),DGR+BDL与BDL组较对照组降低,但差异无统计学意义(P>0.05);各组GCDC、GDC、GC、TCDC、TDC、TC、DCA、LCA、CA、混合胆盐/酸作用于GES-1细胞后,GC实验组AMP-18表达虽随作用浓度的提高较对照组降低,但差异无统计学意义(P>0.05);余各组GES-1细胞AMP-18表达随作用浓度的提高均较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AMP-18在胆汁损伤的实验中,对胃肠黏膜损伤的修复有着重要作用。

PMA对U937细胞CD18 mRNA表达的诱导作用及其机制

目的 :研究PMA对CD18mRNA表达的促进作用及机制。方法 :选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型 ,运用定量RT -PCR方法检测U937细胞CD18mRNA的表达水平。结果 :PMA具有浓度和时间依赖性地诱导U937细胞CD18mRNA表达的作用 ,这种作用能分别被PKC、NF -κB抑制剂所抑制 ,但不能被转录因子AP - 1抑制剂所抑制。结论 :PMA能激活细胞的PKC ,进而通过其后的信号转导通路促进CD18mRNA的表达 ,转录因子NF -κB为PMA刺激下的U937细胞CD18基因转录所必需 ,而AP -

选择性消化道脱污染对烫伤大鼠组织白细胞介素-18 mRNA表达的影响

目的 探讨选择性消化道脱污染对烫伤大鼠组织白细胞介素 - 18mRNA表达的影响。方法 采用大鼠 30 %体表面积Ⅲ度烫伤模型 ,实验动物随机分为正常对照组、烫伤延迟复苏组、选择性消化道脱污染 (SDD)预防组 ,肠、肺、肝、肾等组织IL - 18mRNA含量采用逆转录聚合酶链式反应检测。结果 烫伤后体循环内毒素水平显著升高 ,8h、2 4h达高峰 (P <0 0 1) ,给予SDD预治疗可显著降低内毒素峰值 (P <0 0 5 ) ;另一方面 ,烫伤后 2h肠、肺、肝、肾等组织IL - 18mRNA表达较伤前即有显著升高 ,烫伤后 8h达高峰 (P <0 0 1) ,且一直持续至伤后 2 4h ,给予SDD预治疗后可不同程度抑制IL - 18mRNA的表达 (P <0 0 5～ 0 0 1)。结论 肠、肺、肝、肾等组织IL - 18mRNA表达在烫伤早期即显著增多 ,并呈一逐渐升高的趋势 ,创伤后内毒素血症对机体多种组织IL - 18mRNA基因表达具有重要影响 ,SDD预治疗后可不同程度抑制IL -

DMN诱导的小鼠慢性中毒性肝炎过程中IL-18、TNF-αmRNA及FasmRNA的动态变化

目的 观察二甲基亚硝胺(DMN)所致小鼠慢性中毒性肝炎时肝组织损伤与IL-18、TNF-α mRNA、FasmRNA表达的动态变化。方法 取30只小鼠作为模型组,腹腔注射0.1％的DMN14 mg／kg,每隔4 d注射1次,共注射5次。分别在第1、3、5次注射后2 d(即实验第3 d、11 d、19 d)及停止注射14 d(即实验第31 d)眼球取血后分批处死动物(每次处死6只),检测血清IL-18、肝组织TNF-α mRNA及Fas mRNA的表达。对照组6只小鼠,腹腔注射生理盐水,每隔4 d 1次,共5次,于第31 d处死,检测指标同模型组。结果 小鼠第一次注射DMN后肝细胞气球样改变为主,炎症、坏死不明显。随着注射次数的增加,炎症、坏死逐渐加重。停止注射后,肝组织逐渐修复。血清IL-18、肝组织TNF-α mRNA及Fas mRNA水平随着炎症、坏死的加重而升高,且呈正相关关系。结论DMN所致小鼠中毒性慢性肝炎的IL-18、TNF-α mRNA、Fas mRNA的改变与肝组织病理改变同步,呈正相关关系,与人类肝炎时有一定的相似性。