同时产超广谱β-内酰胺酶和AmpCβ-内酰胺酶菌的单独和联合药物敏感分析

目的 研究同时产超广谱β-内酰胺酶 (ESBL s)和 Am p Cβ-内酰胺酶 (Amp Cs)菌 (同产酶菌 )的抗生素单独和联合耐药性 ,以期指导同产酶菌的治疗。方法 采用多底物纸片法 (协同法、拮抗法 )、ESBL s确认试验、Am p Cs检测法检测 33株阴沟肠杆菌和 4 6株不动杆菌属的 ESBL s和 Amp Cs产酶情况 ,以琼脂扩散法检测同产酶菌的抗生素单独和联合耐药性。结果 在本组菌 ,检出同时产 ESBL s+Am p Cs产酶株 4 2株 ,其中 ESBL s+诱导型Amp Cs 12株 ,ESBL s+高产 Amp Cs 30株 ;同时产 ESBL s+诱导型 Amp Cs菌对亚胺培南、头孢吡肟和头孢哌酮 /他唑巴坦的单独敏感率均 >90 % ,对阿米卡星的敏感率为 6 6 .6 7% ,对其他 4大类 6种抗生素的单独敏感率均 <34% ;对 4大类 10种抗生素的 10种组合联合药敏 ,氨曲南与阿莫西林 /克拉维酸协同率高 (75 % ) ,亚胺培南与头孢哌酮 /他唑巴坦的拮抗率也较高 (5 0 % ) ,其余大部分为无关 ;在同时产 ESBL s+高产 Am p Cs时 ,有效抗菌药物仅为亚胺培南、头孢哌酮 /他唑巴坦 ,对其他 4大类 8种抗生素的单独敏感率均 <2 0 % ;对 4大类 10种抗生素的10种组合联合药敏 ,除氨曲南与阿莫西林 /克拉维酸有少量协同外 ,全部为无关。结论 阴沟肠杆菌和不动杆菌属的同产酶率很高 ;

AmpCβ-内酰胺酶的产生机制及检测方法学进展

AmpCβ -内酰胺酶存在于许多革兰氏阴性菌中 ,最初由染色体介导 ,目前已转移到质粒上。它与超广谱 β -内酰胺酶 (ESBLs)的最主要表型区别是耐药谱的扩大且不能被克拉维酸抑制。诱导表达是染色体AmpC酶表达的典型模式 ,受染色体amp操纵子调控。基因突变造成的高产表达和新型质粒AmpC酶的不断出现威胁着感染性疾病的治疗。目前检测AmpC酶的方法有纸片诱导、抑制剂协同、三维试验、等电聚焦、基因检测等。需要发展简便、快速、准确的检测技术应用于临床实验室 ,指导合理正确使用抗生素 。

质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶的研究进展

近些年来研究表明 ,质粒介导的AmpCβ -内酰胺酶主要由肠杆菌科细菌产生 ,具有比ESBLs酶更广的水解底物谱 ,能有效水解三代头孢菌素类、单环类及头霉素类抗生素 ,且不受酶抑制剂所抑制。携带编码ampC酶基因质粒快速复制和可转移性的特点 ,导致耐药性广泛传播 ,给临床治疗带来极大困难。本文就质粒介导的AmpCβ -内酰胺酶的来源、流行病学特点、分类及基因表达调控等方面进行综述。

革兰氏阴性杆菌AmpCβ-内酰胺酶的检测及其意义

目的:了解革兰氏阴性杆菌AmpCβ-内酰胺酶的产生情况,为临床选择抗生素提供实验室依据。方法:采用K-B实验,选用5种药敏纸片(IPM、FEP、CD02、CD03、CTX),参照相关标准,根据耐药特征推测AmpCβ-内酰胺酶的产生。结果:180株革兰氏阴性杆菌中检出产AmpCβ-内酰胺酶菌株共36株,总检出率为20.0%(36/180),以阴沟肠杆菌的检出率最高,其次为鲍曼氏不动杆菌和绿脓假单胞菌。结论:五联药敏纸片扩散法检测AmpCβ-内酰胺酶简便、快速、准确,易于在临床试验室中推广应用。

AmpCβ-内酰胺酶研究进展

AmpC酶是在革兰阴性杆菌中发现的一类由染色体介导的水解头孢菌素的I型 β 内酰胺酶。AmpC酶具有诱导性 ,以其诱导酶和非诱导酶的形式存在。与ESBLS不同的是AmpC酶对三代头孢耐药且不被克拉维酸所抑制。高产AmpC酶的菌株引起的感染使现代抗感染治疗面临严峻挑战。AmpC酶的表达及调控与ampC、ampR、ampD、ampG有关。AmpC不但可由染色体编码 ,而且也可由质粒介导 ,质粒介导的AmpC酶的出现增强了耐药菌株的横向传播能力。AmpC酶的检测包括头孢西丁三相试验 ,等电聚焦电泳以及PCR等方法。目前治疗由产AmpC菌株引起感染的药物十分有限 ,可供选择的药物主要有碳青霉烯类(亚胺培南 ) ,第四代头孢菌素 (头孢吡肟 ,头孢匹罗 )等。

美国感染病学会关于产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌目细菌(ESBL-E)、耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)、难治性耐药铜绿假单胞菌(DTR-PA)、产AmpCβ-内酰胺酶肠杆菌目细菌(AmpC-E)、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)和嗜麦芽窄食单胞菌的抗感染治疗指引(2022版)摘要

美国感染病学会(IDSA)致力于为抗微生物药物耐药性感染的治疗提供最新指引。两份指引文件分别针对产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌目细菌(ESBL-E)、耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)、难治性耐药铜绿假单胞菌(DTR-PA)和产AmpCβ-内酰胺酶肠杆菌目细菌(AmpC-E)、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)和嗜麦芽窄食单胞菌感染的治疗提供指导建议。与之前的指南比,已发表的关于AmpC-E、CRAB和嗜麦芽窄食单胞菌感染最佳治疗的数据相对较少,因此指引文件是基于临床经验、专家意见和对现有文献的回顾而提供的“指引”。在全球范围内,由于耐药菌的流行病学和特定抗感染药物的可获得性存在地区差异,指引文件主要侧重于美国的抗感染治疗,适用于成人和儿童。对于抗微生物药物耐药性感染的治疗,建议咨询感染病专家。此指引将每年更新。最新版本于2022年3月7日发布于https://www.idsociety.org/practice-guideline/amr-guidance/和2022年3月31日发布于https://www.idsociety.org/practice-guideline/amr-guidance-2.0/。

多剂量协同法检测AmpCβ-内酰胺酶

目的 建立一种简便有效的检测AmpCβ 内酰胺酶的方法。 方法 以邻氯西林作为AmpCβ 内酰胺酶的抑制剂 ,采用多剂量协同法检测 14株肠杆菌科细菌中的AmpC并作分型 ,用双纸片确证法和纸片协同法检测超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)。同时用亚胺培南作诱导试验 ,用琼脂稀释法测定诱导前后细菌对 4种抗生素的MIC。结果 14株菌中有 3株产持续高产型AmpCβ 内酰胺酶 ,7株产诱导高产型AmpCβ 内酰胺酶 ;6株产ESBL。产诱导高产型AmpCβ 内酰胺酶细菌诱导前后MIC变化较大 ,而产持续高产型AmpCβ 内酰胺酶细菌诱导前后MIC变化不大。结论 多剂量协同法方法简便 ,成本低廉 ,可作为临床微生物实验室对产AmpCβ

铜绿假单胞菌质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶耐药性检测

目的 研究铜绿假单胞菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的耐药性，检测产AmpC酶株的耐药表型，为临床抗生素的合理使用提供实验室依据。方法 收集108株临床分离鉴定的铜绿假单胞菌，采用Kirby-Bauer药敏纸片法和头孢西丁三维试验（cefoxitin three dimensional test）方法检测出产AmpC酶阳性菌株，检测AmpC酶阳性菌株对12种抗生素的耐药表型。结果 在所收集临床分离的108株铜绿假单胞菌中，产AmpC酶铜绿假单胞菌28株，产AmpC酶菌株对多种抗生素耐药。结论 铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药，产AmpC酶是铜绿假单胞菌对多种抗生素产生耐药的重要机制。

革兰阴性杆菌中AmpCβ-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

目的了解革兰阴性杆菌临床分离株AmpCβ-内酰胺酶的发生率及产酶株的耐药性。方法采用三维试验检测AmpCβ-内酰胺酶;用K-B纸片法进行抗菌药物敏感试验。结果236株革兰阴性杆菌中,三维试验阳性菌株29株;17株(7.2%)单产AmpC酶,8株(3.4%)单产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),2株(0.8%)同时产AmpC酶和ESBLs,2株(0.8%)为非产AmpC酶和ESBLs菌株;共检出产AmpC酶菌株19株,检出率为8.1%;药物敏感试验结果显示,除亚胺培南和头孢吡肟外,产酶株的耐药率明显高于非产酶株。结论本院革兰阴性杆菌AmpC酶的检出率为8.1%;产酶菌呈多重耐药特性,治疗产酶菌感染首选第四代头孢菌素及碳青霉烯类药物。

AmpCβ-内酰胺酶的研究进展

随着现代医疗技术的发展，侵入性操作不断增加以及广谱β-内酰胺类抗生素特别是第三、四代头孢类抗生素及多种β-内酰胺类酶抑制剂在临床上的大量使用，使一些条件致病菌成为医院感染的重要病原菌。因产生各种β-内酰胺酶而导致细菌的耐药现象也日益普遍，特别是去阻遏持续高产和质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶（简称AmpC酶）具有很强的耐药性，给临床治疗带来很大的困难。

四联药敏纸片同步检测ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶

目的建立一种简便、实用的方法,同步检测临床分离菌株的ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶,为临床选择抗生素提供依据。方法用亚胺培南、阿莫西林/棒酸、头孢他定、头孢噻肟(或头孢曲松、氨曲南)四纸片琼脂扩散法,根据各纸片间抑菌的协同、拮抗作用及耐药谱判断结果。结果200株革兰阴性杆菌中有55株单产ESBLs(27.5%),33株诱导高产AmpC酶(16.5%),19株同时产ESBLs和诱导高产AmpC(9.5%),有20株去阻遏突变高产AmpC酶(10.0%)。四纸片同步法分别与双纸片增效法、头孢西丁三维试验比较,检测ESBLs、高产AmpC酶的总符合率分别为94.7%和93.6%。增加头孢曲松和氨曲南两种基质,ESBLs、诱导高产AmpC、ESBLs/诱导高产AmpC的检出率分别提高了16.3%、12.1%、15.8%。结论此方法不需任何特殊设备,能准确、简便、快速检测革兰阴性杆菌的ESBLs或AmpC酶,并能检测出同时携带两种酶的菌株。

AmpCβ-内酰胺酶的研究进展

β-内酰胺酶是革兰阴性杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,AmpCβ-内酰胺酶是其中一个重要分支。AmpC酶有染色体介导和质粒介导两类。现就AmpC酶表达特点、生化特性及调控机制,特别针对质粒介导的AmpC酶起源、特性、基因表达调控等研究进展作一综述。

1株犊牛源多重耐药大肠杆菌分离株的ESBLs与AmpCβ-内酰胺酶表型检测

为了了解1株大肠杆菌分离株的耐药情况及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与头孢菌素酶(AmpC)的耐药表型,从山西省某奶牛场因腹泻致死的1头犊牛肝脏中分离到1株优势大肠杆菌临床株,通过K-B纸片扩散法对该分离株进行了药物敏感性试验;并分别运用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的双纸片协同法(DDST)和参照NCCLS2000药选规则而设计的阻抑物基法对该分离株进行了ESBLs与AmpCβ-内酰胺酶的表型确认试验;此外,还对该分离株质粒介导的blaTEM基因型进行了PCR检测。药物敏感试验结果显示,该大肠杆菌分离株对青霉素、阿莫西林、氨苄西林等20种抗生素产生耐药,对多黏菌素B、痢特灵和头孢西丁敏感,而对磷霉素、头孢曲松中度敏感;ESBLs与AmpCβ-内酰胺酶表型筛选结果显示,该分离株为兼产ESBLs与AmpCβ-内酰胺酶的阳性菌株;PCR检测结果显示,该分离株携带有质粒介导的blaTEM基因,检测到的该基因型与国内其他地区普遍流行的blaESBL基因型一致。该分离株为多重耐药性大肠杆菌菌株,且兼产ESBLs、AmpCβ-内酰胺酶;多黏菌素B、痢特灵和头孢西丁可作为治疗该场犊牛腹泻的首选药物。

β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性

β-内酰胺酶抑制剂与广谱β-内酰胺抗生素的联合使用是一种有效解决细菌耐药的策略之一。目前上市的β-内酰胺酶抑制剂按其化学结构主要包括氧青霉烯类(克拉维酸)、青霉烷砜类(舒巴坦和他唑巴坦)和二氮杂二环辛烷类化合物(阿维巴坦),本文对临床常见的β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性进行综述,并结合当前药典标准中的有关物质检查项,探讨上述β-内酰胺酶抑制剂的杂质谱控制策略。

某三甲医院细菌耐药健康及经济负担研究——以产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌为例

目的 细菌耐药是全世界共同面对的公共健康难题,产生了严重的健康及经济威胁。本研究从医院视角进一步明确产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌感染导致的健康及经济负担,以期为细菌耐药相关政策干预的评估与优化提供实证依据。方法 选取江西省某三甲医院出院时间在2018—2019年的170,819住院人次样本为研究对象,并设置了ESBLs阳性感染组、ESBLs阴性感染组和无感染及定植组。采用倾向得分匹配(propensity score matching, PSM)对3个组进行1:1:100匹配,并采用Cox比例风险回归模型、多状态模型分别测算ESBLs阳性感染组相对于两对照组的死亡风险比(hazard ratio, HR)和额外床日数,最终基于医院视角测算额外住院成本。结果 经匹配后纳入分析的ESBLs阳性感染组、ESBLs阴性感染组和无感染及定植组的样本分别为885、885和81,245住院人次。ESBLs阳性感染组的死亡风险是无感染及定植组的2.58倍(P<0.001),同ESBLs阴性感染者相比并未显著增大患者的死亡风险(P=0.25)。ESBLs阳性感染组相较于其无感染及定植组和ESBLs阴性感染组产生的额外床日数分别为每例3.69 d和1.92 d,对应的额外住院成本为每例6,570.12元和3,418.60元。结论 产ESBLs大肠埃希菌感染会增加患者死亡风险,延长住院时间并加重患者的经济负担,应采取措施进行防控。

枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产β-内酰胺酶的抑制作用

【目的】探讨枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶的抑制作用机制,为临床研发β-内酰胺酶抑制剂提供基础依据。【方法】通过青霉素抑菌圈边缘试验筛选产β-内酰胺酶阳性菌株,通过药敏纸片法检测阳性菌株在32、64、128μg/mL枸杞槲皮素作用下对青霉素的敏感性变化;借助多功能酶标仪检测在32、64、128、256μg/mL枸杞槲皮素处理下青霉素含量的变化,并以此来评估枸杞槲皮素对β-内酰胺酶合成及在64、128、256μg/mL枸杞槲皮素作用下对β-内酰胺酶活性的影响。通过AutoDockTools 1.5.6软件对枸杞槲皮素与BlaZ蛋白进行分子对接,采用Discovery Studio 2019 Client软件对分子对接结果进行可视化分析。【结果】从36株金黄色葡萄球菌中共筛选出23株产β-内酰胺酶阳性菌株。药敏纸片结果表明,随着枸杞槲皮素浓度的升高,阳性菌株对青霉素的敏感性增加。多功能酶标仪检测结果表明,枸杞槲皮素可以抑制β-内酰胺酶的合成,并显著抑制β-内酰胺酶的活性(P<0.05)。分子对接结果表明,枸杞槲皮素通过与BlaZ蛋白Ω-loop区域内的保守残基Asn161以氢键结合,影响BlaZ蛋白与β-内酰胺类抗生素的结合。【结论】枸杞槲皮素可以减少β-内酰胺酶的合成,还可通过降低β-内酰胺酶的活性增强青霉素的抑菌作用,具有作为β-内酰胺酶抑制剂的潜在活性,为后续开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供了参考依据。

山东省禽源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的分子流行病学分析

【目的】分析山东省禽源产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, ESBLs)大肠杆菌的耐药情况、耐药机制、毒力基因、多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)、亲缘性和Inc型质粒,为禽临床合理使用抗菌药物防治此类细菌病提供参考。【方法】复苏2021年4月-2021年7月分离自山东省禽泄殖腔拭子样本中的38株产ESBLs大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定其对16种抗菌药物的敏感性,通过全基因组测序检测其携带的耐药基因、毒力基因、MLST、Inc型质粒,使用Parsnp构建菌株系统发育树。【结果】药敏试验结果显示,所有菌株对氨苄西林、头孢噻呋和头孢他啶耐药,对磺胺异噁唑(97.4%)、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(94.7%)、四环素(89.5%)、氟苯尼考(86.8%)、大观霉素(84.2%)耐药严重。全基因组分析结果显示,38株产ESBLs大肠杆菌的blaCTX-M型中blaCTX-M-55基因携带率为34.2%,blaNDM型中blaNDM-5和blaNDM-4基因携带率分别为21.1%和10.5%,其携带大量介导临床中常用抗菌药物的耐药基因和黏附类、侵袭类、血清抗性、铁转运类毒力基因。MLST结果显示,ST10(13.2%)为产ESBLs大肠杆菌最流行的ST型,其次是ST616(10.5%)和ST746(10.5%)。系统发育树分析表明,ST10、ST616和ST746分别属于同一起源。Inc型质粒结果显示,IncFIB(AP001918)携带率最高(68.4%),其次为IncHI2(42.1%)。【结论】山东省禽源产ESBLs大肠杆菌耐药状况严峻,blaCTX-M基因是导致大肠杆菌对超广谱β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要原因,且该类菌株携带大量毒力基因,亟需对其加强监测。

β-内酰胺酶抑制剂关键中间体的微通道技术合成

为了优化二氮杂双环辛烷(DBO)类新型β-内酰胺酶抑制剂的关键中间体(2S,5R)-6-苄氧基-7-氧代-1,6-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-羧酸(Ⅰ)的合成工艺,采用微通道技术,通过对反应溶剂、温度、停留时间和碱的优化,以加快反应速率,提高反应产率。结果表明:采用连续流微通道技术,以(2S,5R)-6-苄氧基-7-氧代-1,6-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-羧酸苄酯(Ⅱ)为原料,在氢氧化锂的丙酮水溶液中,温度45℃,反应时间20 min,水解制备得到DBO类新型β-内酰胺酶抑制剂的关键中间体(Ⅰ),经氢谱、碳谱、高分辨质谱鉴定,产物与目标化合物一致,目标产物的收率可达95%。该微通道合成方法显著加快反应速率的同时提高了反应收率,对DBO类新型β-内酰胺酶抑制剂的工业化生产具有应用前景。

对比黏液型肺克超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达和毒力基因分布的相关性并对其耐药性进行分析

目的分析黏液型肺克(MT-KPN)的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达、耐药性、毒力基因分布情况。方法收集郑州市第一人民医院2021年3月至2022年3月非重复性KPN 725株,黏液丝试验分离出123株MT-KPN,对其ESBLs表达、耐药性使用CITEK 2 Compact系统分析,毒力基因分布情况使用聚合酶链式反应(PCR)实验分析。结果肺炎克雷伯菌(KPN)检出率最高的科室是重症医学科;同一科室检出KPN类型差异较大的是重症医学科、全科医学科、神经外科,肾内科只检出cKPN;123株MT-KPN包括ESBLs阳性菌34株、ESBLs阴性菌89株。ESBLs阳性菌耐药性高达100.00%的7种药物(头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸),ESBLs阴性菌对上述药物耐药性显著低于ESBLs阳性菌(P<0.05);妥布霉素、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P<0.05);庆大霉素、美罗培南、环丙沙星、左氧氟沙星耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P>0.05);MT-KPN的荚膜血清型基因检出率wzyK2最高;荚膜血清型基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05);MT-KPN毒力基因检出率最高的是mrkD;aerobactin、iroN、wcaG检出率相比ESBLs阳性菌<ESBLs阴性菌(P<0.05);其他毒力基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论MT-KPN携带毒力基因检出率较高,临床需结合其耐药性和毒力基因分布情况合理用药。