基于SIRT1/AMPK/SREBP-1c通路探讨加味二陈汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏脂质代谢的影响

目的探讨加味二陈汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响及机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、阿托伐他汀组(0.05 g·kg^(-1))及加味二陈汤低、高剂量组(12、24 g·kg^(-1))。采用连续10周高脂饲料饲养复制NAFLD小鼠模型。从第11周开始灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,连续给药6周。第16周结束给药前,小鼠禁食12 h后腹腔注射1 g·kg^(-1)葡萄糖溶液,于0、15、30、60、90、120 min测定小鼠血糖值。测定并记录各组小鼠体质量、肝脏质量,计算肝脏系数;检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、总谷胱甘肽(TGSH)及肝脏组织TC、TG的含量或活性。采用HE染色法及油红O染色法观察肝组织病理变化;采用RT-qPCR及Western Blot法检测肝组织沉默信息调节因子1(SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)mRNA及蛋白表达情况。结果造模结束后,与正常组比较,各造模组小鼠体质量显著升高(P<0.01,P<0.001)。给药结束后,与正常组比较,模型组小鼠的体质量、肝质量及肝脏系数显著升高(P<0.05,P<0.001);血清TC、TG及LDL-C水平显著升高(P<0.001),HDL-C水平显著降低(P<0.001);肝组织TC、TG及血清ALT、AST水平显著升高(P<0.05,P<0.001);血清SOD、TGSH水平显著降低(P<0.05,P<0.001),空腹及注射葡萄糖后(15、30、60、90、120 min)的血糖水平明显升高(P<0.05,P<0.01);肝组织细胞质可见大量的空泡,胞质出现大量红染的脂滴;肝组织SIRT1、AMPK mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01),SREBP-1c mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,阿托伐他汀组及加味二陈汤低、高剂量组小鼠的体质量、肝质量、肝脏系数显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);血清TC、TG及LDL-C水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),HDL-C水平显著升高(P<0.001);肝组织TC、TG及血清ALT、AST水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);血清SOD、TGSH水平明显升高(P<0.05,P<0.01),空腹及注射葡萄糖后(15、30、60、90、120 min)的血糖水平明显降低(P<0.05,P<0.01);肝细胞胞质内橘红色脂滴显著减少,脂质蓄积显著改善;肝组织SIRT1、AMPK mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),SREBP-1c mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.001)。结论加味二陈汤对NAFLD小鼠肝脏脂质代谢有显著改善作用,其机制可能与调控SIRT1/AMPK/SREBP-1c通路有关。

黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c/ACC通路的影响

目的 探讨黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠的防治作用及机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(辛伐他汀,2.1 mg·kg^(-1))组和黄芪总皂苷+荷叶总生物碱低(17+40 mg·kg^(-1))、中(34+80 mg·kg^(-1))、高(68+160 mg·kg^(-1))剂量组;采用高脂饲料喂养复制高脂血症大鼠模型,同时给予药物灌胃治疗,每日1次,连续4周。检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;采用HE染色法观察肝脏组织病理形态学变化;qRT-PCR法检测肝组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)m RNA表达情况;免疫荧光法检测肝组织中p-AMPK、SREBP-1c、ACC、CPT-1蛋白表达情况;Western Blot法检测肝组织中AMPK、p-AMPK、SREBP-1c、ACC、p-ACC、CPT-1蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01);大鼠肝细胞内有大量的脂滴聚集,胞浆疏松,出现了大量脂滴空泡和气球样变,细胞核偏移;大鼠肝组织AMPK、CPT-1 mRNA表达显著下调(P<0.01),ACC、SREBP-1c mRNA表达显著上调(P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显减少(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著增加(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平明显下降(P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平明显下降(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平明显升高(P<0.01);大鼠肝细胞内的脂肪沉积均有明显减轻,仅见少量的脂滴空泡;大鼠肝组织AMPK、CPT-1mRNA的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著减少(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论 黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱可能通过调节AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路,抑制脂肪合成,促进脂肪酸氧化分解来防治高脂血症。

基于AMPK/SREBP-1c信号通路探讨益气健脾汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠糖脂代谢的影响

目的探讨益气健脾汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)信号通路的影响。方法将40只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、益气健脾汤组,每组10只。除空白组外,其他组均使用高脂饮食喂养建立非酒精性脂肪性肝病模型,造模周期为12周,从第9周开始,二甲双胍组给予二甲双胍100 mg/(kg·d)灌胃,益气健脾汤组给予益气健脾汤0.5 mL/d(生药浓度2.34 g/mL)灌胃,空白组和模型组给予蒸馏水0.5 mL/d灌胃。灌胃4周后,经腹主动脉采血,ELISA法检测血脂指标[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)]、肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);取肝脏,计算肝指数,使用HE染色和油红O染色观察肝脏组织病理学改变,分别采用Western blot法和RT-qPCR法检测肝组织中p-AMPK、SREBP-1c蛋白及mRNA表达情况。结果模型组小鼠血清TG、TC、FFA、ALT、AST、FPG、FINS水平及HOMA-IR、肝指数、NAS评分和油红O染色面积均明显高于空白组(P均<0.05),二甲双胍组和益气健脾汤组各指标均明显低于模型组(P<0.05)。HE染色及油红O染色显示,模型组小鼠肝组织可见肝细胞明显肿胀、气球样变性,大泡样脂滴形成并融合;二甲双胍组和益气健脾汤组肝细胞肿胀、气球样病变、脂肪变性均较模型组轻。各组小鼠肝组织中AMPK蛋白和mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05);与空白组比较,模型组小鼠p-AMPK蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),SREBP-1c蛋白和mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,二甲双胍组及益气健脾汤组p-AMPK蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),SREBP-1c蛋白和mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),并且益气健脾汤组SREBP-1c蛋白和mRNA相对表达量均明显低于二甲双胍组(P均<0.05)。结论益气健脾汤可以通过调控AMPK/SREBP-1c信号通路改善非酒精性脂肪性肝病小鼠的胰岛素抵抗,抑制脂质合成,进而改善糖脂代谢。

萆薢总皂苷调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,采用高脂高胆固醇饲料+20%果糖水喂养16周,将造模组小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(4 mg·kg^(-1)·d^(-1))、TSD高、中、低剂量组(200、60、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),灌胃给药,连续8周。测定小鼠活动度、肝脏系数、肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)及血清TC、TG、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色、油红O染色和透射电子显微镜观察肝组织和肝细胞病理变化、脂质蓄积情况和肝脏超微结构形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织AMP活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及其磷酸化形式的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠活动度明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显升高,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显降低,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,阿托伐他汀组小鼠活动度明显增加(P<0.05),TSD各剂量组小鼠活动度无明显改变;TSD及阿托伐他汀组小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显降低,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显升高,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:TSD可能通过调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路减少脂质合成,从而改善小鼠NASH。

丹酚酸B调节SIRT1信号途径抑制H_(2)O_(2)诱导的NLRP3炎症小体激活

目的基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径探讨丹酚酸B(Sal B)抗氧化应激致细胞损伤的作用机制,以期阐明丹酚酸B抗心肌缺血的作用机制。方法采用体外构建H_(2)O_(2)诱导的氧化应激细胞模型,将H9c2细胞分为6组,分别为正常组、模型组(600μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)刺激)、H_(2)O_(2)+丹酚酸B(5、10、20μmol·L^(-1))组和H_(2)O_(2)+丹酚酸B(20μmol·L^(-1))+EX527(10μmol·L^(-1))组。采用MTT法测定细胞活性;Hoechst染色法测定细胞凋亡;比色法及ELISA法分别测定乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-1β水平;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;采用JC-1荧光探针测定线粒体膜电位;Western Blot法测定H9c2细胞中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC),以及SIRT1信号通路相关的SIRT1、磷酸化AMP蛋白活化激酶α(p-AMPKα)、AMP蛋白活化激酶α(AMPKα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞活力及线粒体膜电位明显降低(P<0.01),细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH和炎症因子IL-1β水平明显升高(P<0.01);与NLRP3炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白表达显著上调(P<0.01),SIRT1、p-AMPKα/AMPKα和PGC-1α蛋白表达明显下调(P<0.01)。与模型组比较,丹酚酸B组的细胞活力以及线粒体膜电位显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH及炎症因子IL-1β释放水平明显降低(P<0.01)。丹酚酸B能够明显上调SIRT1信号通路中SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、PGC-1α蛋白表达(P<0.05,P<0.01),下调NLRP3炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白表达(P<0.05,P<0.01),且呈一定量效关系。在应用SIRT1特异性抑制剂EX527干预后,丹酚酸B抑制H_(2)O_(2)诱导的NLRP3炎症小体激活作用被明显逆转。结论丹酚酸B可能通过激活SIRT1/AMPK/PGC-1α信号通路,抑制氧化应激诱导的NLRP3炎症小体的激活,继而发挥抗心肌缺血作用。

表没食子儿茶素没食子酸酯对小鼠非酒精性脂肪肝的干预作用

本文研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的干预作用。应用高脂饲料喂养Apo E-/-小鼠建立NAFLD小鼠模型,研究EGCG对NAFLD小鼠血液和肝组织中糖脂代谢、脂肪酸氧化、氧化应激水平、肝组织结构以及AMPK/SIRT1/SREBP-1c/PPARγ信号通路相关基因表达的影响。结果表明EGCG治疗后肝组织病理学变化明显改善,小鼠体质量、肝质量、肝质量指数较模型组显著降低至110.98%、115.01%,115.64%、136.48%和104.20%、118.70%(p<0.01);血液和肝组织中糖脂代谢、脂肪酸氧化、氧化应激水平改善幅度在11.85%~86.06%之间,与模型组比较具有显著性差异(p<0.05或p<0.01);升高肝组织中AMPKα、SIRT1 mRNA及p-AMPKα、SIRT1蛋白表达幅度在13.21%~75.82%之间,降低肝组织FASN、ACC-1、SREBP-1c、SCD-1、PPARγm RNA和FASN、p-ACC-1、p-SREBP-1c、SCD-1、PPARγ蛋白表达幅度在19.59%~92.07%之间,改善p-AMPKα/AMPKα、p-ACC-1/ACC-1和p-SREBP-1c/SREBP-1c比率在39.20%~93.07%之间,与模型组比较具有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。本研究表明EGCG可通过调控AMPK/SIRT1/SREBP-1c/PPARγ信号通路相关基因的表达来改善NAFLD小鼠糖脂代谢、脂肪酸氧化和氧化应激状态。