基于“脾虚致消”理论探讨健脾清热法通过AMPK/mTORC1/SAD-A通路防治糖尿病机制研究设想

胰岛β细胞功能异常是糖尿病的发病关键,AMPK/mTORC1/SAD-A信号通路参与调控胰岛β细胞的形态和功能。脾虚致消是糖尿病发病的主要病机,健脾清热法是糖尿病的主要治法,并通过调节信号通路改善胰岛β细胞功能。mTORC1位于信号中心双向调控AMPK和SAD-A的活性,mTORC1的枢纽作用与"脾"的功能密切相关,从AMPK/mTORC1/SAD-A信号通路角度探讨胰岛β细胞功能障碍,有助于深入探寻健脾清热法改善胰岛β细胞功能的作用机制,为中医药治疗糖尿病的机制研究提供新的研究方向。

基于AMPK/mTORC1自噬通路研究二氢杨梅树皮素对损伤A549细胞的保护作用

为研究二氢杨梅树皮素(APS)对脂多糖(LPS)诱导A549细胞损伤模型的保护作用及其对AMPK/mTORC1自噬通路的影响,随机分为正常组、模型组、APS高中低浓度组(80、40、20μg/mL)。除正常组外,其余各组用30μg/mL LPS诱导8 h构建A549细胞损伤模型,APS干预24 h后,MTT法检测A549细胞存活率、荧光法检测上清液LDH漏出量、Elisa法检测上清液TNF-α含量、MDC法细胞检测自噬体形成情况、自噬双标mRFP-GFP-LC3检测细胞自噬流情况,Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。AMPK抑制剂(CC)干预验证试验,随机分为正常组、模型组、LPS+APS组、LPS+CC组、LPS+APS+CC组,APS与CC共培养时间24 h后,采用Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。结果表明,APS使LPS损伤的A549细胞存活率明显升高,LDH漏出量、TNF-α含量明显减少,细胞内自噬体明显增加,自噬溶酶体明显增加,P62蛋白、p-mTOR/mTOR表达明显下调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达明显上调;用CC抑制AMPK/mTORC1自噬通路后,APS能够明显上调P62蛋白、p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达,显著下调p-mTOR/mTOR蛋白表达。APS通过激活AMPK/mTORC1自噬通路促进自噬,增强自噬流,发挥对LPS诱导A549细胞损伤的保护作用。