AMPK/p38 MAPK通路介导黄芪多糖抑制大鼠心肌肥厚的研究

目的:探讨黄芪多糖(APS)对心肌肥厚大鼠心肌组织AMPK/p38 MAPK通路的影响。方法:健康SD大鼠60只,雌雄各30只,随机分为5组:模型组,APS低、中、高剂量(L-APS、M-APS、H-APS)组,假手术组。模型组及L-APS、M-APS、H-APS组通过开腹结扎腹主动脉的方法构造心肌肥厚大鼠模型。术后1周开始,给予相应药物干预:L-APS、M-APS、H-APS组分别灌胃给予APS 200 mg·kg/d^-1、400 mg·kg/d^-1、800 mg·kg/d^-1,假手术组及模型组则给予同等体积蒸馏水灌胃。8周后,测定大鼠心肌重量指数(HMI)、左室重量指数(LVMI);应用苏木精-伊红(HE)染色观察心肌细胞形态并测定心肌细胞直径和表面积;Western blotting分别检测心肌组织AMPK、p38 MAPK的蛋白表达量。结果:模型组大鼠HMI、LVMI、心肌细胞直径和表面积均较假手术组增加(P<0.01),心肌明显肥厚;与模型组相比,APS各剂量组HMI、LVMI、心肌细胞直径和表面积均有不同程度降低,以H-APS组最为显著(P<0.01);H-APS组心肌无明显肥厚;APS各剂量组AMPK、p38MAPK磷酸化表达水平较模型组上调,以H-APS组明显(P<0.01)。结论:APS能改善主动脉缩窄所致的大鼠心肌肥厚,AMPK/p38 MAPK通路可能介导了APS抑制心肌肥厚的保护作用。

AMPK、p38 MAPK信号通路参与调控电刺激诱导骨骼肌细胞PGC-1α基因表达

目的采用急性电刺激(acute electrical stimulation)C2C12成熟肌管细胞模型,结合使用相关信号激酶通路特异性抑制剂,探究急性电刺激所诱发的细胞内信号激酶对PGC-1α基因表达的调控作用。旨在从细胞水平揭示肌肉收缩刺激调控PGC-1α基因表达的分子机制。方法体外培养小鼠成肌细胞系C2C12细胞,采用脂质体法分别转染含小鼠PGC-1α启动子DNA全序列的质粒(p2533)及装载有能够与PGC-1α全长基因序列相结合GAL4DNA结合区域的p Bind载体,细胞在转染后分化5-6 d形成成熟肌管,5 Hz,10 V强度急性电刺激2 h后即刻收集各组细胞,进行总蛋白或双荧光素酶检测。抑制剂处理组分别采用40μM Compound C(CC,AMPK抑制剂)与10μM BIRB796(BIRB,p38抑制剂)处理细胞。结果与对照组(CON)相比,电刺激组(STIM)细胞PGC-1α启动子活性显著增高52%(P<0.05),PGC-1α辅激活转录活性显著增高35%(P<0.05),同时伴随PGC-1α蛋白由细胞质向细胞核迁移的现象。此外,与CON组相比,STIM组细胞AMPK、p38信号激酶通路磷酸化水平显著上调(P<0.05),在分别采用AMPK、p38抑制剂处理后,其磷酸化水平显著受到抑制(P<0.01)。结论急性电刺激可诱导骨骼肌细胞PGC-1α转录水平以及翻译后蛋白水平活性上调,这一作用部分是通过AMPK或p38信号通路实现的。

针灸联合自拟茶方调节肝AMPK、p38 MAPK、PPARγ信号改善脂肪肝大鼠脂质代谢紊乱的机制

目的探讨针灸联合自拟茶方改善脂肪肝大鼠脂质代谢紊乱的疗效及机制。方法以高脂饲料建立脂肪肝胰岛素抵抗模型大鼠,将大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组及治疗组,对照组及模型组不经药物干预,阳性对照组以吡格列酮进行治疗,治疗组以针灸联合自拟茶方进行治疗。检测肝脏组织匀浆三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。对各组大鼠肝脏病理、肝指数、肝酶[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)]、血脂水平[TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]、血清炎症相关因子α肿瘤坏死因子[(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、IL-6]及肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ蛋白表达进行测定。结果模型组各指标与对照组相比有明显差异,表明造模成功。治疗组肝脏细胞脂肪变性程度明显优于模型组,肝指数明显低于模型组(P<0.05),血清ALT、ALP、TC、TG、LDL-C、IL-1、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05),肝组织AMPK及PPARγ表达水平升高(P<0.05),p38MAPK表达水平降低(P<0.05)。治疗组在改善肝指数、降低血清TC、ALT、AST、IL-1、TNF-α水平及降低肝脏TC、TG水平、升高HDL-C、下调肝脏p38MAPK水平方面与阳性对照组无显著差异(P>0.05)。结论针灸联合自拟茶方可明显改善脂肪肝胰岛素抵抗模型大鼠的脂质代谢紊乱及胰岛素抵抗,该作用可能与上调肝脏AMPK及PPARγ表达水平、下调p38MAPK表达水平有关。

AMPK在姜黄素诱导CaOV3人卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)系统在姜黄素诱导CaOV3人卵巢癌细胞凋亡中的作用及姜黄素对AMPK磷酸化水平及其信号通路的影响。方法:实验分为对照组、姜黄素单独作用组、compound C(AMPK抑制剂)预给药组,SB203580(p38抑制剂)预给药组,AMPK抑制剂单独作用组以及p38抑制剂单独作用组。Western blotting法检测AMPK、p38和p53的磷酸化水平,MTT法检测细胞活力。结果:与对照组相比,姜黄素作用组的AMPK和p38磷酸化水平增加(P<0.05),与姜黄素单独作用组相比,SB203580预处理组的AMPK磷酸化水平下降(P<0.05)。姜黄素作用组的细胞活力低于对照组(P<0.05),compound C和SB203580预处理组的细胞活力高于姜黄素单独作用组(P<0.05)。与对照组相比,姜黄素作用组的p53磷酸化水平(Ser 15)增加(P<0.05),与姜黄素单独作用组相比,compound C(AMPK抑制剂)和SB203580预处理组的p53磷酸化水平(Ser 15)下降(P<0.05)。结论:姜黄素能激活CaOV3细胞的AMPK,而AMPK的激活依赖于p38。AMPK和p38调节p53的磷酸化,并介导姜黄素诱导的细胞凋亡。