饱和脂肪酸对AMPKa表达和活性的影响

目的探讨饱和脂肪酸对大鼠骨骼肌蛋白激酶(AMPKa)亚基表达及活性的影响,确定其在脂毒性发生中的地位和作用,为有效预防和控制脂毒性提供科学依据。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组10只,即对照组、高脂组和高脂加AMPKa激活剂组[二甲双胍50 mg/(kg.d),n=10]。喂养20周后,测定大鼠空腹和服糖后2 h血糖;用体外骨骼肌糖摄取试验评价大鼠骨骼肌胰岛素敏感性,Western blot法测定大鼠骨骼肌中AMPKa亚基和磷酸化AMPKa亚基蛋白水平。结果(1)与对照组比较,高脂组大鼠空腹血糖增加21.5%(P<0.05),服糖后2 h血糖增加28.3%(P<0.05),骨骼肌基础和胰岛素刺激后的糖摄取分别下降37.2%(P<0.05)和57.89%(P<0.01);(2)高脂组大鼠骨骼肌P-AMPKa和总AMPKa亚基蛋白水平分别下降46.1%(P<0.05)和79.4%(P<0.05);(3)与高脂组比较:二甲双胍显著上调AMPKa亚基的表达(P<0.05)和活性增加(P<0.05)。结论饱和脂肪酸通过降调AMPKa亚基表达和活性诱导大鼠胰岛素抵抗。

CTRP9对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞活化和增殖的影响

目的:探讨CTRP9对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞活化、增殖的影响。方法:分离培养原代大鼠心肌成纤维细胞,将其分为对照组、AngⅡ(1μmol/L)组和不同浓度(10、25、50、100、200 mg/L)CTRP9组,48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖率。细胞分为对照组、AngⅡ(1μmol/L)组、50和200 mg/L CTRP9组,48 h后采用α-SMA染色观察成纤维细胞活化情况,qRT-PCR法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、结缔组织生长因子mRNA的表达,Western blot法检测AMPKa、P70和mTOR蛋白的磷酸化情况。采用AMPKa抑制剂复合物C处理细胞,将细胞分为对照组、AngⅡ(1μmol/L)组、CTRP9+复合物C(10μmol/L)组和CTRP9(200 mg/L)组,48 h后重复上述检测。结果:AngⅡ组心肌成纤维细胞增殖率高于对照组,各CTRP9组细胞增殖率低于AngⅡ组(P<0.05)。AngⅡ组细胞α-SMA表达高于对照组,50和200 mg/L CTRP9组α-SMA表达低于AngⅡ组。AngⅡ组细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白和结缔组织生长因子mRNA的表达高于对照组,50和200 mg/L CTRP9组细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白和结缔组织生长因子mRNA的表达低于AngⅡ组(P<0.05)。AngⅡ组细胞AMPKa蛋白磷酸化水平低于对照组,P70和mTOR蛋白磷酸化水平高于对照组;200 mg/L CTRP9组AMPKa蛋白磷酸化水平高于AngⅡ组,P70和mTOR蛋白磷酸化水平低于AngⅡ组(P<0.05)。结论:CTRP9通过激活AMPKa信号通路抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞活化、增殖功能。

一氧乙酰旋覆花内酯对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞的保护性作用

目的 探讨ABL在心肌细胞肥大中的作用及其机制。方法 体外培养H9C2心肌细胞,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)构建心肌细胞肥大模型;模型组给予1μmol/L AngⅡ刺激24h、ABL处理组给予AngⅡ刺激,同时给予5μmol/L和10μmol/L ABL处理24h。采用心肌细胞肌动蛋白α-actinin染色评价心肌细胞大小,采用RT-PCR检测肥厚相关基因心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、肌球蛋白重链β(β-MHC)的表达;蛋白印迹(Western blot)法检测信号通路蛋白的表达。结果 与模型组比较,5μmol/L和10μmol/L ABL处理组心肌细胞面积明显降低(P<0.05);ANP、BNP、β-MHC肥厚相关基因表达降低(P<0.05),且其抗心肌细胞肥大呈现剂量依赖性(P<0.05)。Western blot法检测结果显示ABL处理组AMPKa磷酸化水平增高(P<0.05),而Akt、m TOR、GSK3β的磷酸化明显抑制(P<0.05);AMPKa拮抗剂Compound C可阻断ABL的心肌保护作用。结论 ABL可通过激活AMPKa信号通路,调节Akt/Mtor/GSK3β对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大发挥保护性作用。

一次性力竭运动小鼠骨骼肌AMPK活性变化对自噬水平的影响

目的:为了研究不同肌纤维中AMPK活性变化,并探讨其在运动过程中对自噬水平的影响,进一步阐明分子机制。方法:将18只C57BL/6雄性小鼠按体重和耐力分为安静组、运动组和力竭组,进行预适应后以15m/min的速度进行力竭运动,检测比目鱼肌和跖肌中p-AMPKα及自噬相关因子LC3、p62表达的变化,分析二者之间的调控作用。结果:p-AMPKα在比目鱼肌中、运动中表达升高。比目鱼肌中LC3-I呈现先升高再降低的趋势,跖肌中则未检测出LC3-I表达;而运动中LC3-II在比目鱼肌和跖肌中的表达水平均不断升高,较安静状态具有显著性差异。比目鱼肌中p62的表达随运动进程不断升高,跖肌中p62的表达则不断下降,与安静状态相比具有非常显著性差异。结论:p-AMPKα在快慢肌纤维中的表达存在差异,运动中"能量开关"启动使慢肌纤维在运动中、力竭时自噬激活,但运动强度过大的运动却抑制自噬的程度,提示能量消耗仅能在一定程度上调控自噬水平变化,最佳的自噬水平表达可能为有氧训练等低强度运动。

磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α在脂肪变性人肝癌HepG2细胞中的表达及其意义

目的观察腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)α磷酸化在Hep G2细胞脂变模型中的表达及意义。方法 Hep G2细胞予油酸和棕榈酸组成的0.3 mmol/L游离脂肪酸(FFA)诱导24 h后,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并设置对照组比较。诱导成功后,采用油红O染色观察细胞内脂滴蓄积状态;采用全自动生化仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量和细胞内甘油三酯(TG)含量;采用生物试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的变化,运用Western印迹法检测各组细胞AMPKα和磷酸化AMPKα(p AMPKα)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞内橘红色脂滴大量形成,且细胞内TG和MDA含量明显升高(P<0.01),SOD含量水平明显下降(P<0.01),p AMPKα蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论 FFA诱导的脂肪变性Hep G2细胞模型可以出现脂质代谢紊乱和氧化应激状态,其机制可能与细胞内p AMPKα蛋白的激活减少有关。

芹菜素对肥胖型小鼠脂肪组织AMPK信号通路的作用机制

目的：研究芹菜素对肥胖型db/db小鼠脂肪紊乱的作用及机制。方法：8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、芹菜素组（50 mg·kg^-1·d^-1）,雄性C57BL/6J小鼠为正常组,药物干预4周后,检测小鼠体质量、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）,总胆固醇（total cholesterol,CHO）,甘油三酯（total triglyceride,TG）,游离脂肪酸（free fatty acids,FFA）,天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）,血肌酐（serum creatinine,SCr）,血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）;脂肪组织苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE）观察脂肪细胞病理变化;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测胆固醇应答元件结合蛋白1c（sterol regulatory element-binding protein 1c,SREBP1c）,脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）,过氧化物增殖物激活受体α（peroxisome proliferator activated receptorα,PPARα）基因表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）和乙酰CoA羧化酶（acetyl-CoA carboxylase,ACC）磷酸化水平。结果：与模型组比较,芹菜素组小鼠体质量,FBG,CHO,TG,FFA明显降低（P〈0.05,P〈0.01）;HE染色脂肪细胞变小,脂质沉积减低;脂肪组织SREBP1c,FAS mRNA表达降低（P〈0.01）,p-AMPKα,p-ACC蛋白表达升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论：芹菜素可以改善db/db小鼠脂肪代谢紊乱,可能是通过上调脂肪组织AMPK,ACC磷酸化水平,下调SREBP1c,FAS mRNA表达实现。

miR-141与2型糖尿病大鼠血糖水平的关系及其作用机制研究

目的探讨miR-141与T2DM大鼠血糖水平关系及其对蛋白激酶B(Akt)/AMP依赖的蛋白激酶α(AMPKα)通路和炎症因子释放的影响.方法将SD大鼠随机分为对照组(Con)、糖尿病组(DM)、糖尿病+miR-141抑制剂组[miR-141(-)]及糖尿病+miR-141模拟物组[miR-141(+)].RT-PCR检测IRS2、miR-141、核因子κB p65(NF-κBp65)表达,Western blot检测Akt/AMPKα蛋白表达.结果与DM组比较,miR-141(-)组各时间点血糖水平、FPG、TNF-α、IL-1β及高级氧化蛋白产物(AOPPs)降低,miR-141(+)组上述指标升高(P<0.05或P<0.01).与DM组比较,miR-141(-)组胰岛细胞凋亡降低,miR-141(+)组升高(P<0.05或P<0.01).与DM组比较,miR-141(-)组miR-141、NF-κBp65 mRNA、NF-κBp65蛋白表达降低(P<0.05),IRS2 mRNA、p-Akt、p-AMPKα、IRS2升高(P<0.05或P<0.01),miR-141(+)组NF-κBp65蛋白表达升高(P<0.01).结论miR-141高表达导致T2DM大鼠血糖水平升高、IRS2降低,其作用机制可能与Akt/AMPKα通路蛋白磷酸化被抑制进而导致的炎症反应有关.