由AMPPD发光中间体光致发光模拟其化学发光光谱的机理

以3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1,2-二氧环乙烷（AMPPD）为例,系统地研究了其化学发光的中间体——间羟基苯甲酸甲酯阴离子在碱性水溶液中的光致发光性质。通过对其碱性水溶液进行稳态光谱、1HNMR共振谱、超快速时间分辨光谱的测量,我们成功地在获得了不断水解的AMPPD中间体的碱性水溶液的光致发光光谱,并将其与AMPPD化学发光光谱进行比对,得出了其光致发光光谱与化学发光光谱在误差范围内峰位基本一致的结论。该研究结果对正确地认识AMPPD在碱性水溶液中化学发光的机理,并进一步合理地设计高效的化学发光体系具有重要意义。

PCR配合Dig－AMPPD探针检测和分析钩端螺旋体基因

作者以１４份早期钩体病人血清进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），并以地高辛－硷性磷酸酶发光体（Ｄｉｇ－ＡＭＰＰＤ）同源探针行分子杂交，全部血清样品均获得阳性结果。此法敏感、特异、易行，可明显提高钩体病诊断水平。以扩增的基因片段与１６株Ｙａｓｕｄａ基因组钩体ＤＮＡ限制性谱行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，与其中６株存在同源单拷贝序列，它们皆为我国主要流行和致病的优势菌型。用电脑核苷酸测定仪分析该基因的核苷酸序列、限制性位点和ＯＲＦ等并取得了重要资料。

人血清中cTnI的化学发光酶免疫分析研究──实验条件的优化

采用高效化学发光试剂3-（2＇-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3＇-羟基）苯-1，2-二氧杂环丁烷磷酸（AMPPD）作为检测底物，并将传统的ELISA两步双抗夹心法改为一步法，得到了高灵敏测定人血清中心肌肌钙蛋白I（cTnI）的化学发光酶免疫分析优化条件．采用单因素变化法和方阵滴定法得到的最佳实验条件为：捕获抗体包被浓度为10．00μg/ml，以pH=7．0的PBS作为免疫反应缓冲底液，以含质量分数为1．0％的BSApH=9．6的碳酸盐溶液缓冲液，于4℃封闭过夜，生物素-检测抗体（Biotin—IsG2）以及碱性磷酸酶．亲和素（AIJP—Avidin）结合物均采用1：2000稀释度，免疫反应条件为37℃，孵育时间60min，以去离子水作为洗涤剂，以1：100稀释的AMPPD作为发光反应底物，发光反应时间10min（37℃）．检出限为0．02ng／mL，比现行ELISA法灵敏度提高一个数量级；测定周期约75min，比两步法ELISA快得多；线性范围（0．04-36．20ng／mL）比ELISA法扩宽了两个数量级；加标回收率97．5％-102．8％，对标准样品的测定结果与用ELISA法的测定结果吻合；重复性好，3个样品批内变异系数均小于8．5％（n=12）．

一种超敏增强型酶促化学发光体系

目的建立一套高灵敏度，且可广泛应用于临床检测的化学发光免疫检测平台。方法采用碱性磷酸酶标记和一种增强型发光底物配方，极大地提升化学发光免疫检测的灵敏度，并通过典型的应用实例进行可行性研究。结果增强型[3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧环乙烷]底物液配方可提升检测的信噪比。选择要求高灵敏度的促甲状腺激素（TSH）、前列腺特异性抗原（TPSA）、肌钙蛋白（cTnI）和HIVp24抗原项目进行了免疫试剂开发的可行性研究，所选项目都具备与国际主流厂家可比的检测低限及特异性。结论迈瑞自主研发的增强型酶促化学发光增强技术可以保证整个系统的高灵敏度及临床检测结果的一致性，实现多种临床免疫检测项目的功能需求。