妊娠期机体细胞免疫功能状态的探讨——外周血ANAE阳性淋巴细胞的观察

妊娠时,母体对胎儿为什么不发生同种异体移植物的排斥,我们采用了酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)的方法标记T淋巴细胞,对母体细胞免疫功能状态进行探讨。观察83例正常孕妇并分早、中、晚三期和23例正常未孕妇女作对照。结果表明妊娠各期淋巴细胞百分率均下降,与未妊娠组有非常显著性差异。妊娠各期淋巴细胞ANAE阳性率均下降,与未妊娠组有非常显著性差异。到妊娠晚期淋巴细胞ANAE阳性率又有回升,与早、中期有显著性差异。此结果支持妊娠期母体细胞免疫机能降低的学说。

“长白新喹”抗癌药对ANAE阳性淋巴细胞的影响

为了研究“长白新喹”抗癌药对ANAE阳性淋巴细胞的影响,本文采用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)反应标记淋巴细胞的细胞化学方法对100例正常瑞士小白鼠尾血的淋巴细胞进行了ANAE阳性百分率测定和分型的工作。结果表明:ANAE阳性者为T淋巴细胞,阴性者为B淋巴细胞。阳性率平均值为62.5±110%。随机观察其中50例,其ANAE阳性率为63.5±0.1%,其中点状颗粒型的淋巴细胞百分率为55.5±0.9%(3粒以下者25.3±0.8%;4-8粒者24.6±1%;9粒以上者4.6±0.3%),而弥散型为8.5±0.3%。在研究“长白新喹”对小白鼠外周血ANAE阳性淋巴细胞影响时,实验组与对照组均接种S_(180)腹水癌细胞。于接种后第3天,实验组用“长白新喹”0.8 mg/0.2 ml腹腔注射,连续7天。两组均有实验前后作为自身对照,实验结果表明:在两组动物之间以及实验前后的自身对照,血液内ANAE阳性淋巴细胞及弥散型淋巴细胞均明显增多(P<0.05)。根据上述结果,本文讨论了抗癌药“长白新喹”对细胞免疫的影响。

健康人不同年龄外周血ANAE阳性淋巴细胞的正常值

本文采用简便易行的ANAE染色、观察243例健康人不同年令组外周血T淋巴细胞ANAE活性的正常值,并注意了酶反应物的形式。结果表明不同年令组间ANAE活性是不同的,从新生儿开始随年令增加ANAE阳性率逐渐上升,10岁达最高峰,30岁以后随年令增加,ANAE阳性率逐渐下降。60岁以后更低。所以在考虑机体细胞免疫功能状态时,应注意年令条件。另外酶型也有不同表现形式,可能和T细胞的亚群成熟程度及生理条件变化有关,这一问题还需进一步探讨。

乳头果总甙对免疫受抑小鼠ANAE阳性淋巴细胞的保护作用

动态观察的实验表明:乳头果组小鼠的淋巴细胞DNA及ANAE阳性淋巴细胞值均较仅注射环磷酰胺(CPA)组者下降较少(P<0.005,P<0.01),其下降的最低点分别在第17日和第21日,而CPA组下降的最低点在第17日。溶剂组的结果与CPA组相似。CPA组DTH下降明显(P<0.002),而乳头果总甙可使恢复到正常水平(P>0.05),可见本品不仅对受CPA抑制的淋巴细胞DNA、ANAE阳性淋巴细胞有保护作用而且对其DTH功能也有一定的保护作用。

中药猪苓多糖对小鼠血液ANAE阳性淋巴细胞的影响

本实验研究了猪苓多糖对正常小鼠血液ANAE性淋巴细胞的影响。实验动物每天腹腔注射猪苓多糖2mg/0.2ml,连续七天,实验前、后取血涂片,用α-醋酸萘脂酶法,标记ANAE阳性T淋巴细胞,测定其百分率。实验结果表明:猪苓多糖对小鼠血液ANAE阳性T淋巴细胞总数无影响,对颗粒型阳性淋巴细胞有减少,而对分散型有显著增加现象。根据上述结果,本文讨论了猪苓多糖对细胞免疫的作用。

乙肝患者ANAE阳性淋巴细胞的变化

近年来对乙型肝炎发病原理研究较多,多数学者认为细胞免疫在乙肝的发病中起重要作用,而非特异性细胞免疫功能在各型肝炎均有不同程度的下降。为此我们应用酸性2-醋酸萘脂酶(ANAE)染色法,对109名乙肝患者的外周血T淋巴细胞进行了检测,探讨各型乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞的变化,结果如下。

TKIs联合化疗治疗成人Ph阳性急性淋巴细胞白血病的疗效及预后分析

目的:探讨成人费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia,Ph+ALL)患者化疗及酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)联合化疗作为首次诱导治疗的疗效及预后。方法:回顾性分析2012年1月至2023年10月就诊于宁夏医科大学总医院的60例成人Ph+ALL患者临床特点、生物学特征及完全缓解情况,分析其疗效及预后。结果:首次诱导治疗后达到完全缓解率(complete response,CR)的患者有43例,占71.67%(43/60),其中单纯化疗组7例,占41.18%(7/17),TKI+化疗组CR率为36例,占83.72%(36/43),且两组差异具有统计学意义(P=0.003)。单纯化疗组患者的2年总生存(overall survival,OS)率为28.2%,TKI联合化疗组患者的2年OS率为56%,差异具有统计学意义(P=0.041)。移植组与非移植组患者2年OS率76.9%vs. 51.9%,5年OS率56.1%vs. 19.4%,(P=0.003);2年无进展生存(progression-free survival,PFS)率38.5%vs. 12.1%(P=0.018),二者差异均具有统计学意义。单因素预后分析示,是否选择TKI、初次诱导治疗后是否获得CR和是否骨髓移植对OS预后差异均具有统计学意义(P<0.05);白细胞计数、是否选择TKI对患者无复发生存(relapse-free survival,RFS)率差异具有统计学意义(P<0.05)。Cox多因素预后分析示,诱导治疗后获得CR、后续接受造血干细胞移植为患者OS的独立预后因素。结论:Ph+ALL诱导治疗方案中,TKI+化疗诱导治疗方案能够实现早缓解,高缓解率,总生存期方面优于单纯化疗。缓解后进行骨髓造血干细胞移植治疗Ph+ALL预后良好。

奥雷巴替尼治疗复发伴T315I突变费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病的疗效及安全性(附5例)

目的:探索奥雷巴替尼治疗复发伴T315I突变费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Philadelphia chromosome positive acute lymphoblastic leukemia,Ph^(+)ALL)患者的疗效及安全性。方法:收集该院2021年12月至2023年05月确诊复发伴T315I突变Ph^(+)ALL患者的临床资料,分析复发患者应用奥雷巴替尼后的疗效及安全性。结果:5例复发伴T315I突变Ph^(+)ALL患者应用奥雷巴替尼后,5例患者均达CR,其中3例患者达CMR、MRD(-),2例患者达CR、MRD(+)。所有患者从开始口服奥雷巴替尼到评估达CR的中位时间为37(26~58)天,复发后再次获得CR,到疾病进展或死亡或随访截止的中位PFS时间为92(47~320)天,从患者开始口服奥雷巴替尼到患者死亡或随访截止的中位OS时间为208(115~370)天。截止随访时间,2例患者处于无病存活状态、1例患者因肺部严重感染死亡、2例患者因疾病再次复发死亡。不良反应以骨髓抑制、肝功能、肾功能异常为主,未发生使患者中断治疗的不良反应。结论:奥雷巴替尼治疗伴T315I突变或复合突变的Ph^(+)ALL患者治疗效果良好且不良反应尚可耐受。

高铜对雏鸡外周血T-淋巴细胞ANAE阳性率的影响

选用1日龄艾维茵健康肉鸡420只,随机分为7组,分别喂以对照日粮(Cu 11 mg/kg)和高铜日粮(Cu 100mg/kg),高铜Ⅰ组,Cu 200 mg/kg,高铜Ⅱ组;Cu 300 mg/kg,高铜Ⅲ组;Cu 400 mg/kg,高铜Ⅳ组;Cu 500 mg/kg,高铜Ⅴ组;Cu 600 mg/kg,高铜Ⅵ组)6周,观察日粮铜添加水平对雏鸡外周血T-淋巴细胞ANAE阳性率的影响。与对照组比较,高铜Ⅰ、Ⅱ组雏鸡外周血T-淋巴细胞ANAE阳性率增加,但差异不显著;高铜Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组雏鸡外周血T-淋巴细胞ANAE阳性率降低,且与日粮含铜量呈负相关,同时胸腺淋巴细胞减少,凋亡细胞比例增高。结果表明,与对照组比较,日粮铜含量100～200 mg/kg对雏鸡外周血中T-淋巴细胞ANAE阳性率有促进作用,但差异不显著;日粮铜含量300～600 mg/kg程度不同地降低了T-淋巴细胞ANAE阳性率,细胞免疫功能受损。

白细胞介素-38对乳腺癌患者CD8^(+)T淋巴细胞功能的影响

目的探讨白细胞介素-38(IL-38)在乳腺癌患者中的表达及其对CD8^(+)T细胞功能的调控作用。方法纳入2020年7月—2022年9月在新乡医学院第一附属医院就诊的44例乳腺癌患者、25例乳腺良性肿瘤患者和20例对照者。分离所有受试者的血浆和外周血单个核细胞,分离乳腺癌患者肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞,纯化CD8^(+)T细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-38蛋白水平,应用实时定量PCR检测组织IL-38 mRNA相对表达量。使用重组人IL-38刺激乳腺癌患者外周血和肿瘤组织分离的CD8^(+)T细胞,建立CD8^(+)T细胞与乳腺癌细胞系MCF-7的共培养系统,通过测定乳酸脱氢酶水平计算靶细胞死亡比例,ELISA法检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的免疫检查点分子表达。结果乳腺癌患者血浆IL-38水平(74.23±19.88 pg/mL)高于乳腺良性肿瘤患者(62.87±16.27 pg/mL,P=0.018)和对照者(61.77±12.75 pg/mL,P=0.013)。乳腺癌患者肿瘤组织中IL-38 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(1.57±0.22 vs.1.00±0.18,P<0.001)。外周血和肿瘤浸润CD8^(+)T细胞诱导靶细胞死亡比例、穿孔素和颗粒酶B分泌在直接接触共培养组中的水平高于间接接触共培养组(P<0.05),但干扰素-γ和TNF-α分泌水平在直接接触共培养组和间接接触共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。在直接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平低于无刺激组(P<0.05)。在间接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平亦低于无刺激组(P<0.05),但穿孔素和颗粒酶B水平在间接接触共培养组内的IL-38刺激组和无刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。CD8^(+)T细胞中免疫检查点分子表达水平在无刺激组和IL-38刺激组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者中高表达的IL-38可能参与诱导CD8^(+)T细胞功能衰竭。

鸭病毒性肝炎对雏鸭外周血淋巴细胞转化及ANAE阳性率的影响

从广东部分地区采集鸭病毒性肝炎病毒 ,经半数致死量测定确定病毒毒力。取 1d无DHN病史、没有注射过DVH疫苗的健康仙湖三号鸭 2 0 0只 ,经 1周适应饲养后 ,随机分为对照组 (C组 ) ,弱毒株组 (S组 ) ,中毒株组 (M组 )以及强毒株组 (H组 ) 4个组 ,每组 5 0只。试验组背部肌肉分别注射 0 .3mL弱毒株、中毒株、强毒株的稀释液 ,对照组背部分点注射等量稀释液 ,隔离饲养。在攻毒后 1,3,5 ,7d采血 ,分别用形态学方法和酸性 -α-醋酸萘酯酶染色法 (ANAE)测定鸭外周血淋巴细胞转化率及ANAE阳性率。结果表明 :在整个试验期内 ,中毒组和强毒组的淋巴细胞转化率显著 (或极显著 )下降 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,弱毒组仅在攻毒后 5d ,淋巴细胞转化率显著下降 (P <0 .0 5 ) ,其它时间与对照组相比没有显著差异 ;这些变化与病毒毒力有关 ;试验组在 3,5 ,7d测定时 ,与对照组相比 ,淋巴细胞转化升高 ,差异显著或极显著 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,这些变化与病毒毒力无关。提示鸭病毒性肝炎病毒能抑制淋巴细胞的转化 ,这种抑制作用与毒力有关 ;攻毒组ANAE阳性率升高 ,不受病毒毒力强弱的影响。这些结果的不一致性 ,说明机体受到抗原侵袭时 。

淋巴细胞ANAE显示中孵育液pH与ANAE阳性率的关系

当前绝大多数人用酸性α-醋酸萘脂酶(ANAE)鉴定T淋巴细胞都把孵育液的pH定为5.8~6.4,但是各家的外周血淋巴细胞ANAE阳性率却不尽一致。Radzun等对人外周血细胞的ANAE作了等电聚焦研究,肯定B和T细胞都有ANAE,而且B细胞ANAE的全部和T细胞的大部分,其最适pH同是5.9~6.4。

维奈克拉在急性淋巴细胞白血病中的应用和研究进展

维奈克拉是全球首个获批的高选择性口服B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)蛋白抑制剂,具有高亲和性的靶向肿瘤细胞凋亡的独特作用机制,目前已被美国食品药品监督管理局批准应用于治疗慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)/小淋巴细胞白血病(small lymphocytic leukemia,SLL)以及不适合接受强诱导化疗或年龄>75岁的新诊断急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)。近年来,维奈克拉在治疗急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)上也显示出其独特的优越性。对于常规治疗方案疗效不佳的特殊亚型ALL,如急性早期前体T淋巴细胞白血病(early T-cell precursor acute lymphoblastic leukemia,ETP-ALL)和ETP-ALL之外的其他复发难治性ALL(relapse/refractory ALL,R/R ALL)经维奈克拉联合化疗或其他靶向药物相较于传统疗法可获得更高的完全缓解(complete response,CR)率和长期生存率,且在费城染色体阳性的ALL(Philadelphia-chromosome positive acute lymphoblastic leukemia,Ph^(+)ALL)中联合酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)也取得了良好的效果,表明维奈克拉在ALL治疗上具有较大前景。本文就维奈克拉在ALL治疗领域的作用及研究进展展开综述。

人淋巴细胞ANAE反应的阳性率和反应模型的观察及其临床应用的探讨

本文用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)反应标记淋巴细胞的细胞化学方法,对80例正常人外周血淋巴细胞的ANAE阳性率进行了观察,见到正常人外周血淋巴细胞的ANAE阳性率为74.1±7.3%,其中ANAE反应为“点状颗粒型”的淋巴细胞百分率为61.5±7.3%,“分散颗粒型”的淋巴细胞百分率为12.6±3.5%。同时我们对20例癌症患者(胃癌10例,乳腺癌5例,直肠癌5例)进行了观察,发现三组癌症患者外周血的淋巴细胞ANAE阳性率都显著地低于正常人(P<0.01),“点状颗粒型”淋巴细胞的百分率也显著地低于正常人(P<0.01),但是,“分散颗粒型”淋巴细胞的百分率和正常人比较没有差别。

髓母细胞瘤分子亚型中CD8+T淋巴细胞浸润的临床病理特点

目的:研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)各个分子亚型中的浸润特点,分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系,以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况,为进一步探索MB中CD8+T细胞浸润可能的调节机制提供临床病理依据。方法:筛选2012—2019年间来自多所医学中心、具有完整临床资料的MB患者共48例(4个分子亚型各12例),利用NanoString PanCancer IO360 TM基因表达检测平台对48例MB患者的肿瘤标本进行转录组学分析,对患者肿瘤组织的石蜡切片进行CD8免疫组织化学染色分析,验证各亚型MB中CD8+T细胞数量的差异。通过数据库生物信息学分析,探讨CD8+T细胞浸润与患者预后的关系及各种趋化因子在各亚型MB中的表达差异,并采用双重免疫荧光染色验证MB中CD8+T细胞表面CXCR3受体的表达情况,探讨CD8+T细胞浸润至肿瘤内的可能分子机制。结果:MB的WNT亚型中的CD8+T细胞特征指数相对较高,提示WNT亚型中的CD8+T细胞数量显著高于其他三个亚型,这一现象通过CD8免疫组织化学染色方法以及R2在线数据分析平台对美国基因表达数据库Gene Expression Omnibus(GEO)进行数据挖掘得到了证实,且CD8+T细胞增多与患者的生存期呈正相关。数据库分析显示,CXCL11在WNT亚型MB中的表达量明显高于其他三个亚型。免疫荧光染色结果显示,CD8+T细胞表面存在CXCL11的受体CXCR3,提示CD8+T细胞可能通过表面受体CXCR3受CXCL11趋化至MB的微环境中。结论:CD8+T细胞在WNT亚型MB中的浸润相对多于其他亚型,其机制可能与CXCL11-CXCR3趋化因子系统的激活相关,且肿瘤内CD8+T细胞浸润较多的患者预后较好,此结果可能为MB中CD8+T细胞浸润调节机制提供有益的临床病理依据,为未来MB的免疫治疗提供新的潜在治疗靶点。

肿瘤浸润性淋巴细胞在不同分子分型乳腺癌患者预后中的预测价值

肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)是肿瘤微环境的重要组成部分,在乳腺癌的抗肿瘤免疫应答中发挥着重要的作用。乳腺癌根据基因表达分析或免疫组织化学标记物雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)的表达可以分为三阴性乳腺癌(TNBC)、HER2阳性乳腺癌、Luminal型乳腺癌,TILs对不同亚型的乳腺癌预后的预测价值不同。TILs对乳腺癌预后的不同不仅是因为TILs的浸润水平不同,也是因为TILs中同时存在有抗肿瘤和促肿瘤的亚群,不同患者中TILs的各种亚群也存在差异。

CD8+T淋巴细胞在非酒精性脂肪性肝炎中的作用

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一种与代谢综合征密切相关的肝脏疾病,其发病机制包括胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱、炎症反应等方面。本文简述了CD8+T淋巴细胞通过Fas-Fas配体(FasL)信号通路、释放穿孔素和颗粒酶以及分泌肿瘤坏死因子(TNF)α等细胞因子三种途径发挥细胞毒性作用特异性杀伤病毒及肿瘤靶细胞参与免疫调节;同时总结了CD8+T淋巴细胞促进巨噬细胞招募且与自然杀伤T淋巴细胞协同参与脂肪组织炎症发展,并通过自身攻击及表观遗传学机制导致肝损伤,促进NASH发病。由此得知CD8+T淋巴细胞可能成为NASH新的治疗靶点,未来继续深入研究CD8+T淋巴细胞在NASH中影响发病进程的具体机制有利于进一步指导临床治疗。

全血淋巴细胞EB病毒核酸定量检测在儿童EB病毒感染诊断中的应用

目的探究分析全血淋巴细胞EB病毒核酸定量检测在儿童EB病毒感染诊断中的应用。方法选取于2022年1月至2022年12月疑似儿童EB病毒感染共101例作为本次研究对象。对疑似EB病毒感染的儿童采用荧光定量法明确全血淋巴细胞,同时采用酶联免疫吸附试验,明确EBV-CA-IgM抗体水平,了解不同类型儿童上述指标之中所存在的差异。结果疑似EB病毒感染患儿全血淋巴细胞EBV-DNA检出阳性率高于EBV-CA-IgM抗体阳性率(P<0.05)。结论EBV感染的儿童可在实际落实早期诊断工作的过程中,引导疑似EB病毒感染的儿童开展全血淋巴细胞EBV-DNA检测,进而协助医师更好地掌握患儿的实际病情状态,为后续治疗方案的制订提供有力的数据支持。

曲妥珠单抗联合化疗对HER-2阳性胃癌患者T淋巴细胞亚群及肿瘤标志物的影响

目的 探讨曲妥珠单抗联合化疗对HER-2阳性胃癌患者T淋巴细胞亚群及血清肿瘤标志物水平的影响。方法 收集我院2019年1月至2020年12月收治的HER-2阳性晚期胃癌患者分为对照组(n=49)和治疗组(n=49)。对照组接受SOX方案,治疗组接受SOX方案联合曲妥珠单抗。治疗2个周期后评价疗效作为主要研究终点。次要终点为Karnofsky(KPS)功能状态评分、1年生存率、毒副反应发生率,采用Semi-Bio特异性细胞检测法检测CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)细胞含量,并计算CD4^(+)/CD8^(+),电化学发光免疫法检测血清肿瘤标志物,包括糖类抗原(CA724)、糖类抗原199(CA199)及癌胚抗原(CEA)。结果 2个周期后,治疗组疾病控制率为91.8%,显著高于对照组65.3%(P<0.05)。治疗后两组患者血清中CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比值及KPS评分均显著高于治疗前,血清CA199、CEA、CA724水平显著低于治疗前(P<0.05);治疗组CD8^(+)低于治疗前(P<0.05);治疗后治疗组血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比值及KPS评分均显著高于对照组,血清CEA水平显著低于对照组(P<0.05)。对照组和治疗组1年生存率分别为46.94%(23/49)和79.59%(39/49),差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 曲妥珠单抗联合化疗可改善HER-2阳性胃癌患者免疫功能,抑制肿瘤标志物水平。