LncRNA-ANCR对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的:探讨骨肉瘤细胞中LncRNA-ANCR的表达情况以及LncRNA-ANCR对骨肉瘤细胞生物学的影响。方法:采用荧光定量PCR检测实验各组细胞中LncRNA-ANCR的表达水平,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Transwell小室法检测细胞的侵袭、迁移能力。结果:MG-63和UMR-106骨肉瘤细胞LncRNA-ANCR的表达水平最高,选择其进行后续实验研究;与WT组相比较,Mock组、NC组细胞中LncRNA-ANCR的表达水平、转染后细胞的增殖率、细胞凋亡率、侵袭细胞和迁移数均无明显变化(P>0.05);与WT组相比较,siRNA组细胞中LncRNA-ANCR的表达水平、转染后增殖率、细胞的侵袭和迁移数显著下降(P<0.05),细胞的凋亡率明显上升(P<0.05)。结论:LncRNA-ANCR可促进MG-63和UMR-106骨肉瘤细胞的增殖、侵袭以及转移,抑制细胞的凋亡。

老年结肠癌患者外周血单个核细胞LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1表达及其与病理特征、预后的关系

目的探讨老年结肠癌患者外周血单个核细胞长链非编码RNA(LncRNA)ANCR和LncRNA核富集转录体(NEAT)1表达及与其病理特征及预后关系。方法收集老年结肠癌患者83例的结肠癌组织及癌旁组织。取癌组织与癌旁组织置于肝素钠抗凝管中,充分混合均匀备用,采用Ficoll淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞(PBMC)。采用实时荧光定量定量PCR(qRT-PCR)测定外周血单个核细胞LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1表达。随访至2022年6月30日或死亡。主要采用门诊复查、电话及住院检查等随访方式。记录患者总生存期(OS)。结果癌组织LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1相对表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。不同性别、年龄、体重指数、肿瘤直径、分化程度LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1相对表达量无明显差异(P>0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1相对表达量显著高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);淋巴结转移LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1相对表达量显著高于无淋巴结转移(P<0.05)。随访时间13~52个月,平均(34.87±9.75)个月。LncRNA ANCR≤3.27患者总体生存情况显著优于LncRNA ANCR>3.27患者(P<0.05)。LncRNA NEAT1≤2.19患者总体生存情况显著优于LncRNA NEAT1>2.19患者(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、LncRNA ANCR高表达和LncRNA NEAT1高表达为影响结肠癌患者预后独立危险因素。结论老年结肠癌患PBMC LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1高表达,且与预后密切相关,LncRNA ANCR和LncRNA NEAT1高表达为影响结肠癌患者预后独立危险因素。

血清LncRNA ANCR、LncRNA LINC00355与非小细胞肺癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨血清LncRNA抗分化非编码RNA(LncRNA ANCR)、长链非编码LINC00355(LncRNA LINC00355)表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征及预后生存的关系。方法选择104例NSCLC患者及65例体检健康人员,并分别作为NSCLC组和对照组,RT-PCR检测两组血清ANCR、LINC00355表达水平,并分析其与NSCLC患者临床病理特征及预后的关系。结果NSCLC组血清ANCR、LINC00355表达水平均高于对照组(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移患者血清ANCR、LINC00355表达分别高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血清ANCR与LINC00355表达呈正相关(γ=0.467,P<0.001);随访1年,104例NSCLC患者死亡32例(30.8%),其中ANCR高表达组、LINC00355高表达组1年总生存期(OS)分别低于ANCR低表达组、LINC00355低表达组(P<0.05)。结论血清LncRNA ANCR、LncRNA LINC00355在NSCLC中均表达上调,且与患者临床分期及淋巴结转移有关,能在一定程度上反映患者预后。

LncRNA-ANCR介导的组蛋白甲基化酶EZH2对结直肠癌侵袭与转移的调控

目的探讨lnc RNA-ANCR与组蛋白甲基转移酶EZH2的表达及其与结直肠癌细胞侵袭与转移的关系。方法培养结肠癌SW620细胞系,转染ANCR-siRNA至细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ANCR和EZH2表达,Western blot检测EZH2蛋白表达水平,采用RNA pull-down和免疫共沉淀的方法检测ANCR与EZH2的相互作用关系,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移能力。结果结肠癌SW620细胞中ANCR和EZH2的表达均显著高于正常结肠上皮细胞(P<0.05)。转染ANCR-siRNA的SW620细胞中ANCR的表达较转染阴性对照质粒的SW620细胞显著降低,且EZH2的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。RNA pull-down与免疫共沉淀的结果显示ANCR可与EZH2特异性结合。而Transwell实验和划痕实验显示转染ANCR-siRNA的SW620细胞的侵袭和迁移能力均显著低于转染阴性对照质粒的SW620细胞(P<0.05)。结论结直肠癌细胞中ANCR与EZH2的表达均上调,ANCR可能通过特异性结合EZH2调节结直肠癌细胞的侵袭和转移。

lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均<0.05),成骨染色更为显著(P均<0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均<0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均<0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P>0.05)。结论lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。

lncRNA ANCR对直肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响及机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)抗分化非编码RNA(ANCR)对结直肠癌(CRC)细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法收集50例CRC患者的癌组织和癌旁组织,通过RT-qPCR检测组织中ANCR和叉头框蛋白O1(FOXO1)的表达水平并进行Pearson相关性分析。利用RNA拉下和RNA免疫沉淀实验(RIP)确认ANCR是否可与FOXO1相互作用。将经过慢病毒包装的ANCR和FOXO1慢病毒质粒转染至人CRC细胞系SW480细胞中,细胞分为6组:对照组(未转染),NC组(转染慢病毒质粒空载),ANCR组(转染pHRi-ANCR),sh-ANCR组(转染pHRi-sh-ANCR),FOXO1组(pHRi-FOXO1),sh-ANCR+sh-FOXO1组(同时转染pHRi-sh-ANCR和pHRi-sh-FOXO1)。RT-qPCR检测过表达和抑制ANCR后FOXO1的表达水平,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)标记技术和流式细胞术分别检测各组细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL2相关蛋白X(BAX)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及人P27蛋白(P27)的表达情况。结果与癌旁组织相比,CRC组织中ANCR表达明显增加,FOXO1表达明显减少(P<0.01),二者表达水平负相关(P<0.01)。ANCR能够结合并抑制FOXO1表达。与NC组相比,sh-ANCR组和FOXO1组细胞增殖数减少,细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡数增多,BAX和P27增多,BCL-2和cyclin D1减少(P<0.05)。与sh-ANCR组相比,sh-ANCR+sh-FOXO1组上述指标得到逆转(P<0.05)。结论lncRNA ANCR在CRC中表达升高并通过调控FOXO1的表达调控CRC细胞的细胞增殖和凋亡。

LncRNA-ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖迁移的作用机制

目的探讨LncRNA-ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法选取人胃癌细胞株,随机分为胃癌组(GC组)、ANCR-siRNA组(siRNA组)、LncRNA-ANCR组(ANCR组)3组,同时选取正常胃粘膜上皮细胞设为正常胃细胞组。GC组:单纯胃癌细胞株;siRNA组:将ANCR-siRNA转染到胃癌细胞中;ANCR组:将LncRNA-ANCR转染到胃癌细胞中。通过TUNEL法、Transwell、cck-8法、Westernblot法、RT-PCR法分析3组胃癌细胞增殖情况,PI3K、AKT蛋白表达量,细胞凋亡情况,细胞侵袭能力,PI3K、AKTmRNA的表达量的差异性来探究LncRNA-ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖迁移的作用机制。结果GC组LncRNA-ANCR蛋白含量最高,正常胃细胞组LncRNA-ANCR蛋白含量最低(P<0.05);ANCR组胃癌细胞侵袭能力强,显微镜下细胞数量多,siRNA组胃癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱(P<0.05),GC组与siRNA组相比较胃癌细胞数量明显增多,整体侵袭能力明显增强(P<0.05);GC组和siRNA组、ANCR组OD值相比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ANCR组胃癌细胞的增殖情况明显高于GC组,而GC组明显高于siRNA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经TUNEL染色,siRNA组胃癌细胞凋亡数量最多,ANCR组胃癌细胞凋亡较少(P<0.05),ANCR组和GC组与siRNA组相比较凋亡率明显下降(P<0.05)。蛋白免疫印迹法分析显示,siRNA组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最低,ANCR组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最高,3组相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA-ANCR能激活PI3K及AKT蛋白的表达,升高细胞的侵袭和增殖能力,促进胃癌细胞生长,加快病情的发展。

lncRNA ANCR调控miR-497-5p对胃癌细胞血管管腔形成及凋亡的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)ANCR调控miR-497-5p对胃癌细胞血管管腔形成、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法取MGC803胃癌细胞将其分为胃癌细胞(GC)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR-NC(AN)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR过表达质粒(AM)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR siRNA(AI)组、胃癌细胞+miR-497-5p-NC(MN)组、胃癌细胞+miR-497-5p siRNA(MI)组、胃癌细胞+miR-497-5p mimics(MM)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR siRNA+miR-497-5p mimics(IM)组,管腔形成实验观察细胞血管管腔形成,PI染色法检测细胞凋亡,免疫印迹法检测PI3K和AKT蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证lncRNA ANCR和miR-497-5p的相互作用。结果与AN组、MN组相比,AM组、MI组凋亡率明显降低(P<0.05),血管管腔形成数量、PI3K和AKT蛋白表达明显升高(P<0.05);与AM组、MI组相比,AI组、MM组凋亡率明显升高(P<0.05),血管管腔形成数量、PI3K和AKT蛋白表达明显降低(P<0.05);与AI组、MM组相比,IM组凋亡率明显升高(P<0.05),血管管腔形成数量、PI3K和AKT蛋白表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示,转染lncRNA ANCR后可显著降低miR-497-5p-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无影响(P>0.05)。结论抑制lncRNA ANCR可有效抑制胃癌细胞血管管腔形成,促进细胞凋亡,并抑制PI3K和AKT信号通路表达,其作用机制可能与靶向激活miR-497-5p有关。

长链非编码RNA ANCR在肺癌中的表达和作用

目的探讨长链非编码RNA ANCR(LncRNA ANCR)在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞增殖和凋亡的作用。方法收集50例肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织中LncRNA ANCR和叉头框蛋白O1(FOXO1)mRNA的表达水平。将A549细胞分为第1转染组(转染慢病毒阴性对照质粒)、第2转染组(转染pHRi-ANCR)、第3转染组(转染pHRi-sh-ANCR)、第4转染组(转染pHRi-FOXO1)和第5转染组(同时转染pHRi-sh-ANCR和pHRi-sh-FOXO1),未处理细胞为空白组。用RNA pull-down和RIP实验检测ANCR与FOXO1的相互作用。用RT-qPCR检测ANCR和FOXO1的表达水平,用EdU标记技术和流式细胞术分别检测A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果肺癌组织和癌旁组织中LncRNA ANCR的表达分别为2.78±1.36,1.33±0.51,FOXO1 mRNA的表达为1.28±0.57,3.03±0.72。第1,3,4,5转染组细胞增殖比例分别为(47.90±2.36)%,(27.93±2.37)%,(29.93±0.64)%,(74.27±4.06)%,阻滞于G0/G1期细胞比例分别为(37.43±1.96)%,(64.20±4.05)%,(65.47±1.86)%,(24.93±1.38)%,细胞凋亡比例分别为(8.93±0.53)%,(17.81±1.42)%,(16.18±1.07)%,(7.78±0.55)%。肺癌组织与癌旁组织相比、第3,4转染组与第1转染组相比、第5转染组与第3转染组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论LncRNA ANCR在肺癌中表达升高并通过抑制FOXO1的表达调控肺癌细胞的细胞增殖和凋亡。

LncRNA ANCR在胃癌患者肿瘤组织中表达的临床意义及其生物学效应研究

目的探究LncRNA抗分化非编码RNA(anti-differetiation non-coding RNA,ANCR)在胃癌患者肿瘤组织中表达的临床意义及其对细胞的生物学效应。方法收集宁波医疗中心李惠利医院东部院区2016年9月至2018年6月胃癌组织及相应癌旁组织标本各72例,同时培养胃癌细胞HGC-27,慢病毒转染ANCR cDNA全长载体于HGC-27细胞中作为实验组,并转染空白载体作为对照组;实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测组织或细胞中ANCR、转录因子Oct4及Sox2 mRNA的表达水平,免疫印迹实验(western blot)检测细胞中Oct4及Sox2蛋白表达水平,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移能力。结果胃癌组织及癌旁组织中ANCR表达分别为0.013(0.006,0.025)及0.041(0.011,0.136),胃癌组织中ANCR表达显著高于癌旁组织(P<0.01),且高表达ANCR的患者TNM分期更高及细胞分化程度更低(χ^(2)=7.414、8.236,P<0.05)。对照组及实验组细胞ANCR mRNA表达分别为(1.000±0.064)、(6.250±0.889),Oct4 mRNA表达分别为(1.000±0.208)、(2.815±0.349),Sox2 mRNA表达分别为(1.000±0.173)、(2.526±0.390),Oct4蛋白表达分别为(1.000±0.148)、(3.396±0.105),Sox2蛋白表达分别为(1.000±0.119)、(2.916±0.130),实验组细胞ANCR、Oct4、Sox2 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01),实验组细胞Oct4、Sox2蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01)。对照组及实验组细胞72h的相对增殖能力分别为(7.164±0.426)、(9.627±0.605);96h的相对增殖能力分别为(13.750±1.089)、(19.166±1.649),实验组细胞72 h、96 h的增殖能力显著高于对照组(P<0.01)。对照组及实验组每视野平均侵袭细胞数分别为(17.26±5.48)个、(39.43±5.21)个;迁移细胞数分别为(30.49±7.74)、(62.20±7.51)个,实验组迁移及侵袭细胞数显著多于对照组(P<0.01)。结论LncRNA ANCR在胃癌患者肿瘤组织中表达显著增高,且与患者病情进展及细胞恶性程度密切相关,体外可促进胃癌干细胞标志物的表达,并增强细胞增殖及转移能力。

炎症微环境下LncRNA ANCR调控hBMSCs成骨分化的机制

探讨炎症微环境下LncRNA ANCR对hBMSCs成骨分化的影响及可能机制。方法:密度梯度分离法分离并培养hBMSCs ,将hBMSCs诱导成骨分化,采用1μg/ml葡球菌A蛋白( SPA)处理细胞构建体外模拟骨髓炎状态细胞模型。RT-qPCR 检测成骨诱导液诱导后0d和1、3、7、14d的ANCR表达水平。FISH 检测ANCR 在细胞中的定位。茜素红染色检测钙结节沉积。实时定量检测碱性磷酸酶(ALP)活性。双荧光素酶检测ANCR与miRNA-101-5P、miRNA-101-5P与IL6ST靶向关系。Western检测 IL6ST及成骨相关基因的表达。结果:在hBMSCs成骨分化过程中,ANCR表达水平呈现下降趋势。早期成骨分化基因及其蛋白和晚期成骨分化指标均显示,ANCR表达降低具有促进hBMSCs成骨分化的作用。FISH实验验证LncRNA ANCR主要定位在细胞质中。生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验证实ANCR与miRNA-101-5P、miRNA-101-5P与IL6ST均有靶向作用。在炎症微环境下,过表达miRNA-101-5p具有促进hBMSCs成骨分化的作用。结论:炎症微环境下hBMSCs成骨分化过程中LncRNA ANCR表达升高,LncRNA ANCR充当miR-101-5P的海绵调控IL6ST,影响人骨髓间充质干细胞成骨分化。

长链非编码RNA DEANR1等在肺癌中的表达

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DEANR1、INXS、ANCR、FENDRR等在肺癌中的表达。方法选取2018年1~6月昆明医科大学第三附属医院收治的54例肺癌患者,其中鳞癌、腺癌、肺小细胞癌分别为28、22、4例。经手术获取癌组织、癌旁正常组织、肺癌淋巴结转移组织,提取总RNA,并采用SYBR Green实时荧光定量PCR检测基因的RNA表达量。结果 DEANR1、INXS、ANCR在癌组织中的相对表达量均高于癌旁正常组织(P <0.05)。淋巴结组织中ANCR、INXS的相对表达量与ki-67呈正相关(r=0.757,P=0.049;r=0.802,P=0.030)。结论 DEANR1、INXS、ANCR在癌组织中的相对表达量均升高,可能在肺癌的发生发展中起到促进作用,ANCR、INXS在淋巴结中的表达与ki-67呈正相关,可能与肺癌淋巴结转移及不良预后有关。

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