血清Sulfatide、ANGPTL4在急性心肌梗死合并心力衰竭中的表达

目的分析血清硫苷脂(Sulfatide)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)在急性心肌梗死合并心力衰竭中的表达情况。方法收集2021年6月至2022年4月于郑州大学第二附属医院心内科治疗的70例急性心肌梗死合并心力衰竭患者(AMI-HF组)和87例急性心肌梗死未合并心力衰竭的患者(AMI组)外周血,采用酶联免疫法(ELISA)检测两组血清Sulfatide和ANGPTL4水平;采用Logistic回归分析AMI患者发生心力衰竭的影响因素,采用Pearson分析血清Sulfatide和ANGPTL4水平与AMI-HF患者心功能指标的相关性,分析血清Sulfatide和ANGPTL4水平在评估AMI-HF疾病进展的应用价值。结果两组年龄、性别、心率、高血压、糖尿病、吸烟史比较,差异无统计学意义(P>0.05);AMI-HF组Sulfatide、LVEDVI、LVESVI均显著高于AMI组,ANGPTL4、LVEF低于AMI组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析发现,Sulfatide、ANGPTL4、LVEF、LVEDVI、LVESVI是AMI患者发生心力衰竭的影响因素(P<0.05);相关性分析结果显示,AMI-HF患者血清Sulfatide与LVEF呈显著负相关(P<0.05),与LVEDVI、LVESVI呈正相关(P<0.05);ANGPTL4与LVEF呈显著正相关(P<0.05),与LVEDVI、LVESVI呈负相关(P<0.05);AMI-HF患者中,预后良好组患者血清Sulfatide均显著低于预后不良组,ANGPTL4高于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05);血清Sulfatide和ANGPTL4联合预测AMI-HF预后价值高于单独检测(P<0.05)。结论监测AMI-HF患者血清Sulfatide和ANGPTL4水平可为疾病进展提供客观依据,血清Sulfatide和ANGPTL4二者还可为作为预测AMI-HF患者预后的重要指标。

FGF23、ANGPTL4、Apelin-13与急性缺血性脑卒中患者病情及溶栓治疗短期预后的相关性

目的 探究成纤维生长因子23(FGF23)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、Apelin-13与急性缺血性脑卒中(AIS)患者病情及溶栓治疗短期预后的关系。方法 选取2020年7月到2023年7月首都医科大学附属北京康复医院收治的120例AIS患者,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估患者入院时神经功能损伤程度并分为轻度组35例、中度组54例、重度组31例;采用头颅MRI检查评估患者梗死病灶面积并分为腔隙性脑梗死组31例、中等面积梗死组52例,大面积脑梗死组37例;采用改良Rankin量表评估患者溶栓治疗后90 d的预后情况并分为预后良好组82例和预后不良组38例。比较各组患者血清学指标FGF23、ANGPTL4、Apelin-13水平,采用多因素logistic回归分析AIS患者短期预后影响因素。结果 不同神经损伤程度的AIS患者血清FGF23水平为:轻度组<中度组<重度组,血清ANGPTL4、Apelin-13水平为:轻度组>中度组>重度组,差异均有统计学意义(F=9.685、8.418、13.695,P<0.05);不同梗死面积的AIS患者血清FGF23水平为:腔隙性脑梗死组<中等面积梗死组<大面积脑梗死组,血清ANGPTL4、Apelin-13水平为:腔隙性脑梗死组>中等面积梗死组>大面积脑梗死组,差异均有统计学意义(F=8.652、7.579、18.659,P<0.05);预后不良组年龄、病灶最大直径、入院时NIHSS评分、血清FGF23水平均高于预后良好组,血清ANGPTL4、Apelin-13水平均低于预后良好组,差异均有统计学意义(t=3.147、4.725、7.309、3.364、4.869、5.766,P<0.05);病灶最大直径≥5 cm、入院时NIHSS评分≥20分、高水平FGF23均是AIS患者静脉溶栓治疗短期预后不良的独立危险因素,高水平的ANGPTL4及Apelin-13是其保护因素(P<0.05)。结论 FGF23、ANGPTL4、Apelin-13与AIS患者病情程度及短期预后密切相关,检测三指标水平有助于AIS病情及预后评估。

ANGPTL4基因对大鼠胶质瘤细胞系C6血管通道形成的影响

目的 研究ANGPTL4基因对C6细胞形成血管通道的影响。方法 将ANGPTL4蛋白进行原核表达 ,用MTT试验观察ANGPTL4对C6细胞增殖的影响 ,用体外迁移试验 ,体外侵袭试验和体外管状形成试验等体外血管新生研究模型观察ANGPTL4基因对C6细胞形成血管通道的影响。结果 ANGPTL4对C6细胞的增殖没有显著性作用 ;ANGPTL4基因可促进C6细胞的体外迁移 ,侵袭和管状形成。结论 ANGPTL4能够促进C6细胞形成血管通道。

牛ANGPTL4基因结构和功能的生物信息学分析

以牛ANGPTL4基因为研究对象,运用生物信息学方法对其编码蛋白的结构、理化性质、信号肽、跨膜结构、亚细胞定位、二级结构以及高级结构进行生物信息学分析,并推测与其他物种的生物进化关系。结果表明,牛ANGPTL4蛋白是一个疏水性不稳定蛋白,定位于细胞外。含有12个α-螺旋,8个β-折叠,30个转角,3个跨膜结构区域。通过分子进化树研究发现牛的ANGPTL4基因在人、小鼠、大鼠、猪、黑猩猩、狗、鸡等物种中,与猪的亲缘关系最近。

绵羊ANGPTL4基因的多态性及其与尾型和屠宰性状的关联研究

血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)可以通过不同方式调节脂肪代谢。本研究利用PCR-SSCP技术检测绵羊ANGPTL4基因5(非编码区的单核苷酸多态性(SNPs)以揭示品种间的遗传差异。研究SNP基因型与性状间的关联以估计该基因的遗传变异对绵羊尾型和屠宰性状的效应。结果表明:供试个体为2个不同脂尾型绵羊品种,即广灵大尾羊和小尾寒羊6个年龄段共96个个体(每品种公、母各半)。设计10对引物,对长度为2436 bp的非编码序列进行扩增。在该序列上检测到8个SNPs,其中,-1691 C>G和-577 T>G 2个颠换的等位基因频率存在显著的品种间差异。-1691 C>G和-1625 G>A均以正向超显性遗传方式影响2个品种的尾长、宰前体重和胴体重,以负向超显性效应方式影响广灵大尾羊的屠宰率。有关结果为这两个突变的实际应用提供了科学依据。

黄牛与牦牛ANGPTL4 exon5多态性与生长性状的相关性

以5个地方黄牛及青海牦牛为研究对象,利用PCR-SSCP和DNA测序技术对367头黄牛与牦牛的类血管生长因子4基因的第5外显子(ANGPTL4_exon5)序列进行SNP检测,并分析该SNP与黄牛与牦牛生长性状的相关性。结果发现1个新的SNP多态位点(NC_007305:g.C4899T),并检测出CC、TT和CT3种基因型。黄牛和牦牛不同基因型与生长发育性状的相关分析显示,黄牛TT基因型个体的体质量(399.096±32.946)kg、体斜长(147.447±4.456)cm、胸围(175.188±5.814)cm和腹围(204.657±7.113)cm,显著大于CT基因型个体,依次为(275.636±51.266)kg、(126.470±6.933)cm、(154.031±9.047)cm、(178.911±11.069)cm,其余各项指标基因型间差异不显著。因此,该位点有可能作为黄牛生长性状辅助选择的标记之一。青海牦牛群体中没有发现与该基因座多态显著相关的性状。

关岭黄牛ANGPTL4基因多态性与生长性状关联分析

为研究牛血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4)在调节脂肪和能量代谢中的作用,采用DNA测序技术,对关岭黄牛92头个体ANGPTL4基因的多态性进行研究,分析多态性位点与关岭黄牛生长性状的相关性。结果表明,在扩增片段为752 bp的产物中,发现387 C>T、418 C>T、449 A>T等3个突变位点,3个突变位点均处于哈代-温伯格不平衡状态(HWE)(P<0.05),3个多态位点的多肽信息含量(PIC)均为中度多态。相关性检测结果表明,418 C>T突变位点不同基因型关岭黄牛的体高、体斜长、胸围、腹围表现出差异极显著(P<0.01),449A>T突变位点不同基因型关岭黄牛的体高表现出差异显著(P<0.05),胸围、腹围表现出差异极显著(P<0.01)。

藏绵羊ANGPTL4基因第3内含子、第6外显子多态性分析

为分析高寒牧区藏绵羊ANGPTL4基因多态性,应用PCR-SSCP与测序结合的方法,对391只藏绵羊ANGPTL4基因第3内含子、第6外显子进行多态性检测。经扩增,分别获得大小为280 bp和289 bp的2个片段。ANGPTL4基因第3内含子发现AA、BB和AB 3种基因型,各基因型频率分别为0.648 8、0.313 0和0.038 2,在C.400+90处发生G/T的突变,多态信息含量为0.265 6,呈中度多态。ANGPTL4基因第6外显子发现AA和AB2种基因型,基因型频率分别为0.961 8和0.038 2,在C.837处发生C/T的突变,为错义突变,并导致P.279处苏氨酸变为丝氨酸,多态信息含量为0.036 9,为低度多态。对藏绵羊ANGPTL4基因的多态性进行分析,发现的2处突变位点可作为藏绵羊品种改良以及种质资源保护的潜在分子标记。

ANGPTL4在调控骨巨细胞瘤细胞增殖、血管生成和破骨分化作用的实验研究

目的探讨人血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)基因沉默对骨巨细胞瘤单核基质细胞(GCTSC)增殖、血管生成以及破骨分化的作用。方法体外培养GCTSC细胞系,采用ANGPTL4 shRNA、Scrambled shRNA转染作为ANGPTL4 shRNA组和阴性对照组,另设置无处理的空白对照组。采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting法检测ANGPTL4 mRNA和蛋白表达。MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。将GCTSC细胞分别与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、小鼠骨髓单核细胞(BMM)共培养,观察HUVECs成管能力和BMM破骨分化能力。结果与空白对照组和阴性对照组比较,ANGPTL4 shRNA组ANGPTL4 mRNA(0.174±0.045)和蛋白表达量(0.098±0.020)均明显降低;而ANGPTL4 shRNA组GCTSC细胞增殖活性降低,凋亡率升高(P<0.05)。与HUVECs共培养后,ANGPTL4 shRNA组闭合管数量[(57.35±17.24)%]减少(P<0.05);与BMM共培养后,ANGPTL4 shRNA组TRAP染色阳性的破骨细胞样多核巨细胞数量[(48.36±21.79)%]减少(P<0.05)。结论沉默骨巨细胞瘤GCTSC细胞ANGPTL4基因表达后,细胞增殖活性降低,凋亡率增加,并且对肿瘤血管生成和多核巨细胞破骨分化有一定的抑制作用。

抑制ANGPTL4基因对舌癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨利用反义技术抑制ANGPTL4基因后对舌癌细胞放射敏感性的影响及机制。方法:采用舌癌细胞Tca8113为研究对象,设ANGPTL4反义寡核苷酸(ASODN)组、ANGPTL4正义寡核苷酸(SODN)组、脂质体组以及空白对照组。转染ANGPTL4 ASODN后检测各组舌癌细胞ANGPTL4表达水平,6MV X线照射后用RT-PCR法检测ANGPTL4表达水平,集落形成试验检测舌癌细胞生长抑制率,荧光染色法检测细胞凋亡率,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白表达。统计学处理采用单因素方差分析。结果:转染ANGPTL4 ASODN后,ASODN组ANGPTL4基因的表达被抑制,较空白对照组下降约44%,而其他三组之间无明显差异。X线照射后,ANGPTL4 ASODN组集落形成率较SODN组、脂质体组及空白对照组明显下降(F=38.782,P<0.001);凋亡率明显增加(F=156.320,P<0.001);Bcl-2蛋白表达明显下调(F=302.895,P<0.001)。结论:ANGPTL4ASODN抑制ANGPTL4基因表达后能增加舌癌细胞放射敏感性。其机制可能与ANGPTL4 ASODN下调舌癌细胞Bcl-2基因表达、增加X线照射后肿瘤细胞凋亡率有关。

ANGPTL4基因表达和血管生成与胃癌发展的关系

目的探讨ANGPTL4 mRNA的表达和血管生成与胃癌发展的关系。方法选择50例胃癌患者组织标本作为实验组,10例正常胃黏膜标本作为对照组,采用原位杂交技术检测ANGPTL4 mRNA表达,免疫组化染色法检验微血管密度,并分析其与胃癌临床病理学特征的关系。结果 ANGPTL4 mRNA阳性率及微血管密度MVD计数均为胃癌组织>癌旁组织>正常胃黏膜,差异有统计学意义(P<0.01)。经Pearson相关分析,ANGPTL4mRNA阳性率与MVD计数呈正相关(P<0.05)。胃癌组织中ANGPTL4阳性表达率与MVD计数与年龄、性别无关,与组织病理分级、TNM分期、浸润深度及淋巴结转移密切相关(P<0.05),分别与组织病理分级、TNM分期、浸润深度呈正相关(P<0.05)。结论胃癌组织中ANGPTL4mRNA高表达可能促进新生血管形成,肿瘤细胞浸润和转移。

血清ANGPTL4、VE-cadherin水平与急性脑梗死患者颈动脉易损斑块的关系

目的 分析血清人血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、血管内皮细胞钙黏连蛋白(VE-cadherin)水平与急性脑梗死患者颈动脉斑块的关系。方法 选取120例急性脑梗死患者作为观察组,另选择120例行体检的健康志愿者作为对照组,比较两组以及不同斑块稳定性患者的ANGPTL4、VE-cadherin水平,分析血清ANGPTL4、VE-cadherin水平与急性脑梗死患者颈动脉易损斑块的关系。结果 观察组的ANGPTL4水平低于对照组,VE-cadherin水平高于对照组(P<0.05);斑块不稳定组的ANGPTL4水平低于斑块稳定组,VE-cadherin水平高于斑块稳定组(P<0.05);斑块不稳定组的内膜厚度、斑块面积高于斑块稳定组(P<0.05);相关性分析发现,ANGPTL4与内膜厚度以及斑块面积呈负相关,VE-cadherin与内膜厚度以及斑块面积呈正相关(P<0.05)。结论 血清ANGPTL4、VE-cadherin水平与急性脑梗死患者颈动脉易损斑块呈显著相关,可作为临床治疗的重要靶点。

ANGPTL4基因在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中表达水平的变化

目的观察血管生成素样蛋白-4(Angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4)基因在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ANGPTL4基因与脂肪细胞分化的关系。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中(0-10 d),采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用Real-time PCR、逆转录PCR技术检测脂肪细胞分化标志基因(LEPTIN,ADIPONECTIN)和ANGPTL4 mRNA表达;采用Western blot检测ANGPTL4蛋白表达。结果随着脂肪细胞诱导分化逐步深入,油红O染色显示,细胞中脂滴形成逐渐增多,达到占全视野95%以上;同时瘦素(LEPTIN)和脂联素(ADIPONECTIN)基因在诱导后的第2天开始表达并逐步增多,均提示脂肪细胞分化逐步成熟。ANGPTL4 mRNA和蛋白在前脂肪细胞中低表达,分化第2-6天ANGPTL4基因表达显著上调,分化第8-10天ANGPTL4基因表达保持在较高水平并趋于稳定。结论在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中ANGPTL4基因表达上调,ANGPTL4基因可能参与了脂肪细胞分化。

补阳还五汤对失神经肌萎缩大鼠Angptl4表达的影响

目的研究补阳还五汤(黄芪、当归、白芍、地龙、川芎、红花、桃仁)对失神经肌萎缩大鼠Angptl4基因表达的影响,探讨其对失神经肌萎缩的保护机制。方法建立大鼠腓总神经夹伤模型,将造模后的60只SPF级SD大鼠随机分为:假手术组、补阳还五汤高、中、低剂量组、弥可保组与模型组,术后每日灌胃给药。18 d后qRT-PCR与Western-blot检测Angptl4基因与蛋白的差异表达。结果与模型组相比,补阳还五汤中、高剂量组Angptl4 mRNA与蛋白表达均显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论补阳还五汤可能通过增加Angptl4基因与蛋白表达,促进血管新生,改善失神经萎缩肌肉的血液供应,从而延缓肌萎缩的发生。

绵羊ANGPTL4蛋白在脂肪组织中的表达研究

血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)是一种与脂肪代谢相关的分泌性蛋白。本研究利用Western blotting技术检测了两个不同品种的脂尾型绵羊,即广灵大尾羊和小尾寒羊的2、4、6、8、10和12月龄时的母羊(每年龄段2只),共24个个体的皮下、腹膜后、肾周和尾部脂肪组织的ANGPTL4蛋白的表达量。结果表明:品种、月龄和组织对ANGPTL4蛋白的表达都有极显著(P<0.001)影响。品种与月龄的互作对该蛋白表达也有显著(P<0.01)影响。本研究结果为进一步探讨ANGPTL4蛋白在绵羊脂肪组织中的作用机制提供了理论依据。

ANGPTL4对肿瘤调控机制的研究进展

以往的研究认为血管生成素样蛋白4(Angiopoietin-like 4,ANGPTL4)主要参与了人体脂类和葡萄糖代谢的调控。新的研究显示ANGPTL4在肿瘤血管生成、生长、远处转移、抗失巢凋亡、调控氧化还原反应等方面发挥着重要作用。本文就ANGPTL4对肿瘤调控机制及其临床价值的研究作一综述,以期为肿瘤靶向治疗提供更多新思路。

宫颈癌组织中Foxm1、ANGPTL4蛋白表达及临床意义

目的:探讨宫颈癌组织中Foxm1、ANGPTL4蛋白表达及临床意义。方法:选取2017年1月-2018年3月河南省人民医院保存的宫颈癌组织标本72例,同时选取正常宫颈组织标本35例作为对照组,采用免疫组化检测Foxm1、ANGPTL4蛋白表达水平。结果:宫颈癌组织Foxm1和ANGPTL4蛋白阳性表达率为63.89%和75.00%,明显高于对照组(P<0.05);FIGO分期Ⅱ期、肌层浸润≥1/2、中低分化宫颈癌Foxm1蛋白阳性表达率分别为89.47%、84.62%和79.07%,明显高于Ⅰ期、肌层浸润<1/2、高分化患者(P<0.05);有脉管浸润宫颈癌ANGPTL4蛋白阳性表达率为95.24%,明显高于无脉管浸润(P<0.05);Foxm1与ANGPTL4蛋白表达呈正相关(rs=0.301,P<0.05)。结论:宫颈癌组织中Foxm1、ANGPTL4蛋白呈高表达,在疾病发生发展中可能有重要作用。

ANGPTL4基因的表达调控及功能研究进展

类血管生长因子4(ANGPTL4)是最新发现的与血管生成、脂类代谢、葡萄糖代谢、肿瘤及代谢性疾病相关的分泌性蛋白质因子。本文从ANGPTL4基因的基本结构、基因表达调控、基因功能及其与肿瘤及代谢性疾病的关系等四个方面对其研究进展进行了综述,并对ANGPTL4蛋白应用于治疗肥胖症、高甘油三酯血症以及各种血管病的前景做了展望。

天祝白牦牛ANGPTL4基因的单核苷酸多态性研究

[目的]本研究旨在对牛ANGPTL4基因进行SNPs检测,并研究其与天祝白牦牛部分经济性状的相关性。[方法]以36头天祝白牦牛为研究对象,采集其血样并提取基因组DNA,设计ANGPTL4基因的特异引物对P1和P2,对ANGPTL4基因的部分序列进行扩增,并利用PCR-SSCP结合测序的方法检测扩增产物序列的多态性。[结果]以自行设计的上述两对引物扩增分别获得长为260 bp（位于GenBank公布序列NC-007305.2的296~555 bp间）和170 bp（位于序列NC-007305.2的4 610~4 779 bp间）的天祝白牦牛ANGPTL4基因的两个片段。引物对P1的扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,出现两种带型：AA和AB。AA和AB两种基因型频率分别为0.9444和0.0556。多态信息含量是0.1000,为低度多态。对具有不同带型的个体测序结果表明,引物对P1的扩增片段上有两处发生碱基突变,分别位于ANGPTL4基因的第466 bp处（T→C）和479 bp处（T→C）,导致相应的氨基酸改变Cys→Arg,Phe→Ser。在引物对P2的扩增片段上没有发现SNPs位点。[结论]引物对P1的扩增位点可以尝试作为天祝白牦牛品质改良的辅助选择标记。

南阳牛血液基因组DNA提取与ANGPTL4基因的PCR扩增

采集20例南阳牛的血液,采用酚/氯仿法分离白细胞提取基因组DNA,并且对ANGPTL4基因部分序列(677～998 bp)PCR扩增条件进行了优化。结果表明,获得的牛基因组DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,主条带清晰,表明获得的南阳牛基因组DNA可以用于后续实验;以所提取的基因组DNA为模板,优化ANGPTL4基因片段扩增的条件,结果表明,最理想的PCR扩增条件是模板量为2μL(50 mg/L),Taq聚合酶(5 u/μL)的量为0.8μL,退火温度为56℃,循环次数为35次。