KHSRP通过ANK3调节前列腺癌细胞对雄激素的反应性

目的·研究KH型剪接调节蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)对前列腺癌细胞增殖能力的影响及其下游基因的表达调控,考察KHSRP在前列腺癌由雄激素依赖型向非依赖型转变过程中的潜在作用及机制。方法·通过重组慢病毒感染雄激素依赖型前列腺癌LNCaP细胞和雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞,分别构建KHSRP功能性缺失/获得的稳定细胞株,并比较KHSRP在2种细胞之间的功能差异。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测稳定细胞株中KHSRP、雄激素受体(androgen receptor,AR)及锚定蛋白3(ankyrin 3,ANK3)的表达量。通过细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验等检测KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响。通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)检测KHSRP影响的下游基因,并通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测KHSRP下游基因的mRNA表达量。结合癌细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)、癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,分析研究ANK3和KHSRP在前列腺组织样本中的表达情况以及ANK3在不同前列腺癌细胞株中的表达差异。结果·GEO数据分析结果显示KHSRP在前列腺癌组织中的表达高于良性前列腺组织,提示其与前列腺癌的发生相关。细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验结果显示KHSRP的表达与LNCaP细胞增殖能力呈负相关,提示KHSRP可以抑制前列腺癌细胞的增殖,且KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响强于对DU145细胞的影响。对LNCaP稳定细胞株的Western blotting和RT-qPCR检测显示KSHRP过表达后LNCaP细胞中AR蛋白质水平下降,但mRNA水平未产生变化,提示KHSRP可以间接调节AR的蛋白质水平。RNA-seq和RT-qPCR结果显示KHSRP与影响AR蛋白稳定性的调节因子ANK3的表达呈正相关,随后的Western blotting证明KHSRP过表达后ANK3蛋白质的表达量明显升高,TCGA数据分析结果进一步说明KHSRP与ANK3的mRNA表达的相关性。根据CCLE和GEO数据,ANK3的表达与前列腺癌的恶性程度也密切相关。结论·KHSRP可能通过ANK3间接调控AR的蛋白稳定性,影响雄激素依赖型前列腺癌细胞的增殖能力,并介导前列腺癌细胞对雄激素反应性的改变。

乳腺癌组织环状RNA ANKS1B及上游转录因子1的表达及临床意义

目的 探讨乳腺癌组织中环状RNA ANKS1B(CircANKS1B)及上游转录因子1(USF1)的表达及其临床意义。方法 选取90例乳腺癌患者作为研究对象。采用免疫组织化学检测组织中USF1蛋白表达。采用荧光定量聚合酶链反应检测组织中CircANKS1B及USF1 mRNA的表达。分析癌组织中CircANKS1B与USF1 mRNA的相关性。分析CircANKS1B及USF1 mRNA表达与乳腺癌临床病理特征的关系。分析CircANKS1B及USF1 mRNA的表达与乳腺癌预后的关系。利用单因素及多因素COX比例风险模型分析乳腺癌预后的独立影响因素。结果 乳腺癌组织中USF1棕黄色阳性表达主要位于细胞核。乳腺癌组织中USF1蛋白表达阳性率为86.67%(78/90),高于癌旁组织的15.56%(14/90),差异有统计学意义(P<0.001)。乳腺癌组织中CircANKS1B与USF1 mRNA的相对表达量分别为(4.12±0.68)、(6.35±1.21),高于癌旁组织的(1.23±0.46)、(1.57±0.59),差异有统计学意义(P<0.001)。乳腺癌组织CircANKS1B与USF1 mRNA表达呈显著正相关(r=0.604,P<0.001)。CircANKS1B与USF1 mRNA表达在不同肿瘤分期、淋巴结转移及是否三阴性乳腺癌方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。CircANKS1B高表达患者中位生存时间为52.62个月(95%CI:49.44~56.35),短于CircANKS1B低表达患者的56.78个月(95%CI:52.46~57.05),差异有统计学意义(P=0.045)。USF1 mRNA低表达患者中位生存时间为52.53个月(95%CI:48.83~56.23),短于USF1 mRNA低表达患者的56.75个月(95%CI:54.07~59.43),差异有统计学意义(P=0.014)。CircANKS1B高表达、USF1 mRNA高表达、肿瘤分期Ⅲ期及合并淋巴结转移是乳腺癌预后的独立影响因素。结论 乳腺癌组织中CircANKS1B及USF1表达升高,二者与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关,可作为新的乳腺癌预后标志物。

一例ANK1基因突变型遗传性球形红细胞增多症病例报告并文献复习

目的:总结分析遗传性球形红细胞增多症(Hereditary spherocytosis, HS)的临床特点及基因表型,进一步探讨其诊治策略。方法:对1例ANK1基因c.3604delG (缺失鸟嘌呤),导致氨基酸改变p.D1202Tfs*28 (移码突变),从而引发患儿HS的临床资料进行回顾性分析并文献复习,探讨诊治策略。结果:患儿男性,5岁4月,反复面色苍白、黄疸5年余,根据入院各项检查和既往基因检测结果,明确诊断为HS、脾功能亢进、溶血性贫血。遂行腹腔镜脾脏切除术,术后予抗凝处理,并动态复查相关指标,患儿术后恢复顺利。结论:基因检测在HS的诊疗中占据重要位置,我们在HS患儿中发现的ANK1基因新突变,进一步扩大了HS患儿基因突变谱,同时对分析不同基因表型下该疾病的相关表现形式提供依据,针对HS患儿脾切除仍是其治疗的有效方法。

广西巴马小型猪ANK1基因启动子克隆及其活性分析

【目的】克隆广西巴马小型猪ANK1基因启动子,确定其活性核心区,为研究ANK1基因启动子与肉质性状的相关性及构建动物疾病模型打下基础。【方法】通过在线软件对ANK1基因启动子的转录因子结合位点进行预测,根据转录因子结合位点设计特异引物扩增不同长度的ANK1基因启动子片段,并利用双荧光素酶试剂盒检测其荧光值,以确定不同ANK1基因启动子片段的活性。【结果】发现ANK1基因启动子存在1个转录起始位点(TSS)、2个Cp G岛和多个转录因子结合位点,并以此作为ANK1基因启动子的分段依据,将其分割为P638、P791、P1113、P1163、P1648、P1694、P1796和P2074等8个不同长度的目的片段。成功克隆获得的8个ANK1基因启动子片段经KpnⅠ和HindⅢ双酶切、T4真核表达载体连接、细胞转染等方法构建8个双荧光素酶重组报告基因,双荧光素酶试剂盒检测结果显示,广西巴马小型猪ANK1基因启动子在P1796片段活性最强,与其他片段存在显著差异(P<0.05)。【结论】成功克隆获得广西巴马小型猪ANK1基因启动子的8个片段,且利用双荧光素酶试剂盒检测确定其核心启动子区域出现在P1796片段。

磷酸化p38MAPK及ANK在终板软骨细胞退变模型中表达的变化

目的:探讨终板软骨细胞退变后磷酸化p38MAPK和ANK的表达变化。方法:取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板细胞,建立终板软骨细胞体外自然退变模型。采取甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色法,对该模型进行鉴定。以western-blot检测原代及第四代磷酸化p38MAPK及ANK的表达;RT-PCR检测原代及第四代Ank基因mRNA表达。结果:与原代相比第四代终板软骨细胞磷酸化p38MAPK表达量明显增加(P<0.01);ANK表达量明显下调(P<0.05)。结论:终板软骨细胞的退变伴随p38MAPK表达增强和ANK蛋白的表达减弱,两者与终板软骨细胞的退变存在明显关联,提示通过调控p38MAPK和ANK的表达可能影响终板软骨细胞的退变,可能有助于阻止终板软骨的退变。

菜豆ANK基因家族鉴定及ANK25的表达模式分析

锚蛋白重复序列模体是生物体内最普遍的蛋白质序列模体之一,在多种细胞活动中主要介导蛋白质-蛋白质的相互作用。本研究利用菜豆基因组数据库,通过生物信息学手段对菜豆ANK家族成员及分子生物学特性进行了鉴定。结果显示,菜豆基因组中含有30个ANK家族基因,分布于9条染色体上,其中第5条染色体上含有的ANK基因最多,包含13个基因。蛋白结构域分析发现,ANK25除了含有ANK结构域外还含有RING结构域。亚细胞定位结果显示,ANK25主要分布在细胞膜上。表达模式分析发现,ANK25对干旱、盐和ABA胁迫有响应。本研究为进一步研究菜豆ANK的分类及功能提供了有利的依据。

ANK1基因突变与遗传性球形红细胞增多症

遗传性球形红细胞增多症（hereditary spherocytosis,HS）是一种常见的遗传性溶血性疾病,其临床表现为贫血、黄疸和脾肿大,外周血涂片可见球形红细胞。约75%HS为常染色体显性遗传,但仍有约25%的患者无家族史,可能与常染色体隐性遗传或新生突变有关。世界各地都有病例报道,而在北欧和北美地区,HS发病率高达1/2 000[1]。HS分子发病机制是基因突变导致红细胞膜蛋白缺陷[2]。

ANK1基因Arg1436Ter突变导致遗传性球形红细胞增多症1例并文献复习

目的加强对遗传性球形红细胞增多症(HS)的认识。方法对1例ANK1基因Arg1436Ter突变导致HS的患儿临床资料进行回顾性分析并复习相关文献。结果患儿,男,4岁,表现为反复面色苍白、黄疸和脾肿大,血常规提示贫血、网织红细胞计数增高;骨髓细胞学检查表现为增生性贫血;多次行血涂片检查,外周血球形红细胞比例均<10%,最高为7%;经基因测序在患儿ANK1基因发现c.4306C>T(编码区第4306号核苷酸由C变为T)的杂合核苷酸变异,该变异的致病性已经被证实,与球形红细胞增多症相关。结论HS的病因明确,为先天性遗传性的红细胞膜缺陷,临床上HS的误诊及漏诊率较高,基因检查是HS中极其重要的检测手段,我们在HS患儿中发现的ANK1基因新突变可为进一步探索我国人群中HS的遗传学病因提供参考。

rhBMP-2和FGF-2对成骨细胞矿化及ENPP1、ANK、TNAP表达的影响

目的:研究重组人骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对成骨细胞(MC3T3-E1 Subclone 14)矿化及焦磷酸合成酶(ENPP1)、跨膜蛋白(ANK)和组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)表达的影响,探讨生长因子影响细胞矿化的机制。方法:将MC3T3-E1 Subclone 14细胞分成3组:成骨细胞诱导液(OS)成骨诱导培养组(对照组),OS与rhBMP-2培养组(rhBMP-2组),OS与FGF-2培养组(FGF-2组)。培养12 d后进行ALP活性检测及茜素红染色,实时荧光定量PCR检测矿化相关基因ENPP1、ANK和TNAP表达的差异。结果:rhBMP-2组ALP活性以及钙化结节明显高于对照组,ENPP1、ANK和TNAP均高表达;FGF-2组ALP活性以及钙化结节明显低于对照组,ENPP1和ANK呈高表达,TNAP低表达。结论:rhBMP-2和FGF-2通过调节ENPP1、ANK和TNAP的表达变化来影响骨的矿化。

遗传性球形红细胞增多症ANK1基因新发突变1例

遗传性球形红细胞增多症(HS)是先天性红细胞膜蛋白基因突变引起红细胞球形化,红细胞在脾脏被破坏增加引起溶血性贫血,临床主要以贫血、黄疸、脾肿大为主要临床症状。南通市第一人民医院于2021年7月3日收治1例以反复皮肤黄染为主要表现的患儿,该患儿出生后不久有溶血、贫血、黄疸等表现,基因检测发现ANK1基因错义突变,结合患儿的临床及基因检查结果,确诊为HS。本例患儿致病原因可能是新发现的ANK1基因突变,该基因突变位点未被人类基因突变数据库(HGMD)收录,无相关文献报道。HS临床表型无特异性,基因检测可协助诊断。本文通过总结该患儿治疗中的经验、教训,以提高大家对HS的认识。

儿童遗传性球形红细胞增多症临床及ANK1基因突变分析

目的探讨儿童遗传性球形红细胞增多症的临床及遗传特点。方法回顾分析3例遗传性球形红细胞增多症患儿的临床资料。结果男性2例、女性1例,年龄2岁7个月至4岁10个月,均以"贫血、黄疸"入院;临床表现为面色苍白,皮肤巩膜黄染,肝脾肿大;血红蛋白低下,网织红细胞比例升高,总胆红素水平上升,外周血涂片发现患儿球形红细胞比例均超过10%,红细胞渗透脆性实验阳性。基因检测发现3例患儿均存在ANK1基因突变,分别为c.830A>G(p.H277R),IVS 3+1 G>T以及c. 955 C>T(p.R 319 X),均是杂合突变,且IVS 3+1 G>T和c. 955 C>T突变未见报道。结论基因检测可协助明确诊断遗传性球形红细胞增多症,本次发现两个未见报道ANK1基因新突变。

不明原因性心源性猝死者心肌房SCN5A和ANK2的表达及临床意义

目的探讨不明原因性心源性猝死（USCD）病患心肌房SCN5A和ANK2的表达状况及临床意义。方法选取2012年1月至2013年12月我院接收的不明原因性心源性猝死病患73例为观察组,随机选取同时间段排除心脏原因死亡的病患50例作为对照组,统计所有USCD病患的概况,对比两组SCN5A和ANK2基因突变比例,记录应用SCN5A、ANK2检测的阳性预测值、准确度等,并对比两组酶学检测指标。结果 USCD病患中心重多为300～400 g,死亡诱因多为纠纷及厮打,猝死表现多为呻吟和抽搐,发病至死亡时间多〈24 h。观察组SCN5A、ANK2的阳性结果出现（-）的病患明显高于对照组,出现（＋）的病患明显低于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。应用SCN5A、ANK2进行检测的阳性预测值分别为87.50%和88.89%,且准确度、特异性、敏感性均较高。观察组CK、CK-MB、LDH以及HBDH等指标水平均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 USCD者出现SCN5A和ANK2的比例较高,在应用于检测时的阳性预测值与准确度均较高。因此,USCD病患心肌房SCN5A和ANK2的表达可以作为判断的辅助依据,具有较高的临床价值。

ANK2基因突变导致的遗传性心律失常

2003年和2004年Mohler等发现了细胞膜锚蛋白基因ANK2(ankyrin-B)突变导致一组遗传性心律失常综合征。表现为不同类型的心律失常包括窦性心动过缓、特发性心室颤动、儿茶酚胺依赖性室性心动过速和猝死,而并不都伴有QTc延长。因ankyrin-B除在心脏多种细胞均有表达外,多种器官多种细胞也均有表达,故人类ankyrin-B突变可能是引起除心律失常外,尚有其他组织器官功能异常的综合征。

冠心病患者血浆ANK1及KRT8的表达及临床意义

目的:探讨细胞锚蛋白(ankyrin 1,ANK1)和角蛋白(keratin 8,KRT8)在冠心病患者血浆中的表达及临床意义。方法:收集2014年6月至2015年12月我院收治的139例冠心病患者为病例组,按照临床资料将其分为稳定型心绞痛组(38例)、不稳定型心绞痛组(45例)和心肌梗死组(56例),根据Gensini评分标准将冠心病患者分为轻度狭窄组(29例)、中度狭窄组(72例)和重度狭窄组(38例);并于同期随机选取80例健康体检者为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定病例组和对照组血浆ANK1和KRT8水平。结果:病例组不同组别患者血浆ANK1和KRT8水平均高于对照组,其中稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛组和心肌梗死组患者血浆ANK1和KRT8水平依次增大,差异均有统计学意义(P<0.05)。病例组不同冠脉狭窄组患者的血浆ANK1和KRT8水平均明显高于对照组,轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组患者血浆ANK1和KRT8水平依次增大,差异均有统计学意义(P<0.05)。血浆ANK1、KRT8水平与Gensini评分呈正相关关系(P<0.05)。结论:ANK1和KRT8在冠心病患者血浆中明显升高,并且冠状动脉病变越严重,两种蛋白的表达水平越高。

遗传性球形红细胞增多症ANK1基因新发突变——2例病例报道及文献复习

目的:提高对遗传性球形红细胞增多症(HS)ANK1基因突变的认识。方法:回顾性分析2例存在ANK1基因新发突变的HS患儿的临床资料,并文献复习。结果:两例患儿均因贫血就诊。查体巩膜黄染,脾脏肿大。血常规呈正细胞正色素贫血,网织红细胞升高。胆红素升高,以间接胆红素升高为主。例1红细胞形态、脆性检查正常。基因测序分析,ANK1基因剪切突变(NM_001142446;exon 9)c.1008+1_1008+2insG(splicing)。例2外周血涂片球形红细胞增多,红细胞脆性增加。基因测序分析,ANK1基因一无义突变(NM_001142446;exon9)c.940C>T(p.R314X)。两例Sanger测序患儿父母均未发现ANK1的突变。目前国内外至少报道了ANK1基因与HS有关的111个重要突变,本文病例临床表现符合HS,ANK1基因突变均未被HGMD数据库收录,无文献报道。结论:本例患儿符合HS的临床特点,新发现的ANK1基因突变可能是致病原因,基因检测可协助诊断HS。

FGF2对成骨细胞矿化及矿化基因ENPP1，ANK和TNAP表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（FGF2）对分化不同阶段的成骨细胞（MC3T3．E1）矿化基因ENPP1，ANK和TNAP表达的影响，从细胞和分子水平上探讨FGF2对成骨细胞矿化的机制。方法构建不同分化阶段的MC3T3-E1细胞，诱导前为未分化阶段，矿化诱导后为分化阶段。50μg／LFGF2分别作用于未分化和分化阶段的MC313-E1细胞，测定细胞内碱性磷酸酶表达情况，用茜素红染色法观察MC3T3-E1细胞矿化结节的变化，实时荧光定量RT—PCR检测细胞矿化基因ENPP1，ANK和TNAP表达的差异并进行统计学分析。结果 茜素红染色显示FGF2抑制MC3T3-E1细胞的矿化。FGF2作用于未分化的MC3T3-E1细胞，ENPPl，ANK基因表达明显上调，TNAP基因表达明显下调；而FGF2作用于分化的MC3T3-E1细胞后基因表达变化不明显、结论体外细胞研究显示，FGF2可能是通过调节焦磷酸盐加工因子ENPPI，ANK，TNAP基因表达的变化来抑制MC3T3-E1细胞的矿化过程．

甘南牦牛ANK1基因启动子区突变与胴体质量及肉质性状的关联分析

试验选择721头甘南牦牛,应用PCR-SSCP技术检测ANK1基因启动子区多态性,并分析基因突变对胴体及肉质性状的影响.结果表明:甘南牦牛ANK1基因启动子区多态性丰富,检测出4处SNPs对应4种等位基因A、B、C、D,等位基因C和基因型CC频率分别为0.559 7和0.384 0,为优势等位基因及优势基因型;ANK1基因启动子区突变对各年龄甘南牦牛肉质性状影响不同,基因型CC与4岁牦牛宰后肌肉嫩度及5岁牦牛失水率显著相关(P<0.05),等位基因C与4岁甘南牦牛失水率、眼肌面积及嫩度显著(P<0.05)关联;甘南牦牛胴体及肉质性状在各基因型和等位基因间的变化趋势基本相同,即BC型个体宰后肌肉嫩度剪切力值最低而BB型最高,AA和BB型个体肌肉有较好的保持水分的能力而BC型个体最差,AA型个体眼肌面积最小,而携带等位基因C的个体肌肉嫩度剪切力值小而眼肌面积大,但肌肉失水率高.甘南牦牛ANK1基因启动子区突变可作为胴体及肉质性状的基因标记,选择BC基因型个体或等位基因C,可改善牦牛群体的宰后肌肉嫩度,增加眼肌面积,但可能使肌肉保持水分的能力下降.

ANK1和SPTB基因突变致遗传性球形红细胞增多症的临床特点及遗传学分析

该研究对5例遗传性球形红细胞增多症(HS)患儿的临床特点及ANK1和SPTB基因突变特征进行分析。5例患儿均通过外周血基因检测确诊。5例患儿均表现为贫血、黄疸、脾肿大。红细胞渗透脆性试验显示3例增高;Coombs试验、葡萄糖6磷酸脱氢酶测定、蔗糖溶血试验、酸化血清溶血试验、地中海贫血基因检测均为阴性;外周血涂片球形红细胞计数仅1例增加。高通量测序发现病例1～3存在ANK1基因突变,分别为c.3398(exon29)delA、c.4306C>T以及c.957(exon9)_c.961(exon9)delAATCT,其中c.3398(exon29)delA未见报道;病例4的SPTB基因存在C.318delGExon3突变;病例5存在SPTB基因合并SLC4A1基因突变,其中SPTB基因c.3484delC为自发突变,SLCA4A1基因的突变位点来自父亲,为非致病基因。该研究提示,贫血、黄疸、脾肿大是HS患儿主要的临床表现;多数HS患儿外周血球形红细胞计数无明显异常;基因检测有助于HS的精准诊断。

遗传性球形红细胞增多症家系ANK1基因新发剪切位点突变的不典型表型及表型差异探讨

目的对疑似遗传性球形红细胞增多症家系进行基因检测,探讨家系成员的不典型表型及表型差异。方法利用核心家系医学外显子测序进行基因突变检测,一代测序验证结果。根据家系检测发现的基因突变情况,充分知情同意后行第二胎产前诊断。结果外显子测序发现先证者ANK1基因存在一个剪切位点c.4381+1delG杂合突变,遗传自父亲。该位点在物种间高度保守,生物信息学软件预测提示c.4381+1delG可能影响剪切,本实验室参考人群(2000人)外显子数据中未发现此突变位点,提示人群频率低。产前诊断结果提示胎儿遗传了父亲的基因突变。结论在遗传性球形红细胞增多症家系中首次发现ANK1基因c.4381+1delG杂合突变,数据库中未见报道,丰富了ANK1基因突变谱。先证者及父亲携带基因突变,但没有典型的临床表现且表型存在差异,可能是因为该突变未导致锚蛋白功能全部丧失,红细胞膜损伤程度较低,并且不同个体间存在遗传背景差异所致。胎儿遗传了父亲突变位点,为胎儿今后的发病风险提供遗传咨询信息。

国产与进口安克(ANKE)干糖浆体外抗菌作用比较

本文主要测定了安克干糖浆(ANKE)国产与进口制剂对临床分离致病菌的药敏试验,结果表明:国产与进口ANKE干糖浆对金葡菌、大肠杆菌、沙门氏菌、变形杆菌有较好的抑制作用,对阴沟杆菌、沙雷氏菌在药物浓度较高时有一定的抑制作用,对绿脓杆菌耐药,同时测定了不同接种菌量对MIC的影响,结果显示接种菌量对国产与进口安克干糖浆MIC值影响甚微。