ANKRD17蛋白抗体的制备、纯化及检测

目的:制备ANKRD17(P260)蛋白的兔多克隆抗体,以与抗原相结合的方法进行抗体的纯化,并利用纯化的抗体对该蛋白进行细胞内免疫荧光检测。方法:构建表达GST-ANKRD17C端融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达;制备GST-ANKRD17C端抗原融合蛋白后免疫家兔,对获得的兔多克隆抗血清进行亲和纯化;纯化后的抗体经过Westernblot鉴定,用于细胞免疫荧光染色检测。结果:获得较高效价的血清抗体,并对血清抗体进行了纯化;利用纯化的抗体对ANKRD17蛋白进行了细胞内免疫荧光检测,发现改蛋白定位于细胞质中。结论:制备得到的纯化抗体为研究ANKRD17蛋白的功能打下了必要的基础。

山羊ANKRD17和CLEC16A基因多态性及其与繁殖性能关联分析

为探究ANKRD17基因g.88739493 T>G位点和CLEC16A基因g.9587011 G>A、g.9730880 G>A位点多态性及其与山羊繁殖性能之间的关联,利用Sequenom MassARRAY^(■)SNP分型技术对云上黑山羊、济宁青山羊和辽宁绒山羊3个群体ANKRD17和CLEC16A基因的3个位点进行了多态性检测,并与云上黑山羊繁殖性能(包括产羔数、初生窝重和断奶窝重)进行关联分析。结果表明,ANKRD17基因g.88739493 T>G在3个群体中均为低度多态(PIC<0.25),CLEC16A基因g.9587011 G>A、g.9730880 G>A位点在3个群体中为中度多态(0.25<PIC<0.5);卡方检验结果显示,ANKRD17基因g.88739493 T>G位点以及CLEC16A基因g.9587011 G>A、g.9730880 G>A位点在3个山羊品种中均处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05);与繁殖性能相关的表型关联分析表明,CLEC16A基因g.9587011 G>A位点中GA基因型的个体产羔数显著高于GG基因型个体(P<0.05),3个SNPs位点对初生窝重和断奶窝重均无显著影响(P>0.05)。综上,CLEC16A基因g.9587011 G>A位点可作为山羊产羔数选择的潜在分子标记。