沉默长链非编码RNA ANO1-AS1对食管鳞癌细胞迁移、侵袭的影响

目的研究长链非编码(Lnc)RNA ANO1-AS1对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法食管癌细胞株(EC109、TE)转染ANO1-AS1敲减慢病毒,沉默ANO1-AS1表达为LV-sh-ANO1-AS1组,阴性肿瘤对照为LV-Con组,未进行转染为空白对照(Blank)组。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组食管癌细胞中ANO1-AS1和ANO1的相对表达量。通过划痕实验和Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力。通过Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力。通过Western印迹测定每组细胞中ANO1、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、上皮间质转化(EMT)相关蛋白及细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达。结果qRT-PCR结果显示,转染ANO1-AS1敲减慢病毒后,食管癌细胞EC109、TE中LV-sh-ANO1-AS1组LncRNA ANO1-AS1和ANO1 mRNA表达水平均显著低于LV-Con组和Blank组(P<0.05)。划痕实验结果表明,LV-sh-ANO1-AS1组细胞划痕愈合率显著低于LV-Con组和Blank组(P<0.05)。Transwell结果表明,LV-sh-ANO1-AS1组细胞迁移和侵袭能力显著低于LV-Con组和Blank组(P<0.05)。Western印迹结果显示,与LV-Con组和Blank组比较,LV-sh-ANO1-AS1组MMP2、MMP9、Vimentin、p-ERK及ANO1蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论LncRNA ANO1-AS1在食管鳞癌细胞EC109、TE中高表达,并可能通过影响ERK/MAPK信号通路促进食管癌细胞的迁移和侵袭。

ANO1介导肿瘤恶性生物学行为的机制探讨

ANO1又称为TMEM16A,其作为钙激活的电压依赖性氯通道的分子基础之一,广泛分布于体内多种组织器官,介导了支气管腺体分泌、痛觉、肠道慢波形成等多种生理功能;同时ANO1参与了多种病理过程的发生、发展,如恶性肿瘤、炎症等。多项报导证实了恶性肿瘤发病过程中通过多种信号通路引起ANO1的高表达,继而高表达的ANO1激活不同的下游信号通路提高了肿瘤细胞的恶性生物学行为。本文主要探讨恶性肿瘤中高表达的ANO1提高肿瘤细胞恶性生物学行为的可能机制。

Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展

钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊性纤维化、高血压、腹泻和哮喘等疾病具有潜在治疗作用。自2008年Ano1首次被发现后,先后出现了多种CaCC特异性调节剂的筛选方法,主要包括基于荧光蛋白的高通量初级筛选、电生理膜片钳技术和虚拟筛选,进而发现了多种药理学作用不同的小分子调节剂。本文综述了目前较为主流的筛选方法的原理和优缺点,并对迄今发现的Ano1特异性调节剂的化学结构和潜在的应用进展进行综述。

弱精子症患者精子锌稳态蛋白、GPR39和ANO1 mRNA的表达变化及其临床意义

目的:探究锌稳态相关蛋白、G蛋白偶联受体39(GPR39)及ANO1 mRNA在弱精子症精子中的表达变化,并分析其与精子运动能力的相关性。方法:选取2022年6月至2023年4月我中心收集的弱精子症患者精液标本(PR+NP<40%,PR<32%,精子浓度>15×10^(6)/ml)40例,正常精液标本(PR+NP≥40%,PR≥32%,精子浓度>15×10^(6)/ml)42例。通过CASA检测精液常规参数及精子活力,测量两组精浆锌的含量,运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对两组精子锌转运蛋白(ZIP13、ZIP8、ZNT10)、金属硫蛋白(MT1G、MT1、MTF)、GPR39和钙依赖性氯离子通道蛋白(ANO1)表达进行定量检测;运用激光共聚焦检测精子中的游离锌分布;运用免疫荧光染色观察精子中GPR39、MT1蛋白的表达;进一步采用Spearman秩相关分析其与精液参数的相关性。结果:与正常组相比,弱精子症组精浆锌的浓度无明显差异(P>0.05),弱精子症组精子游离锌水平明显降低(P<0.05);RT-qPCR检测结果显示,弱精子症组精子MT1G、MTF、ZIP13、GPR39、ANO1 mRNA相对表达量低于正常组(P<0.05);两组间ZIP8、ZNT10、MT1 mRNA相对表达量无显著性差异(P>0.05);免疫荧光结果显示弱精子组GPR39蛋白表达较低(P<0.05);相关性分析结果显示MT1G、MTF、GPR39、ANO1 mRNA相对表达量与前向运动精子百分率和精子活动率呈正相关(P<0.05)。结论:弱精子症患者精子锌稳态蛋白(MT1G、MTF、ZIP13)、GPR39和ANO1 mRNA表达下调且其表达与精子运动能力呈正相关。

结肠癌患者血清miR-370-3p、ANO1表达变化及其临床意义

目的探讨血清微小RNA-370-3p(miR-370-3p)、茴香胺1(ANO1)表达与结肠癌病理特征及术后复发的关系。方法选取94例接受腹腔镜手术治疗的结肠癌患者为结肠癌组、50例结肠息肉患者为良性病变组、50名健康体检者为对照组。用实时荧光定量PCR法检测各组血清miR-370-3p、ANO1表达。术后随访3年,复发31例(复发组)、未复发63例(未复发组)。在线网站TargetScan预测miR-370-3p与ANO1的靶向关系,用Pearson相关法分析结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA表达的相关性;多因素Logistic回归分析结肠癌患者术后复发的影响因素;用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-370-3p、ANO1 mRNA对结肠癌患者术后复发的预测价值。结果结肠癌组血清miR-370-3p表达低于良性病变组、对照组(P均<0.05),ANO1 mRNA表达高于良性病变组、对照组(P均<0.05),良性病变组与对照组血清miR-370-3p、ANO1 mRNA表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。在线网站TargetScan预测miR-370-3p与ANO1在649~655和676~682处有结合位点,结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA中表达呈负相关(r=-0.609,P<0.05)。血清miR-370-3p、ANO1 mRNA表达在不同分化程度、TNM分期、侵犯浆膜、淋巴结转移结肠癌患者中差异有统计学意义(P均<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、侵犯浆膜、淋巴结转移和ANO1 mRNA≥1.64为术后复发的独立危险因素,miR-370-3p≥0.74为独立保护因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-370-3p、ANO1 mRNA联合预测结肠癌患者术后复发的曲线下面积(0.876)大于二者单独预测的曲线下面积(0.786、0.783),比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论结肠癌患者血清miR-370-3p低表达、ANO1 mRNA高表达,与肿瘤分化程度、TNM分期、侵犯浆膜、淋巴结转移和术后复发有关,二者联合预测结肠癌患者术后复发的价值较高。

ET-1对血管平滑肌细胞ANO1表达的影响及机制

目的探讨内皮素-1(ET-1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙激活氯通道anoctamin 1(ANO1)表达的影响及机制。方法以不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0、1000.0 nmol/L)ET-1处理VSMCs 24 h或用1.0 nmol/L ET-1处理不同时间(1、6、12、24、48 h),观察ET-1对ANO1蛋白表达的影响。用磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002阻断PI3K/AKT通路,检测磷酸化AKT(p-AKT)和ANO1蛋白表达的变化。采用组织贴块法进行大鼠胸主动脉VSMCs的原代培养,采用Western blot法检测ANO1蛋白水平。结果0.1~1000.0 nmol/L ET-1处理明显促进ANO1蛋白表达(F=4.302,P<0.05),以1.0 nmol/L ET-1作用最为显著(q=8.707,P<0.05)。用1.0 nmol/L ET-1处理细胞不同时间后,ANO1蛋白表达水平增加(F=4.856,P<0.05),其中ET-1作用12~48 h ANO1表达差异具有统计学意义(q=2.903~5.673,P<0.05)。采用LY294002(10μmol/L)预处理后,与ET-1组相比较,LY294002+ET-1组p-AKT和ANO1蛋白的表达水平均显著降低(F=26.340、12.460,q=11.220、8.512,P<0.05)。结论ET-1对VSMCs的ANO1表达具有明显的上调作用,该作用可能和激活PI3K/AKT信号通路有关。

ANO1抑制剂在AngⅡ诱导的VSMC增殖中的作用研究

目的研究钙激活氯通道蛋白1(ANO1)抑制剂在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法研究时间为2019年7月至2022年6月。体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5细胞株,AngⅡ刺激A7r5细胞建立细胞增殖模型,分别采用10 nmol/L、100 nmol/L、500 nmol/L不同浓度ANO1抑制剂(A01)干预,同时设置对照组(以等量生理盐水干预),采用Hoechst 33342荧光染色法观察ANO1抑制剂干预后AngⅡ诱导的VSMC形态学变化,蛋白免疫印迹法检测ANO1抑制剂干预后AngⅡ诱导的VSMC细胞凋亡相关蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果Hoechst 33342荧光染色结果显示,随着ANO1抑制剂浓度增加,呈亮蓝色的细胞愈来愈多(染色质凝聚、出现凋亡小体),即细胞凋亡数量越多。低剂量组、中剂量组、高剂量组凋亡率分别为(17.60±1.36)%、(36.30±3.50)%、(61.25±6.33)%,均高于对照组凋亡率(4.32±0.51)%,组间差异均有统计学意义(均P<0.05),即AngⅡ诱导的VSMC增殖后凋亡与ANO1抑制剂浓度之间存在剂量依赖性。蛋白免疫印迹法检测ANO1抑制剂干预后AngⅡ诱导的VSMC凋亡相关蛋白结果显示,不同组间EPK、AKT、CDK4、Cyclin D1蛋白相对表达量主效应差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组EPK、AKT、CDK4、Cyclin D1蛋白相对表达量均降低,且呈剂量依赖性,各组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ANO1抑制剂可显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖作用,其机制可能与抑制EPK/AKT信号通路及细胞周期进程有关。

钙激活氯通道ANO1在小鼠心肌细胞的表达及其功能鉴定

目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯度;应用RT-PCR检测小鼠心肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在小鼠心肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。结果:RT-PCR结果表明原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1 mRNA。免疫印迹实验结果显示原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1蛋白。荧光淬灭动力学实验证实表达于小鼠心肌细胞的ANO1具有钙激活氯通道典型的阴离子转运功能特性。结论:ANO1在小鼠心肌细胞中有明确表达,并具有钙激活氯离子通道特性,提示ANO1是钙激活氯通道的分子基础。

anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其离子通道特性

目的:探讨anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达情况,分析其离子通道特性,为研究钙激活氯离子通道的生理功能提供实验依据。方法:PCR方法获得anoctamin 1编码区基因,构建pcDNA3.1-anoctamin 1真核表达载体。脂质体转染anoctamin 1至CHO中,抗生素筛选获取稳定表达anoctamin 1的CHO株。应用RT-PCR技术和倒置荧光显微镜检测anoctamin 1于CHO中的表达和分布情况。应用卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L检测anoctamin 1离子通道的功能。以加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为实验组,未加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为对照组。结果:限制性内切酶酶切后的琼脂糖凝胶电泳和测序,目的基因anoctamin 1克隆至真核表达载体pcDNA3.1;RT-PCR和倒置荧光显微镜观察,CHO在mRNA和蛋白水平表达anoctamin 1,且anoctamin 1蛋白主要表达于CHO膜上;荧光淬灭动力学实验,CHO表达的anoctamin 1具有转运碘离子的作用,且实验组碘离子转运速度显著高于对照组(P<0.05)。结论:anoctamin 1可高效表达于CHO膜;CHO表达的anoctamin 1具有经典钙激活氯离子通道特性。

ANO1在口腔鳞癌中的表达及临床分析

目的探讨ANO1基因及蛋白在口腔鳞癌中的表达及其临床意义。方法用免疫组化SP法及Northern blot检测81例口腔鳞癌组织及相应正常组织的ANO1基因及蛋白的表达,并结合临床病理资料作相关分析。结果 ANO1在口腔鳞癌组织中的阳性表达明显高于正常组织(P<0.05);有淋巴结转移的口腔鳞癌组织ANO1阳性表达高于无转移的口腔鳞癌组织(P<0.05);随着口腔鳞癌临床分期的升高,ANO1的阳性表达率升高(P<0.05)。SCC-25细胞系的内源性ANO1表达31.57±5.31高于Hep-2的0.26±0.03(P<0.05)。SCC-25的侵袭能力明显强于Hep-2(P<0.05)。结论 ANO1可能在口腔鳞癌的发生和发展过程中起到重要作用。

稳定高表达ANO1对Hep-2细胞生物学性状的影响

目的:建立外源性ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,并观察其对Hep-2细胞生物学性状的影响。方法:设计引物,提取头颈鳞癌患者的临床标本DNA,并以其为模板行PCR,得到ANO1基因序列片段,将ANO1片段插入到PSG-5质粒,转染入Hep-2细胞株,将稳定高表达ANO1的Hep-2细胞株设为实验组,空白质粒转染的Hep-2细胞株设为对照组。并利用Western blotting法和免疫荧光实验检测已转染细胞,观察ANO1的表达情况。利用Boyden小室侵袭实验和黏附实验检测Hep-2细胞生物学性状的变化。结果:成功构建含ANO1片段的pSG-5质粒,Western blotting法检测结果显示,各组均出现目的条带,实验组的相对分子质量为100 000处条带明显较浓。间接免疫荧光实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞内显现出亮绿色荧光,而空白质粒转染的Hep-2细胞内仅有较暗、较浅的绿色荧光。Boyden小室侵袭实验和黏附实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞穿膜细胞百分比和黏附细胞百分比均明显高于对照组,两组结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功建立了ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,稳定高表达ANO1提高了Hep-2细胞的迁移能力。

ANO1稳定高表达对Hep-2细胞株生物学特性的影响

目的检测ANO1高表达对Hep-2细胞株生物学特性的影响。方法利用ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株先后进行流式细胞仪,软琼脂细胞生长实验,体外划痕愈合实验,SiRNA实验,SiRNA沉默ANO1的体外划痕愈合实验,DIDS阻断氯离子通道实验,以明确ANO1高表达对Hep-2细胞株生长、迁移及侵袭的影响。结果流式细胞仪检测细胞周期,结果显示实验组和空白组的G0/G1期比率差异无显著性(P>0.05);软琼脂细胞生长实验结果显示实验组和对照组差异无显著性(P>0.05);体外划痕愈合实验结果显示两者差异有显著性(P<0.05),表明ANO1高表达加快了Hep-2细胞的迁移速度;SiRNA沉默ANO1的体外划痕愈合实验结果显示两者差异有显著性(P<0.05),表明沉默ANO1可减缓Hep-2细胞的迁移速度。DIDS阻断氯离子通道实验结果显示两者差异有显著性(P<0.05),表明DIDS能有效的阻断ANO1的氯离子通道活性,并且减缓Hep-2细胞的迁移速度,再一次证明ANO1参与了Hep-2细胞的迁移活动。结论 ANO1高表达并未改变癌细胞的增殖速度,但却大大增加了头颈鳞癌细胞的移动能力,有望成为治疗头颈鳞癌的新靶点。

沉默钙激活氯通道ANO1促进人前列腺癌PC-3细胞的凋亡

目的探讨沉默钙激活氯通道（anoctamin1,ANO1）对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其分子机制.方法采用siRNA沉默ANO1在PC-3细胞的表达;采用ELISA、流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Apo-ONEHomogeneous Caspase-3/7Assay检测Caspase活性;采用基因表达谱分析检测沉默ANO1表达后PC-3细胞内基因变化,以及Real-timePCR和Westernblot验证.将全长ANO1基因（来源于NCBI）与pIRES2-EGFP融合,构建ANO1-IRES2表达载体,获得稳定表达ANO1的RWPE-1细胞系.结果ANO1在人前列腺癌PC-3细胞中呈高表达,沉默ANO1可诱导PC-3细胞凋亡,并增加肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor,TNF-α）表达和Caspase-3/7活性.TNF-α抑制剂来那度胺（lenalidomide）20nmol·L^-1可逆转沉默ANO1诱导的细胞凋亡.同时,ANO1在人正常前列腺细胞RWPE-1中呈低表达,过表达ANO1可降低RWPE-1细胞凋亡,同时降低TNF-α表达和Caspase-3/7活性.总之,ANO1表达与TNF-α呈负相关.结论沉默ANO1表达可诱导PC-3细胞凋亡,其机制可能与激活TNF-α介导的信号转导通路相关.

钙离子激活的氯离子通道蛋白ANO1在肿瘤发病机制中的作用

恶性肿瘤具有高发病率和高死亡率的特点,严重威胁人类的健康。尽管人们不断探索新的肿瘤治疗方法,但现阶段恶性肿瘤的预后仍然较差。因此深入研究肿瘤的发病机制,鉴定致癌基因,无论对于分子标志物的开发还是治疗靶点的确定都具有重要意义。近年的研究表明,恶性肿瘤常发生钙离子激活氯离子通道蛋白1（anoctamin 1,ANO1）的扩增和过表达,并且其功能改变与肿瘤的发生发展密切相关,因此本文将综述ANO1在恶性肿瘤细胞增殖、

基于TCGA数据库分析ANO1在结肠癌中的表达及临床意义

目的研究ANO1基因在结肠癌中的表达情况,进一步分析ANO1对结肠癌患者生存及预后的影响。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库获得结肠癌mRNA表达谱数据和相应的临床信息,分析ANO1的差异表达及其与临床病理因素的相关性;进一步探索ANO1表达量对结肠癌患者预后的影响,利用基因集富集分析(GSEA)预测可能与ANO1密切相关的信号通路。结果结肠癌肿瘤组织中ANO1相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.01);ANO1表达水平与N分期即淋巴结转移情况有关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤分期,以及肿瘤是否突破肌层、是否存在远处转移均无相关性(P>0.05);ANO1高表达患者总生存期明显缩短(P<0.05);Cox多因素分析可见年龄及ANO1表达状态是结肠癌患者不良预后的独立影响因素(P<0.05);ANO1高表达样本富集至钙离子信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、WNT及多个癌症相关通路等基因集。结论ANO1在结肠癌肿瘤中高表达是患者不良预后的指标,且与淋巴结转移情况明显相关。ANO1有望成为结肠癌重要的预后标志物。

钙激活氯通道蛋白ANO1在小鼠主动脉平滑肌细胞的表达及其功能鉴定

探讨钙激活氯通道蛋白ANO1在C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞中的表达及其功能特性。运用胶原酶消化法获得原代培养的小鼠主动脉平滑肌细胞,流式细胞术检测平滑肌细胞纯度;应用RT-PCR检测主动脉平滑肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在主动脉平滑肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。原代培养成功获得主动脉平滑肌细胞;RT-PCR结果分析表明,主动脉平滑肌细胞在mRNA水平有ANO1表达;免疫印迹显示主动脉平滑肌细胞蛋白水平有ANO1表达;荧光淬灭动力学实验证实表达在主动脉平滑肌细胞的ANO1具有阴离子转运功能,即钙激活氯通道典型特性。小鼠主动脉平滑肌细胞表达的ANO1是钙激活氯通道的分子基础。

钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞分化过程中的表达及其钙激活氯通道电生理特性变化

目的:研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用。方法:以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激活氯通道电流变化,采用免疫荧光标记技术和Western blot检测ANO1、α-SMA和vimentin在CFs和MFs细胞中的表达特征。结果:刚贴壁培养的CFs钙激活氯通道电流密度远高于MFs;ANO1主要表达于CFs和MFs的细胞核周围及细胞核上,少量表达于细胞膜;ANO1在刚贴壁的CFs中表达较弱,而在有分裂增殖趋向的MFs细胞中表达较为明显。结论:ANO1的表达与MFs的分化过程密切相关,提示其可能参与调节心肌纤维化进程。

ANO1蛋白在食管鳞状细胞癌中表达的瘤内异质性

目的:探讨ANO1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达的瘤内异质性及与肿瘤临床病理学特征的关系。方法:采用组织微阵列免疫组化法检测122例食管鳞癌每例4个肿瘤取材区域及相应正常组织中ANO1蛋白的表达情况,比较每例肿瘤不同取材区域的表达差异,分析ANO1蛋白表达情况与患者临床病理学特征的相关性。结果:ANO1蛋白在所有正常组织中呈阴性表达,而在肿瘤组织的表达阳性率为53.3%(65/122)。统计学分析显示,ANO1蛋白的表达情况在有、无淋巴结转移之间及不同肿瘤临床分期之间存在显著性差异(P<0.05)。在阳性表达的病例中,绝大多数(55/65)肿瘤内显示不同程度的ANO1蛋白表达异质性,其中32.3%(21/65)的病例存在不同取材区域之间较大的异质性。结论:ANO1蛋白在正常组织中呈阴性表达,在食管鳞状细胞癌组织中呈部分阳性表达,与临床病理学参数存在显著相关性(P<0.05)。而且,食管鳞状细胞癌ANO1蛋白表达存在明显的瘤内异质性,多位点取材有助于提高ANO1表达的检出率并可减少漏检。

ANO1抑制剂对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨钙激活氯通道ANO1抑制剂T16A(inh)-A01(A01)对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR-VSMC)增殖的影响。方法取SHR-VSMC及其对照WKY大鼠的血管平滑肌细胞(WKY-VSMC),均分为对照组(加入体积分数为0.001的DMSO)和A01处理组(分别加入浓度为1、5、10、20μmol/L的A01)。采用MTT法检测各组细胞存活率,Western blot法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)表达,观察A01对细胞增殖能力的影响。结果 MTT结果显示,与WKY-VSMC对照组比较,SHR-VSMC对照组的生长速度明显加快(t=3.702,P<0.01)。与SHR-VSMC对照组比较,A01处理组的细胞存活率呈剂量依赖性下降,其中10、20μmol/L A01的抑制作用比较差异有统计学意义(F=9.916,q=4.468~7.483,P<0.01)。Western blot结果显示,与WKY-VSMC对照组相比,SHR-VSMC对照组的PCNA表达水平显著升高(t=2.871,P<0.01),A01(20μmol/L)处理24h后,SHR-VSMC的PCNA表达部分被抑制(t=2.064,P<0.01)。结论 ANO1抑制剂能明显抑制SHR-VSMC的异常增殖。

不同抗原修复方法对食管鳞癌组织中ANO1蛋白染色的影响

目的:探讨不同修复条件及修复液对食管鳞癌组织中ANO1的阳性表达程度的影响,筛选优势抗原修复方法。方法:对30例食管鳞癌组织的石蜡切片分别采用高压-枸橼酸缓冲液修复法、高压-EDTA缓冲液修复法、微波-枸橼酸缓冲液修复法及微波-EDTA缓冲液修复法进行修复,检测ANO1蛋白免疫组化染色效果。结果:食管鳞癌组织中ANO1蛋白经高压-枸橼酸缓冲液修复后,着色强度较其他修复方法明显增强,且阳性定位准确、对比度清晰,极大降低免疫组化背景着色。结论:在ANO1蛋白免疫组织化学染色中,高压-枸橼酸缓冲液修复法优于其他抗原修复方法。