ANO1抑制剂在AngⅡ诱导的VSMC增殖中的作用研究

目的研究钙激活氯通道蛋白1(ANO1)抑制剂在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法研究时间为2019年7月至2022年6月。体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5细胞株,AngⅡ刺激A7r5细胞建立细胞增殖模型,分别采用10 nmol/L、100 nmol/L、500 nmol/L不同浓度ANO1抑制剂(A01)干预,同时设置对照组(以等量生理盐水干预),采用Hoechst 33342荧光染色法观察ANO1抑制剂干预后AngⅡ诱导的VSMC形态学变化,蛋白免疫印迹法检测ANO1抑制剂干预后AngⅡ诱导的VSMC细胞凋亡相关蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果Hoechst 33342荧光染色结果显示,随着ANO1抑制剂浓度增加,呈亮蓝色的细胞愈来愈多(染色质凝聚、出现凋亡小体),即细胞凋亡数量越多。低剂量组、中剂量组、高剂量组凋亡率分别为(17.60±1.36)%、(36.30±3.50)%、(61.25±6.33)%,均高于对照组凋亡率(4.32±0.51)%,组间差异均有统计学意义(均P<0.05),即AngⅡ诱导的VSMC增殖后凋亡与ANO1抑制剂浓度之间存在剂量依赖性。蛋白免疫印迹法检测ANO1抑制剂干预后AngⅡ诱导的VSMC凋亡相关蛋白结果显示,不同组间EPK、AKT、CDK4、Cyclin D1蛋白相对表达量主效应差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组EPK、AKT、CDK4、Cyclin D1蛋白相对表达量均降低,且呈剂量依赖性,各组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ANO1抑制剂可显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖作用,其机制可能与抑制EPK/AKT信号通路及细胞周期进程有关。

ANO1抑制剂对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞增殖影响

目的探讨ANO1抑制剂T16A inh-A01(A01)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路蛋白的影响。方法用AngⅡ、A01处理VSMC 24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,采用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达。结果与对照组相比,AngⅡ使细胞存活率升高至(121.2±2.4)%,10~20μmol/L A01能够明显抑制该作用(F=63.64,P<0.01)。AngⅡ处理细胞后,PCNA蛋白表达水平升高,该效应可被20μmol/L A01部分抑制(F=15.82,P<0.01)。此外,AngⅡ还增加了p-ERK蛋白的表达,该作用也可被A01显著抑制(F=36.01,P<0.01)。结论A01对AngⅡ诱导的VSMC增殖具有抑制作用,该作用可能与激活ERK信号通路相关。