青枯病生防菌ANTI-8098A菌株生物学特性的研究

对青枯病生防菌ANTI-8098A菌株的形态、生理生化特征和培养特性进行了初步鉴定和分析,初步确定了该菌的生物学特性。结果表明,该菌为芽孢杆菌(0.8μm×2.2μm),周生鞭毛,多为四联体形式,芽孢椭圆形。该菌甲基红反应阳性,接触酶反应阳性,水解利用淀粉,也能利用赖氨酸。其生长的最适温度在30～35℃。当pH为7.5时,发酵液中含菌量为最高(48 h),菌数达58.2×108个·ml-1,最佳pH值为7.5。在研究培养基营养时,比较了7种碳源和4种氮源,结果表明,葡萄糖是最好的碳源,氨基氮优于硝基氮或尿素。

青枯病生防菌ANTI-8098A菌株发酵过程氨基酸变化动态的研究

青枯病生防菌ANTI- 80 98A发酵过程的氨基酸测定结果表明 :ANTI - 80 98A的氨基酸代谢消耗发生在 0～ 2 4h ,消耗了 87.0 7%的总氨基酸 ;代谢累积发生在 2 4～ 4 8h ,4 8h的总氨基酸为 0h的 1 .6 7倍。在 1 7种测定的氨基酸中 ,1 6种氨基酸都表现出与总氨基酸类似的变化趋势 ,丝氨酸在 32h有最大值 ;根据含量大小可分为 3类 ,根据变异系数大小也可分为 3类 ,其中谷氨酸含量 ,丝氨酸变异系数最大。氨基酸种类特性的聚类分析结果表明 :当λ =1 7.5 0时 ,氨基酸变化可分为 4大类。发酵时间的聚类分析结果表明 :当λ=2 5 .36时 ,可分为 3大类 。

生防菌ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌不同致病力菌株抑制作用的差异性

采用共培养法测定了生防菌ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌强致病力菌株F-01-V和无致病力菌株F.1.3-010602-01-A的抑制作用,并以链霉素作参照。结果表明,生防菌ANTI-8098A对F-01-V的抑制作用较强,抑制率与生防菌培养液菌体数成正相关;对F.1.3-010602-01-A的抑制作用则较弱,菌体数为20.0×108cfu/ml的生防菌液对F.1.3-010602-01-A的抑制率为14.7%,而对F-01-V的抑制率高达99.5%。链霉素对F-01-V和F.1.3-010602-01-A都具有较强的抑制作用,抑制率与浓度成正相关,但是对F.1.3-010602-01-A的抑制作用更强:浓度为0.25U/ml的链霉素溶液,对F.1.3-010602-01-A的抑制率为50.0%,而对F-01-V的抑制率仅为3.3%。应用生防菌ANTI-8098制剂进行田间防治茄子青枯病的试验结果表明,生防菌制剂的防治效果达92.11%,显著地比农用链霉素的防效(72.81%)高。研究结果为阐述生防菌ANTI-8098对青枯雷尔氏菌的致弱现象提供了依据。

青枯病生防菌ANTI-8098A的微胶囊化技术

以明胶和阿拉伯胶为壁材,通过复凝聚法进行青枯病生防菌ANTI-8098A微胶囊的制备,研究壁材浓度、 生防菌ANTI-8098A发酵液添加浓度、搅拌速度、酸碱度和甲醛固化条件对微胶囊粒径、形状的影响。试验结果表 明.用2.5％明胶和2.5％阿拉伯胶为壁材制备青枯病生防菌ANTI-8098A微胶囊,条件为pH值4.0、生防菌发酵 液浓度10％～30％、搅拌速度400 r·min-1、固化时添加1％的甲醛溶液.生防菌的包被率可稳定在70％左右,微 胶囊为圆形.平均直径为30.8～57.3μm,生防菌微胶囊萌发率达93％以上。

生防菌ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌致病力的影响

经生防菌蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus菌株ANTI-8098A处理后,番茄青枯雷尔氏菌Ral-stoniasolanacearum强致病力菌株弱化为无致病力菌株,弱化指数由0.40转变为0.86,回接番茄苗发病率由100.0%转变为0。同时,生防菌处理后的无致病力菌株在培养24h以前菌体生长能力显著增加,其中在12h时生长速率增长最快,达到了5.6倍;紫外-可见光吸收值明显下降,OD450nm由0.5740降为0.2644;高效液相离子交换色谱的表征由前峰<后峰转变为前峰>后峰;对生防菌异源蛋白的吸附由2种蛋白质(97.4kD和116.0kD)转变为1种蛋白质(97.4kD)。结果表明:ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌具有致弱作用,并使其生理生化特性产生显著的变化。

生防菌ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌生物测定方法的研究

试验利用番茄组培苗对青枯雷尔氏菌接菌方法进行了比较 ,并进行了生防菌 ANTI- 80 98A对青枯雷尔氏菌体外抑制作用的生物测定。试验结果表明 ,灌根法接菌 6d后的平均死亡率为 84.40 % ,剪叶法接菌6d后番茄组培苗的平均死亡率为 98.34% ,剪叶法接种的番茄组培苗的发病速度高于灌根法。青枯雷尔氏菌浓度较低 (0 .1× 1 0 8以下 )时 ,灌根法接菌 6d后番茄组培苗的平均死亡率为 61 .5% ,剪叶法接菌 6d后番茄组培苗的平均死亡率为 1 0 0 .0 % ,剪叶法引起的发病率更高。采用剪叶法进行生防菌 ANTI- 80 98A对青枯雷尔氏菌体外抑制作用的结果表明 ,1 0 0和 2 0 0倍菌液处理组的番茄组培苗不发病 ,防效达 1 0 0 % ;30 0倍番茄组培苗第 7d发病率为 1 5% ,防效达 85%。

ANTI-8098A在土壤的存活能力测定及其对土壤微生物种群数量的影响

生防菌ANTI-8098A以制剂和菌粉的状态施用到菜园土壤后,研究其在土壤中的存活状况及其对土壤中细菌、真菌和放线菌种群数量的影响,结果表明:经ANTI-8098A制剂处理的土壤,14 d和60 d后ANTI-8098A的菌体数量分别为5.1×105cfu/g、3.6×104cfu/g,比用ANTI-8098A菌粉处理的土壤中ANTI-8098A的菌体数量高159和116倍;ANTI-8098A制剂处理14 d后,土壤中细菌、真菌和放线菌的种群数量依次为1.7×108cfu/g、2.8×105cfu/g、3.5×106cfu/g,分别比ANTI-8098A菌粉处理的高54.55%、7.69%和45.83%。

生防菌对青枯雷尔氏菌强致病力和无致病力菌株生长竞争的影响

采用共培养法研究了不同温度下青枯雷尔氏菌强致病力菌株F-01-V与无致病力菌株F-01-A之间的生长竞争、生防菌ANTI-8098A胞外物质对F-01-V和F-01-A生长的影响以及对F-01-V与F-01-A之间生长竞争关系的影响。结果表明,在15、20、25、30和35℃,菌株F-01-V、F-01-A单独静置培养48h后,F-01-V活菌数的增长率最高可达123.7%,F-01-A的活菌数下降,最大降幅为60.7%;当F-01-V与F-01-A等量混合培养时,F-01-V能继续增长,但48h后的增长率不如单独培养时的高,F-01-A的生长受到促进,使得这两个菌株的活菌数之比(F-01-V/F-01-A)与混合前的比值(0.97)相近;生防菌胞外物质对F-01-V有较强的抑制作用,抑制率与温度呈正相关,对F-01-A具有促进生长的作用,促长率也与温度呈正相关;生防菌胞外物质对F-01-V的抑制作用和对F-01-A的促进生长作用,导致在生防菌液、F-01-V与F-01-A共存的环境中,F-01-V与F-01-A之间的生长竞争向着有利于F-01-A的方向发展,使F-01-A成为优势菌株,特别是在30℃以上的温度下,F-01-V/F-01-A小于0.01,F-01-A的优势极为明显。