ANXA8在恶性肿瘤中的研究进展

膜联蛋白A8(Annexin A8,ANXA8)是膜联蛋白A(Annexins A)家族中的重要成员之一,其可与磷脂的游离Ca^(2+)结合,具有抗凝、抑制磷脂酶A2及凝血酶原等活性。ANXA8可调节EGF受体的信号传导和转运,在维持晚期核内体的组织功能与免疫稳态中发挥一定作用。近年来研究显示,ANXA8在多种肿瘤中高表达,可作为促癌基因参与到肿瘤的发生发展中,有望成为一个癌症诊断、治疗及预后的潜在分子标志物。本文就近年来ANXA8的生物学功能及在肿瘤中的研究进展进行回顾和综述。

PK-15细胞ANXA8膜联蛋白原核表达及多克隆抗体制备

为了制备ANXA8膜联蛋白的多克隆抗体,本研究以PK-15细胞ANXA8基因为模板,通过RT-PCR扩增得到猪源ANXA8基因,并克隆到pGEX6p1载体。加入His-tag标签,成功构建了重组质粒pGEX6p1-ANXA8,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化后的重组蛋白作为抗原,免疫SPF级昆明鼠,获得针对ANXA8蛋白的多克隆抗体。经过ELISA检测,抗体效价达1∶25600,经过Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测,抗体可以与ANXA8蛋白产生特异性结合反应。本试验成功地应用大肠杆菌表达ANXA8蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得鼠源阳性血清,为ANXA8蛋白结构及功能的研究奠定基础。

膜联蛋白A8在卵巢上皮性浆液性肿瘤中的表达及临床意义

目的:检测膜联蛋白A8(Annexin A8,ANXA8)在卵巢组织中的表达,探讨其表达与卵巢上皮性浆液性恶性肿瘤患者临床病理参数及预后的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测75例卵巢组织(正常卵巢组织组11例、卵巢浆液性良性肿瘤组13例、卵巢浆液性交界性肿瘤组17例、卵巢浆液性恶性肿瘤组34例)中ANXA8的表达,分析其与卵巢癌患者临床病理参数及疾病预后的关系。结果:ANXA8主要定位于细胞膜及细胞质,ANXA8在卵巢浆液性恶性肿瘤组中的高表达率(23/34,67.65%)明显高于正常卵巢组织组(1/11,9.09%)、卵巢浆液性良性肿瘤组(3/13,23.08%)及卵巢浆液性交界性肿瘤组(5/17,29.41%),差异有统计学意义(P分别为0.001、0.006、0.010)。在34例卵巢浆液性恶性肿瘤患者中,FIGOⅢ~Ⅳ期患者的ANXA8的高表达率(21/24,87.5%)明显高于FIGOⅠ~Ⅱ期患者(2/10,20.0%),差异具有统计学意义(P<0.001);盆腹腔残余病灶直径>1 cm患者的ANXA8高表达率(15/17,88.2%)明显高于残余病灶≤1 cm患者(8/17,41.2%),差异有统计学意义(P=0.010)。Kaplan-Meier生存分析表明,FIGO分期、淋巴转移、残余病灶、ANXA8的表达都是影响总生存期(OS)的重要因素(均P<0.05)。Cox多元回归分析表明ANXA8的高表达是影响卵巢浆液性恶性肿瘤患者预后的独立危险因素(P=0.019,HR=11.465,95%CI:1.498~87.757)。结论:ANXA8在卵巢上皮性浆液性恶性肿瘤组织中表达升高,且与卵巢癌不良预后有关,可用于临床监测卵巢上皮性浆液性恶性肿瘤患者病情变化。