PK-15细胞ANXA8膜联蛋白原核表达及多克隆抗体制备

为了制备ANXA8膜联蛋白的多克隆抗体,本研究以PK-15细胞ANXA8基因为模板,通过RT-PCR扩增得到猪源ANXA8基因,并克隆到pGEX6p1载体。加入His-tag标签,成功构建了重组质粒pGEX6p1-ANXA8,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化后的重组蛋白作为抗原,免疫SPF级昆明鼠,获得针对ANXA8蛋白的多克隆抗体。经过ELISA检测,抗体效价达1∶25600,经过Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测,抗体可以与ANXA8蛋白产生特异性结合反应。本试验成功地应用大肠杆菌表达ANXA8蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得鼠源阳性血清,为ANXA8蛋白结构及功能的研究奠定基础。