^(188)Re-PDGFR-β mRNA AODN的制备及其生物分布

目的探讨188Re标记大鼠血小板衍化生长因子受体-β(PDGFR-β)mRNA反义脱氧寡核苷酸(AODN)的方法及其生物学分布。方法先使长度为18个碱基的单链PDGFR-βmRNA AODN 与双功能螯合剂巯基乙酰基三甘氨酸-N-羟基丁二酰亚胺酯(NHS-MAG3)偶联,然后进行188Re标记,测定不同条件下的标记率,分析确定最佳标记条件。常规测定放化纯和比活度,并对标记物进行稳定性和正常小鼠体内分布实验。结果①最佳标记条件下平均标记率约为70%,经Sep-Pak C18层析柱纯化后放化纯>95%,比活度(7.4-11.1)×106 MBq/g;②加入抗氧化剂Vit c后,188Re-MAG3-AODN在室温下生理盐水中及37℃下新鲜人血清中稳定性良好,与血清蛋白结合率为8%-10%;③188Re- MAG3-AODN在正常小鼠体内较为稳定,在肾、肝中摄取较高。结论188Re-MAG3-AODN具有良好的稳定性。

“Integrating OD, HR and Change Management: Strategies for Sustained Success”--Insights on AODN and Foresights on Application of OD to Educational Systems

Organizations are facing unprecedented challenges in the 21st century and OD plays a significant role in creating effective responses to these changes.Not only has it been applied in the USA but gains popularity in dynamic Asian region under the megatrend of globalization and information technology.This paper gains insight from Asia Organization Development(OD)Network Summit and discusses future potential application of OD to educational systems.

C－sis、C－myc癌基因反义寡脱氧核苷酸抑制动脉平滑肌细胞增殖

用合成Ｃ－ｓｉｓ、Ｃ－ｍｙｃ癌基因反义寡脱氧核苷酸（ＡＯＤＮ）与兔动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣｓ）共同培养，旨在通过ＡＯＤＮ对癌基因的封闭，动态观察ＡＯＤＮ对ＡＳＭＣｓ增殖的影响，探讨ＡＯＤＮ对动脉粥样硬化（ＡＳ）尤其是冠脉成形术后再狭窄（ＲＡＣＡ）的防治作用。结果表明：①Ｃ－ｓｉｓＡＯＤＮ、Ｃ－ｍｙｃＡＯＤＮ具有明显抑制ＡＳＭＣｓ增殖作用，其抑制作用随浓度增加而加强；②Ｃ－ｓｉｓＡＯＤＮ＋Ｃ－ｍｙｃＡＯＤＮ具有协同抑制ＡＳＭＣｓ增殖作用；③Ｃ－ｓｉｓＡＯＤＮ、Ｃ－ｍｙｃＡＯＤＮ明显抑制ＤＮＡ合成，二者联合应用，具有加强抑制ＤＮＡ合成作用。研究结果提示：Ｃ－ｓｉｓ、Ｃ－ｍｙｃ癌基因ＡＯＤＮ抑制ＡＳＭＣｓ增殖，尤其是二者联合应用，有可能为ＡＳ，特别是ＲＡＣＡ防治提供一个新的途径。

核因子-кB反义核酸对TNF-α表达的实验研究

目的:研究核因子-кB(N F-кB)反义寡核苷酸(A O D N)对TN F-α表达的影响,探讨N F-кB与TN F-α的关系及反义核酸技术作用的特点。方法:将不同浓度经硫代磷酸化修饰的反义寡核苷酸(PS-A O D N)导入培养的R A W264.7细胞中与脂多糖预孵育,设立空白对照组和错义寡核苷酸M O D N()()组。分别采用免疫细胞化学和酶联免疫吸附法检测细胞中N F-κB和TN F-α表达。结果:A O D N组的N F-кB、TN F-α表达较空白对照组及M O D N组明显降低(P<0.05)。结论:反义寡核苷酸在一定时间内能有效地阻抑N F-кB在脂多糖刺激下的表达,从而抑制TN F-α的表达。

C-sis反义寡脱氧核苷酸抑制兔主动脉平滑肌细胞增殖的时效关系

为观察局部处理C-sis反义寡脱氧核苷酸对平滑肌细胞增殖及新生内膜肥厚的抑制作用、球囊导管损伤60只新西兰白兔胸主动脉后。经导管局部处理每只兔1mg（2mL）C-sis反义或正义寡脱氧核苷酸或2mL生理盐水,于损伤后第3、7、14天和第28天，用免疫组织化学方法结合图象分析，评价损伤动脉内膜平滑肌细胞增殖及新生内膜改变。结果发现．C-sis反义寡脱氧核苷酸明显抑制内膜平滑肌细胞增殖，最高抑制作用出现于损伤后第3天；抑制百分率达69．8％，第7、14天和第28天的抑制率依次降低，分别为59％、51.9％和47.8％；而新生内膜面积的抑制百分率分别是48．9％、77．8％、72．6％和70．8％，与生理盐水处理组相比，平滑肌细胞数及新生内膜面积均有明显降低。研究结果表明，局部处理C-sis反义寡脱氧核苷酸，通过反义途径，可明显抑制球囊损伤主动脉内膜平滑肌细胞增殖，其抑制作用随时间而降低，同时，对新生内膜面积肥厚的最大抑制出现于第7天，随后降低，提示局部处理C-sis反义寡脱氧核苷醚，有可能降低再狭窄的发生。

反义寡脱氧核苷酸抑制大鼠肝细胞载脂蛋白B的表达

为探讨反义寡脱氧核苷酸对大鼠肝细胞载脂蛋白Ｂ 基因的表达是否具有调控作用，并探索其作用机制。以合成的载脂蛋白Ｂ基因正、反义寡脱氧核苷酸加入培养的肝细胞，测量载脂蛋白Ｂ１００ 含量；用反转录聚合酶链反应评价载脂蛋白Ｂ基因的表达。结果发现，载脂蛋白Ｂ基因反义寡脱氧核苷酸可明显下调载脂蛋白Ｂ１００ 的ｍＲＮＡ表达，５、１０、１５ 和２０ μｍｏｌＬ的反义寡脱氧核苷酸，可分别降低肝细胞载脂蛋白Ｂ浓度的２６．６％ 、３４．２％ 、３４．２％ 和４５．８ ％ ，抑制效果呈剂量依赖性。此结果说明，载脂蛋白Ｂ基因反义寡脱氧核苷酸能抑制载脂蛋白Ｂ基因的表达，降低载脂蛋白Ｂ１００ 水平， 其可能的作用机制是针对ｍＲＮＡ的合成， 进行转录和翻译水平上的阻断。

p38MAPK反义寡核苷酸对鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶p38(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AODN)对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞。通过脂质体转染p38MAPK AODN到血管平滑肌细胞(VMSC)。另设p38MAPK正义寡聚脱氧核苷酸(SODN)对照组和空白对照组。用流式细胞仪检测细胞增殖。结果:AODN明显抑制血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖(P<0.05～<0.01),其抑制作用呈剂量依赖性。结论:p38MAPK反义寡聚脱氧核苷酸能抑制大鼠的VSMC增殖,提示VSMC增殖与p38信号途径有关。

VEGF和反义c-myc对移植血管狭窄的影响

目的:探讨联合应用血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因和c-myc反义寡核苷酸(Anti-sense oligodeoxynucleotides,AODN)对移植血管狭窄的影响。方法:选40只新西兰雄性白兔随机分为对照组(A组)、VEGF组(B组)、反义c-myc组(C组)、VEGF加反义c-myc组(D组),每组10只;将同一只兔的左、右髂外动脉各1 cm对换移植,移植血管用VEGF和(或)c-myc-AODN液浸泡转染;术后4周显微镜下测量移植血管的内膜厚度、内膜面积和移植血管狭窄率,并用免疫组化法染色计数VEGF和c-myc阳性细胞数。结果:D组移植血管的内膜厚度、内膜面积、管腔狭窄程度和c-myc阳性细胞数均明显低于A、B、C组,同时D组移植血管的VEGF阳性细胞数明显高于其它组。结论:联合应用VEGF和c-myc-AODN基因治疗能有效抑制移植血管平滑肌细胞(Vacular smooth muscle cells,VSMC)增殖,阻止内膜增生,防止移植血管狭窄。

转化生长因子-β1反义寡核苷酸减轻环孢素A对大鼠的慢性肾毒性

目的以阳离子脂质体介导的转化生长因子-β1(TGF-β1)反义寡核苷酸(AODN)阻止TGF-β1的表达,观察其对大鼠使用环孢素A(CsA)后慢性肾毒性的防治作用。方法低盐饮食条件下,给SD雄性大鼠腹腔注射CsA 15 mg·kg-1·d-1,持续28 d;另两组在腹腔注射CsA的同时,于第15、20 d分别予以TGF-β1硫代磷酸AODN和阳离子脂质体包裹的TGF-β1硫代磷酸AODN尾静脉注射。检测各组血清肌酐的改变,组织形态学的变化;免疫组织化学法及聚合酶链式反应(RT- PCR)检测TGF-β1蛋白及其mRNA在组织的表达。结果成功地模拟了CsA对大鼠慢性肾毒性的病理改变。阳离子脂质体介导的TGF-β1硫代磷酸AODN可以显著抑制TGF-β1的表达,减轻CsA 所致慢性肾毒性的病理改变,并能改善肾功能。结论阳离子脂质体介导的TGF-β1硫代磷酸AODN通过抑制TGF-β1的表达,有效防治CsA对大鼠的慢性肾毒性。