黄芪多糖APS-Ⅱ-2对脂多糖所致绒毛膜羊膜炎诱发的肺泡化阻滞的改善作用

目的·探讨黄芪多糖APS-Ⅱ-2对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致绒毛膜羊膜炎诱发的肺泡化阻滞的改善作用及可能机制。方法·对孕16.5 d SD大鼠羊膜腔注射LPS,构建支气管肺发育不良模型。根据羊膜腔注入药物,将孕鼠随机分为对照组(Saline组)、LPS+Saline组、LPS+APS-Ⅱ-2组。LPS+APS-Ⅱ-2组新生鼠出生后第1~3日腹腔注射APS-Ⅱ-2溶液[50 mg/(kg·d)];Saline组和LPS+Saline组腹腔注射等体积生理盐水。取第1、3日新生鼠肺组织,苏木精-伊红(H-E)染色观察病理改变。SD大鼠骨髓巨噬细胞培养,分为PBS组、LPS+PBS组、LPS+APS-Ⅱ-2组,利用全转录组测序技术(RNA-sequence)筛选APS-Ⅱ-2抑制炎症的可能靶点。结果·APS-Ⅱ-2可改善新生鼠肺组织病理状态,LPS+APS-Ⅱ-2组大鼠出生第1日肺泡数较LPS+Saline组增多(P=0.033),第1、3日次级突起增多(P=0.002,P=0.026),第1、3日平均内衬间隔减小(P=0.006,P=0.004)。RNA-sequence结果显示APS-Ⅱ-2抑制一些炎症因子表达,如Toll样受体Tlr3、Tlr7、Tlr8;也促进一些有抗炎作用因子的表达,如花生四烯酸15-脂加氧酶Alox15和CD74。结论·APS-Ⅱ-2可通过调节炎症反应减轻LPS诱发的绒毛膜羊膜炎,进而改善支气管肺发育不良模型肺组织病理状态。

以转录因子AP-1为靶点的decoy ODNs对大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的抑制作用

目的探讨AP-1decoy ODNs对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及细胞胶原合成的抑制作用,为高血压心肌纤维化的防治提供理论依据。方法通过2.5%胰酶分离培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,羟脯氨酸比色法测定培养细胞上清胶原合成,流式细胞分析技术(FCM)检测细胞周期,分别观察不同浓度的AP-1decoy ODNs对AngⅡ诱导的CFs增殖,胶原的合成及细胞周期的影响。结果CFsMTT比色法显示10-7mmol/LAngⅡOD490值明显高于空白对照组(0.451±0.014和0.342±0.096,n=9,P<0.05);100nmol/L和200nmol/L组的OD490值分别为0.329±0.04和0.214±0.25,均较AngⅡOD490值显著降低(P<0.05);AngⅡ作用24h后能够显著增加CFs胶原合成,decoy ODNs可以抑制这种作用,其中100nmol/L和200nmol/L均有显著性抑制作用。FCM细胞周期分析表明,AngⅡ作用24h后能够明显增加S期细胞百分率(21.93±0.71%和10.93±0.2%,n=6,P<0.01),随着decoy ODNs浓度增加,S期细胞百分率明显降低,其中100nmol/L和200nmol/L作用具有显著性意义(P<0.01)。但突变的decoy ODNs对CFs的增殖及胶原合成均没有明显的影响。结论AP-1decoy ODNs可以抑制AngⅡ诱导的CFs增殖和胶原的合成,其作用机制可能与影响CFs细胞周期有关。

熊果酸对肝星状细胞内AP-1、NF-κB表达的影响

目的明确NOX对血管紧张素II(AngⅡ)诱导的HSC转录因子激活蛋白-1(AP-1)和核因子-κB(NF-κB)的调控作用及熊果酸(UA)干预后的影响。方法将培养激活的HSC-T6细胞株分为:AngⅡ组,给予AngⅡ(1μmol/L)刺激细胞;空白对照组:不加任何药物;各干预组分别给予UA(50μmol/L)、NOX抑制剂DPI(20μmol/L)预处理30 min,再加入AngⅡ处理不同时间。采用活性氧检测试剂盒和荧光酶标仪检测其余各组细胞内荧光强度;用电泳迁移率(EMSA)测定细胞内AP-1、NF-κB的活性。结果 HSC-T6经药物作用30 min后,AngⅡ组DCF荧光强度比空白对照组明显升高(P<0.05),分别给予UA、DPI干预后细胞内DCF荧光强度均显著低于AngⅡ组(P<0.05),AngⅡ+UA组与AngⅡ+DPI组相比较DCF荧光强度无明显差异(P>0.05);用AngⅡ刺激HSC-T6细胞1 h后,AngⅡ组AP-1、NF-κB的活性明显高于空白对照组(P<0.05),分别给予UA、DPI干预后,细胞内AP-1、NF-κB的活性均显著低于AngⅡ组;AngⅡ+UA组与AngⅡ+DPI组相比较AP-1、NF-κB的活性无明显差异(P>0.05)。结论 NOX产生的ROS介导AngⅡ刺激HSC转录因子AP-1和NF-κB的活化,熊果酸通过抑制HSC内ROS的生成阻断AP-1、NF-κB的活化。

妊娠期高血压疾病患者甲襞微循环及血清Apelin、NO、UⅡ、Cys-c的变化

目的：研究妊娠期高血压疾病患者甲襞微循环及血清Apelin、一氧化氮（NO）、UⅡ、胱抑素-C（Cys—c）的变化。方法：选取2012年1月～2013年12月本院收治的58例妊娠期高血压疾病患者为观察组，同期的58例健康孕妇为对照组，比较两组及轻度、中度及重度妊娠期高血压疾病患者甲襞微循环和血清Apelin、NO、UⅡ、Cys-C水平。结果：观察组的甲襞微循环积分及其他检测指标均差于对照组，血清Apelin、UⅡ及Cys-C均高于对照组，而血清NO则低于对照组，同时轻度、中度及重度妊娠期高血压疾病患者各指标的水平差异亦有统计学意义（P均〈0．05）。结论：妊娠期高血压疾病患者甲襞微循环及血清Apelin、NO、UⅡ、Cys-c的变化较大，且轻度、中度与重度患者间也存在明显差异，可作为监测患者疾病状态的重要指标。

可乐丽菲露AP-X用于乳牙非创伤性修复的临床研究

目的分析评价采用可乐丽菲露AP-X复合树脂填充,行非创伤性修复技术（ART）治疗乳牙龋的临床疗效。方法选取2005年5月至2006年9月来沈阳市儿童医院口腔科就诊的5～8岁乳磨牙有龋齿的儿童196例316个患牙进行修复治疗,随机将患牙分为两组,均用ART清除腐质,治疗组患牙160个,用可乐丽菲露AP-X复合树脂充填;对照组患牙156个,用FX-Ⅱ玻璃离子水门汀充填。观察两组充填物的成功率、继发龋发病率情况及不同类别洞型填充物保留情况。结果随访2年后发现两种充填材料在充填物成功率及继发龋发病率方面均无显著差异（P〉0.05）,两种材料的Ⅰ类洞充填成功率分别为90.54%和90.28%,明显好于Ⅱ类洞（P〈0.01）。结论可乐丽菲露AP-X复合树脂与FX-Ⅱ玻璃离子水门汀一样适合作ART修复龋洞的充填材料。

江西某铜硫矿石的综合回收试验研究

江西某铜矿中铜硫回收工艺流程较为复杂,在对其铜硫矿石工艺矿物学研究的基础上,为提高铜硫及伴生金银的综合回收率和简化工艺流程,进行了浮选工艺优化条件试验。结果表明,在捕收剂AP-Ⅱ用量为28 g/t、矿细度为-0.074 mm质量占比65%、石灰用量2400 g/t及起泡剂用量21 g/t的条件下,进行“3粗3扫4精”闭路流程试验,获得最终指标为铜精矿中铜、金、银品位分别为20.22%、5.52 g/t、108.37 g/t,回收率分别为82.70%、18.36%、42.94%;硫精矿中硫、金、银品位分别为45.86%、2.13 g/t、12.58 g/t,回收率分别为90.33%、57.08%、40.16%。在保证精矿铜品位的前提下,铜精矿铜回收率提高了1.85%,简化了浮选工艺步骤,减少了药剂消耗,同时获得一定品位的金、银,保证了伴生金银的综合回收利用。

淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ通过AP-1/NFATc1信号通路调控破骨细胞生成

目的:观察淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ在体外对破骨细胞(OCs)分化形成的影响,并探索其通过AP-1/NFATc1信号通路的调控机制。方法:首先采用AP-1和NFAT核转录因子报告基因进行体外活性筛选,再通过体外RAW264.7细胞诱导OCs评价药物对OCs生成的影响,最后通过AP-1/NFATc1信号通路相关基因表达,探索其可能的作用机制和靶点。结果:淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能抑制AP-1和NFAT报告基因表达,且在48h内对前体细胞RAW264.7细胞无明显生存抑制作用。淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能抑制体外诱导OCs生成,且淫羊藿次苷Ⅱ明显强于淫羊藿次苷Ⅰ(P<0.05)。淫羊藿次苷Ⅰ能显著抑制AP-1/NFATc1信号通路中c-Fos和Fra-1基因表达(P<0.05),而淫羊藿次苷Ⅱ对c-Fos、Fra-1、Fra-2和NFATc1基因表达均有显著抑制作用(P<0.05)。结论:淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ在体外均能通过AP-1/NFATc1信号通路抑制OCs生成,且淫羊藿次苷Ⅱ作用较淫羊藿次苷Ⅰ更优,提示淫羊藿可能在体内通过生物转化进一步增强其骨保护作用。

黄芪多糖对2型糖尿病大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18的影响作用

目的:观察黄芪多糖对糖尿病大鼠血糖的影响及血清IL-1β、IL-6、IL-18的影响作用,探讨黄芪多糖降糖的作用环节。方法:建立糖尿病大鼠模型,筛选出现多饮、多尿、多食,血糖升高(FBG≥16.7mmol/L)的对象作为糖尿病模型组,测量正常对照组及糖尿病模型组大鼠的血清FBG、FINS、IL-1β、IL-6、IL-18水平,然后将模型组随机分为四组,分别为黄芪多糖高剂量(0.8g·kg-1·d-1)、中剂量(0.4g·kg-1·d-1)、低剂量(0.2g·kg-1·d-1)及阳性对照(等量生理盐水灌胃)组。4周后空腹采集血液标本,尾静脉测大鼠血糖,放射免疫法测胰岛素,ELISA法测血清IL-1β、IL-6、IL-18。结果:1糖尿病模型组大鼠饮水、饮食量及尿量明显高于正常对照组,体重较前有明显下降,正常对照组无明显变化。2黄芪多糖治疗组饮水量、饮食量及体重减轻得到明显控制,阳性对照组无明显改善。3糖尿病模型组大鼠血清FBG、FINS、IL-1β、IL-6、IL-18水平明显升高,与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01),黄芪多糖治疗组较阳性对照组FBG、FINS、IL-1β、IL-6水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);黄芪多糖治疗组IL-18水平低于阳性对照组,但无统计学意义(P>0.05);黄芪多糖高、中、低剂量组间FBG、FINS、IL-1β、IL-6、IL-18水平无显著差异(P>0.05)。结论:糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素水平、IL-1β、IL-6、IL-18水平均升高,表明高脂+STZ诱导的糖尿病大鼠可出现胰岛素抵抗和IL-1β、IL-6、IL-18炎症因子的增高,IL-1β、IL-6、IL-18炎症因子可能参与了胰岛素抵抗的发生;黄芪多糖可降低糖尿病大鼠血糖水平及血清胰岛素水平,也可降低糖尿病大鼠血清IL-1β及IL-6,从而改善胰岛素抵抗,但对IL-18的影响作用不够显著。

黄芪多糖中抗炎组分的结构及其活性的初步研究

目的从黄芪中分离得到两种多糖,分别对两种多糖的化学结构和抗炎活性进行分析。方法采用水提醇沉法提取黄芪总多糖(Astragalus polysaccharides,APS),膜分离法得到两种多糖APS-Ⅰ和APS-Ⅱ。高效凝胶色谱法(HPGPC)测定APS-Ⅰ和APS-Ⅱ的分子量,高效液相色谱法(HPLC-UV)测定两者的单糖组成,通过红外(IR)及甲基化分析对APS-Ⅰ和APS-Ⅱ的结构进行表征。将巨噬细胞株RAW264.7培养于含不同浓度APS、APS-Ⅰ和APS-Ⅱ的培养基,MTT法筛选合适的实验浓度,采用1μg/ml LPS诱导巨噬细胞株RAW264.7建立细胞炎症模型,应用不同浓度APS、APS-Ⅰ和APS-Ⅱ处理被LPS诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7,利用ELISA试剂盒测定各组细胞培养上清液一氧化碳(NO)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果APS由APS-Ⅰ(大于2000 kD)和APS-Ⅱ(10 kD)组成;两者均由鼠李糖(Rha)、葡萄糖(Glu)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)和半乳糖醛酸(GalA)5种单糖组成,APS-Ⅰ中Rha,Gal A,Glu,Gal,Ara的比例为0.1∶0.39∶17.2∶13.4∶1;在APS-Ⅱ中为0.14∶0.14∶24.04∶9.6∶1;红外光谱显示APS-Ⅰ以β型糖苷键为主;APS-Ⅱ同时包含α型糖苷键和β型糖苷键;甲基化分析显示两者单糖残基的主要连接方式不同,分别为:→4)-D-Glu-(1→,→6)-D-Gal-(1→,→4)-L-Ara-(1→和→4)-D-Glu-(1→,→3,5)-D-Glu-(1→,→3,4)-D-Gal-(1→。MTT实验表明APS、APS-Ⅰ和APS-Ⅱ在0-100μg/ml质量浓度范围内无细胞毒性。与空白对照相比,1μg/ml LPS可显著上调巨噬细胞株RAW264.7中NO、TNF-α和IL-10的表达(P<0.05)。应用APS、APS-Ⅰ和APS-Ⅱ干预,可抑制促炎因子NO和TNF-α表达上调,促进抑炎因子IL-10表达上调(P<0.05),体外抗炎活性顺序为APS-Ⅰ>APS>APS-Ⅱ。结论APS-Ⅰ的体外抗炎活性优于APS-Ⅱ,可作为潜在的抗炎药物进行开发。

肝癌标记物研究进展

本文评述 AFP 及其它肝癌标记物的研究进展。除 AFP 外,诊断价值肯定者有 GGTⅠ、5′NPDV、酸性同工铁蛋白、AP等;另一类有诊断价值,但特异性或敏感性稍差,如 AAT、AAC、ALD-A、ALP-I 等;第三类仅具参考价值或尚待进一步研究,如铁蛋白、转铁蛋白、铜氧化酶等十余种。经筛选、比较,认为 GGTI 为另一不亚于 AFP 的肝癌标记物,二者联检可互补诊断.建议对肝癌高危人群定期复查 AFP,GGTI、SGPT、HBsAg 及 B 型超声,可以提高肝癌早期诊断率。

基于高分辨质谱技术的黄芪多糖APS-Ⅱ酶解活性寡糖特征分支位点的研究

黄芪多糖是黄芪中免疫调节活性最强,含量最为丰富的物质,具有抗肿瘤、抗病毒、免疫促进等多种生物活性,临床应用广泛。前期研究发现黄芪多糖主要由2种不同相对分子质量多糖APS-Ⅰ(>2000 kDa)、APS-Ⅱ(10 kDa)组成,APS-Ⅱ(10 kDa)为黄芪多糖中活性最强组分,并采用α-1,4-葡聚糖内切酶将APS-Ⅱ降解为寡糖,通过体外免疫活性筛选发现2~9糖整体免疫活性较低,而10~14糖具有较强的免疫活性,且活性优于未降解的APS-Ⅱ。为了探究APS-Ⅱ降解寡糖发挥免疫活性的关键结构,本文采用MALDI-TOF-MS生物质谱以及高分辨质谱仪器ESIQ Exactive-MS对APS酶解寡糖进行解析,通过对比发现10~14糖中存在1→4和1→6两种连接方式共存的支链结构,推测1→4和1→6两种连接方式共存的支链结构为APS-Ⅱ发挥免疫活性的关键结构,为黄芪多糖和寡糖的构效关系研究奠定理论基础。

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送纸部：采用最合适瓦楞纸板的下吸式送纸系统，吸纸及送纸轮装置保证翘曲纸板的准确送入。

黄芪活性多糖APS-Ⅱ的酸降解及其降解寡糖的结构和免疫活性研究

课题组前期研究发现黄芪免疫活性多糖APS-Ⅱ具有较强的免疫活性,鉴于其分子量较大且结构复杂,本文旨在建立APS-Ⅱ酸降解的最优方法,对降解产物进行结构初探与分离制备以后,通过体外免疫细胞实验筛选免疫活性最强的寡糖活性中心。本研究以APS-Ⅱ为研究对象,采用“自上而下”的研究策略,首先通过单因素试验和正交试验优化了APS-Ⅱ酸降解的最佳条件,接着以最佳条件制备的黄芪寡糖通过亲水作用色谱-电喷雾电离源-高分辨飞行时间质谱进行结构解析,然后将黄芪寡糖通过纯化制备色谱仪分离制备不同聚合度的寡糖片段,最后利用体外免疫细胞从多角度筛选免疫活性中心片段。结果表明APS-Ⅱ的最佳酸解条件为水解温度80℃,三氟乙酸浓度1.0 mol·L-1,水解时间1 h;该降解条件具有良好的重复性;降解产物黄芪寡糖含有主链1→4连接的六碳醛聚糖结构;6个寡糖片段的免疫活性筛选实验表明分子量较大的寡糖具有更强的免疫促进作用,推测黄芪寡糖的免疫活性中心位于聚合度DP9~DP19的糖链中。动物福利和实验过程均遵循山西大学动物伦理委员会的规定。该结果对其他中药寡糖的研究具有一定示范作用,为黄芪寡糖的结构表征及构效关系研究奠定基础,同时可以促进黄芪寡糖药物的开发。

降钙素原、C-反应蛋白、APACHEⅡ评分对高原地区急性胰腺炎的早期评估价值分析

目的:探讨血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、急性生理及慢性健康评分标准Ⅱ(APACHEⅡ评分)对高原地区急性胰腺炎(AP)的早期评估价值。方法:分析我院急诊重症医学科2010年9月—2014年9月以来收治的急性胰腺炎(AP)患者52例,其中急性水肿型(轻型)(MAP)30例,即MAP组,急性出血坏死型(重型)(SAP)22例,即SAP组。分别于入院时和入院后48小时抽血检测PCT、CRP水平,并对其进行APACHEⅡ评分,比较两组间各时间点PCT、CRP水平变化及APACHEⅡ评分差异。结果:入院时两组PCT、CRP水平和APACHEⅡ评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。入院后48小时,相较于MAP组,SAP组PCT、CRP水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。入院后48小时,两组间APACHEⅡ评分,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:APACHEⅡ评分对早期急性胰腺炎的病情评估价值不大,PCT与CRP可作为AP病情评估的指标,但可能要在入院后48小时才有效。

黄芪多糖对肾间质纤维化大鼠的保护作用

目的:观察黄芪多糖(APS)对大鼠肾间质纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用单侧输尿管结扎的方法制造大鼠肾间质纤维化模型,将50只大鼠随机分成假手术组、模型组、黄芪多糖高剂量组(1g/kg)、黄芪多糖低剂量组(0.5g/kg)和氯沙坦组(0.01g/kg),每组10只,给予相应药物治疗21d,假手术组与模型组给予等量0.9%氯化钠溶液。实验末取大鼠左侧肾组织,采用免疫组织化学法检测肾间质中转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)的表达情况;采用放免法检测组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的表达情况。结果:与假手术组大鼠比较,模型组大鼠TGF-β1、MMP-2、TIMP-1和AngⅡ表达明显升高(P<0.01),黄芪多糖高、低剂量组和氯沙坦组大鼠TGF-β1、TIMP-1和AngⅡ表达明显降低,MMP-2表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪多糖可以在一定程度上抑制肾间质纤维化的形成,保护肾脏,与其上调肾间质中MMP-2表达,下调TGF-β1、TIMP-1和AngⅡ表达有关。