AP2M1抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭

目的探究接头相关蛋白质复合体2亚基μ1(AP2M1)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖和侵袭的调控作用。方法将人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-LY8分为对照组、NC-LV组、AP2M1-LV组。用Lipofectamine 2000进行细胞转染。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测AP2M1、表皮生长因子受体(EGFR)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和p-蛋白质激酶B(AKT)蛋白表达。结果与对照组相比,AP2M1-shRNA组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均降低(P<0.05),相对细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05);EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均升高(P<0.05)。与对照组相比,AP2M1-LV组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),相对细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均降低(P<0.05),EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论AP2M1的过表达部分通过抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路来抑制DLBCL细胞的增殖和侵袭。

黄姑鱼转录因子激活蛋白AP2α的克隆和特征分析

转录因子激活蛋白AP2α是一类能特异地结合DNA的核转录因子,参与动物胚胎发育的调节、细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生以及免疫反应等多种生物过程。课题组前期通过基因组关联分析(GWAS)发现,AP2α是黄姑鱼(Nibea albiflora)抗哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的候选基因。本研究克隆了黄姑鱼转录因子AP2α,其开放阅读框(ORF)为1275 bp,编码424个氨基酸;所编码的AP2α蛋白质N端是富含脯氨酸和谷氨酰胺(P/Q-rich domain)的反式激活结构域,中间是中心基本结构(central basic region),C端为高度保守的helix-span-helix基序,负责结合DNA和蛋白质二聚化。氨基酸序列多重比对表明,AP2α保守性强,与所检测的鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物同源性在84.63%以上。实时荧光定量PCR检测结果显示,AP2α基因的mRNA广泛分布于所检测的黄姑鱼9种组织样品中,其中血液中的表达量最高;受哈维氏弧菌攻毒感染后,肝脏、脾脏和头肾中AP2α表达量均明显升高,特别是在肝脏中,AP2αmRNA表达水平在24 h时达到攻毒前的39倍。通过构建重组真核表达质粒pGEFP-AP2α并转染HEK293T细胞进行亚细胞定位研究的结果显示,AP2α分布于HEK293T细胞的细胞核中。进一步通过原核克隆表达获得了可溶性的GST-AP2α融合蛋白。以上结果表明,AP2α在黄姑鱼抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。本研究对AP2α在硬骨鱼类先天免疫中的重要功能提供了新的见解,为深入研究黄姑鱼的分子免疫机理和抗病分子育种奠定了基础。

AP2/ERF蛋白调控植物的非生物胁迫应答机制

AP2/ERF蛋白是植物所特有的转录因子,参与植物生长发育以及调控生物和非生物胁迫反应。研究表明,AP2/ERF蛋白不仅与其它类型转录因子共同形成复杂的转录调控网络,通过多种信号转导途径调控功能基因的表达,而且可以作为外界信号的感应因子调控植物的非生物胁迫应答。主要从AP2/ERF蛋白在植物激素合成、蜡质合成、低氧胁迫应答、ROS清除以及蛋白质修饰等方面综述了AP2/ERF蛋白在植物非生物胁迫应答中的研究进展,并展望了今后的研究方向。

基于奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿rAP1-BP-AP2重组蛋白的间接ELISA方法的建立

为建立一种快速准确高效的检测奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿抗原相应抗体的检测方法,本研究以牛乳腺炎无乳链球菌Ia型PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP1、AP2及骨架蛋白BP 3基因串联表达的重组蛋白为ELISA包被抗原,通过方阵滴定法优化反应条件,建立了奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体的间接ELISA检测方法。优化后抗原的最佳包被量为5.0μg/孔,血清样品最佳稀释倍数为1∶40,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶5 000。对S.agalactiae、S.pyogens、E.coli、S.aureus、S.epidermidis阳性血清进行检测结果显示,后4种阳性对照血清未出现阳性反应,表明该方法具有良好的特异性;对已知牛无乳链球菌阳性血清倍比稀释后进行检测时,当稀释倍数达到1:12 800时仍出现阳性结果,表明该方法具有较高的敏感度;重复性试验显示批内变异系数为2.41%~8.89%,批间试验变异系数为7.53%~10.46%;用该方法对426份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,结果显示,其样品阳性检出率为45.07%。本研究首次基于乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿三联重组蛋白建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种准确、可靠的检测方法。

组蛋白甲基化促进AP2a基因表达及骨髓间充质干细胞成骨分化

目的研究转录因子AP2a的组蛋白甲基化状态对骨髓间充质干细胞成骨分化功能的影响。方法利用染色质免疫沉淀技术检测AP2a启动子甲基化状态。利用慢病毒载体的AP2a shRNA基因敲除AP2a进行丧失性功能研究。通过ALP活性、茜素红染色及钙离子定量分析研究骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力。结果与牙源性间充质干细胞相比,AP2a在骨髓间充质干细胞中表达明显升高,AP2a启动子区域H3K4me3和H3K36me2明显增强。基因敲除AP2a能抑制骨髓间充质干细胞ALP活性及体外矿化能力。结论 AP2a启动子区域H3K4me3和H3K36me2升高可以促进AP2a的表达和骨髓间充质干细胞成骨分化能力。

益气活血化湿方对被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白α-actinin-4和CD2AP的调节作用

目的探讨益气活血化湿方及其拆方对被动型Heymann肾炎(PHN)模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白α-actinin-4和CD2AP的调节作用。方法取雄性Wistar大鼠,制备经典的PHN模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、环孢素组、益气活血化湿方全方组、益气方组、活血方组和化湿方组,另取正常大鼠为对照组。各药物组分别灌胃给予相应药液,对照组和模型组大鼠灌胃给予等量0.9%NaCl溶液,连续6周。分别于第0、2、4、6周对各只大鼠眼眶静脉丛采血,代谢笼收集24 h尿液。全自动生化分析仪检测血清样本白蛋白(Alb)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平以及尿液样本24 h尿蛋白定量(UPRO)。干预结束后,取双侧肾脏。HE染色后光镜下观察肾组织形态学变化,透射电镜下观察肾小球基底膜、足细胞及足突的形态学变化。PCR和Western blot检测肾组织中α-actinin-4和CD2AP的mRNA及蛋白表达水平。结果①与对照组相比,模型组大鼠在各时间点UPRO和SCr水平均明显升高(P<0.05),Alb水平明显下降(P<0.05)。与模型组相比,环孢素组第4、6周UPRO水平明显下降(P<0.05),第2、4、6周Alb水平明显下降(P<0.05),但第2、4、6周SCr和BUN水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,全方组仅第6周UPRO水平明显下降(P<0.05)。与环孢素组相比,全方组第2、4、6周SCr和BUN水平明显降低(P<0.05)。②与对照组相比,模型组光镜下观察可见肾小球明显肿大,肾小球基底膜弥漫性增厚,毛细血管襻受压,部分肾小管上皮细胞肿胀;电镜下显示上皮细胞下大量电子致密物沉积,足突广泛融合或消失。与模型组相比,各药物干预组的肾小球病变程度均有减轻。③与对照组相比,模型组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CD2AP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,环孢素组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05),CD2AP mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。与模型组相比,全方组α-actinin-4蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。④与模型组比较,各拆方组在各时间点的UPRO、Alb、SCr和BUN水平均无明显变化(P>0.05)。病理学观察显示各拆方组肾小球损伤程度较模型组明显减轻。与模型组相比,益气方组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05),活血方组CD2AP mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论益气活血化湿方可明显降低PHN模型大鼠尿蛋白水平,减轻肾小球损伤,其机制可能与下调裂孔膜蛋白α-actinin-4表达、上调CD2AP表达有关。其拆方益气方具有抑制α-actinin-4表达的作用,活血方具有促进CD2AP表达的作用。

术前纤维蛋白原、铁蛋白、GM2AP联合检测对早期胃癌内镜黏膜下剥离术后复发的预测价值

目的研究术前纤维蛋白原(FIB)、铁蛋白(SF)、GM2神经鞘脂激活蛋白(GM2AP)联合检测对早期胃癌患者内镜黏膜下剥离术后复发的预测价值。方法选取62例胃癌患者作为实验组,并选取62例同期正常胃粘膜入选者作为对照组。对比实验组和对照组术前血清FIB、SF以及GM2AP水平;对实验组随访1年,对比分析复发和未复发患者术前血清FIB、SF、GM2AP水平以及临床特征(性别、年龄、分化程度、浸润程度、TMN分期),并分析影响早期胃癌术后复发的独立危险因素,通过ROC曲线分析术前FIB、SF以及GM2AP水平联合检测对早期胃癌患者内镜黏膜下剥离术后复发的预测价值。结果与对照组相比,实验组患者术前血清FIB、SF以及GM2AP水平显著升高(P<0.05);与未复发组患者相比,复发组患者术前血清FIB、SF以及GM2AP水平显著升高(P<0.05);复发组低分化以及黏膜下浸润比例显著高于未复发组(P<0.05);术前血清FIB、SF、GM2AP水平,分化程度以及浸润程度均是影响早期胃癌术后复发的独立危险因素(P<0.05);术前FIB、SF、GM2AP联合检测诊断价值高于各项单独检测。结论术前FIB、SF、GM2AP联合检测对早期胃癌内镜黏膜下剥离术后复发的预测价值较高。

阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin和CD2AP的表达及意义

【目的】动态观察nephrin、CD2相关蛋白(CD2AP)在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。【方法】72只大鼠分为2组,模型组36只和对照组36只,模型组大鼠尾静脉一次性注射盐酸阿霉素,对照组大鼠尾静脉一次性注射等容积生理盐水,分别于注射后3、5、7、14、28、42d各杀检6只大鼠。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学检测大鼠肾小球中nephrin、CD2AP的表达和分布变化。【结果】①模型组大鼠7d时nephrinmRNA表达增加,14d时其蛋白表达(9.44±0.49)亦显著增加;CD2AP表达增加时间较晚,28d时其mRNA和蛋白表达(7.88±1.01)才显著增加。②与对照组相比,模型组nephrin、CD2AP出现分布异常,从沿着毛细血管袢线样分布逐渐转变为不连续性颗粒样或斑片状分布。③肾小球nephrinmRNA、CD2APmRNA表达量与24h尿蛋白量均呈正相关关系(r=0.878,P<0.01;r=0.945,P<0.01)。【结论】①nephrin早期出现表达增加及分布异常,可能是导致蛋白尿的原因及判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。②CD2AP在后期出现表达增加,可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。

肾络通对糖尿病肾病大鼠podocin、CD2AP的影响

目的:探讨肾络通(益气养阴消癥通络为法)对糖尿病肾病大鼠24 h尿白蛋白定量(UAlb)及肾组织podocin、CD2AP的影响。方法:70只大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余60只大鼠均行腹腔注射STZ(55 mg·kg-1·d-1)1次,3 d后测空腹血糖≥16.7 mmol/L者按随机数字表法分为模型组、中药组及厄贝沙坦组,按各组相应药物剂量灌胃。于第24周末检测各组大鼠24 h UAlb定量,免疫组化法测肾组织podocin、CD2AP蛋白表达。结果:各治疗组与模型组比较24 h UAlb明显减少,podocin、CD2AP蛋白表达显著增加。结论:益气养阴、消癥通络中药肾络通可能通过减少podocin、CD2AP蛋白的丢失,使肾小球滤过膜的完整性得到一定程度的恢复,而减轻糖尿病肾病大鼠蛋白尿。

CASP8AP2基因表达调控、功能与临床价值研究进展

我们系统总结了有关CASP8AP2基因的表达调控、生物学功能及其临床预后价值的研究报告。现有研究显示,CASP8AP2基因的表达受到同源盒蛋白和DNA甲基化的调控,miRNA-210能够使其表达沉默。CASP8AP2的生物学功能包括:参与FAS和TNFα介导的细胞凋亡、TNFα介导的NF-κB活化、糖皮质激素和盐皮质激素受体介导的基因转录调控、组成Cajal体和组蛋白位点体、复制依赖性组蛋白的转录和前体mRNA的3'端加工成熟、调控细胞周期S期进展,还能作为转录因子c-Myb、p73的辅助激活因子参与调控多种基因的转录。同时,CASP8AP2基因低表达与儿童ALL的复发相关;在儿童T-ALL和T淋巴母细胞淋巴瘤中,CASP8AP2基因的缺失较为常见,与患儿的较差预后相关。另外,在CASP8AP2基因序列中的3个单核苷酸多态性位点可能与弥漫性大B细胞淋巴瘤和白血病的发生有关。结论:CASP8AP2是一个多功能蛋白,具有调控细胞增殖、凋亡、基因表达等多种生物学功能,在儿童血液系统恶性肿瘤中,CASP8AP2基因还是一个有价值的预后标志物,部分单核苷酸多态性可能与白血病、淋巴瘤的发病相关。

AP2α荧光素酶报告基因的构建及在BMPs诱导成骨分化研究中的应用

目的构建一种携带转录蛋白AP2α效应元件的荧光素酶报告基因载体,并应用于筛选BMPs对AP2α转录活性的影响。方法设计4个串联的AP2α效应元件(AP2α-RE),将其克隆至经Bam HⅠ和MluⅠ双酶切的pBGLuc荧光素酶报告基因质粒构建pBGLuc-AP2α-RE载体。重组腺病毒Ad-AP2α及其两种显性负性突变体Ad-dnAP2α感染小鼠间充质干细胞C3H10,通过Realtime PCR、Western blot检测AP2α的mRNA和蛋白水平表达,EMSA检测AP2α的DNA结合能力。pBGLuc-AP2α-RE转染C3H10细胞,荧光素酶报告基因检测同上各组AP2α的转录活性。Ad-BMPs感染pBGLuc-AP2α-RE转染的C3H10细胞,荧光素酶报告基因筛选BMPs对AP2α转录活性的影响。结果经PCR、酶切及测序鉴定,证实AP2α-RE正确克隆至pBGLuc-AP2α-RE荧光素酶报告基因载体,Ad-AP2α感染能显著提高AP2α的表达及结合DNA的能力。显性负性突变体可以表达各自的突变体,EMSA结果显示Ad-dnAP2α-△bHLH组能显著抑制AP2α结合DNA的能力,而Ad-dnAP2α-△TAD组结合的DNA探针强于对照组。荧光素酶报告基因提示AP2α过表达组能促进AP2α转录活性,而两种显性负性突变体均能抑制AP2α转录活性。重组腺病毒BMPs感染组的AP2α转录活性均有增高,其中BMP9最为显著。结论成功构建携带转录蛋白AP2α效应元件的荧光素酶报告基因载体用于检测AP2α的转录活性,并初步发现BMP9对AP2α的转录活性有明显的促进作用。

CD2相关蛋白mRNA在大鼠阿霉素肾病模型中的表达

目的观察CD2相关蛋白(CD2AP)mRNA在大鼠阿霉素肾病模型中的表达,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。方法建立大鼠阿霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察不同时期(第2、4、6、8周末)肾组织的病理改变,并采用半定量RTPCR的方法,检测大鼠肾皮质中CD2APmRNA的表达。结果阿霉素注射后:(1)大鼠24h尿蛋白量逐渐增加,第2、4、6、8周末分别为(144.5±16.4)、(250.0±45.5)、(440.1±62.1)和(626.5±94.2)mg/24h,均显著高于正常对照组(24.3±6.5)mg/24h(P<0.001);(2)大鼠肾皮质CD2APmRNA的表达在第4、6、8周末分别达到正常对照组的1.7倍、2.5倍和1.9倍。CD2APmRNA的表达与尿蛋白量呈正相关(r=0.58,P<0.01)。结论阿霉素肾病模型大鼠肾皮质CD2APmRNA的表达与大鼠蛋白尿的发生发展具有一定的相关性。

CD2AP真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达定位

目的:构建pEGFP-CD2AP真核表达载体,检测其在COS-7细胞中的表达。方法:PCR扩增CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)全长编码序列,PCR产物连接入pGEM T-Easy载体,经测序确认无误后,亚克隆入pEGFP-C2构建pEGFP-CD2AP真核表达载体,采用Lipofectamine 2000转染COS-7细胞,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP。结果:pEGFP-CD2AP表达载体转染COS-7细胞后,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论:pEGFP-CD2AP真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为今后的CD2AP功能研究奠定基础。

miRNA-330-3p/Ap2m1轴在过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体抗心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌外泌体(BMSC^(GATA-4)exosome)通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴减少心肌细胞凋亡,提高心肌梗死心功能。方法建立小鼠心梗模型,共分7组,分别经尾静脉注射BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome、BMSC^(miRNA-330-3p-inhibitor)-exosome、BMSC^(空载体)-exosome、BMSCexosome 48 h,同时将心梗未处理组及正常小鼠作为对照组。采用心脏彩超检测各组心功能,RT-PCR检测心梗心肌细胞内miRNA-330-3p的表达,Tunel法检测各组心梗心肌细胞凋亡数量。miRNA-330-3p对应靶基因Ap2.m1、Cnot4蛋白采用Western blot法进行检测。结果BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),其心肌细胞内miRNA-330-3p表达量最高(P<0.05)。BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心肌细胞的凋亡率最低(P<0.05),BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心肌细胞内的Ap2.m1的表达最低(P<0.05)。结论过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞外泌体通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴抗心肌细胞凋亡。

大鼠β_2-糖蛋白Ⅰ的氧化修饰

目的 :探讨 β2 -糖蛋白 ( β2 - GP )在体外的氧化修饰 ,为其在体内诱导抗磷脂抗体产生研究作准备。方法 :首先纯化并鉴定大鼠 β2 - GP ,然后在体外以次黄嘌呤 /黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β2 - GP 。结果 :大鼠的 β2 - GP 在体外被氧化产生羰基 ,氧化后的羰基含量与氧化前的比较有显著差异( P<0 .0 5)。结论 :在体外 β2 - GP 可以被次黄嘌呤 /黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化产生羰基。

转录激活因子AP-2β基因的克隆、表达及其抗体的制备(英文)

目的 :克隆、表达与纯化出AP - 2 β蛋白质 ,并用所表达的蛋白质制备出抗AP - 2 β的抗体。方法 :将AP- 2 β基因插入到表达载体 pGEX - 4T - 1谷胱苷肽 -S -转移酶基因下游 ,所得克隆经测序 ,以确定其阅读框码的正确性 ,然后用正确的克隆质粒转化E .coliBL2 1,用异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,而后用谷胱苷肽琼脂糖 - 4B纯化所表达的融合蛋白质。通过凝胶迁移率变动分析实验 (EMSA)测得蛋白质的生物学活性 ,所得蛋白质用于制备抗体。结果 :得到一条大约 78KD的蛋白质 ,并且成功的制备了抗体 ,所得蛋白质和抗体均具有很好的生物学活性。结论 :我们成功的表达出转录激活因子AP - 2 β并制备出抗AP - 2 β的抗体 ,为一下步对AP - 2 β的功能进行研究打下了良好的基础。

CD2AP相关作用的研究进展

CD2AP首先是作为一个免疫分子被发现,其后又证实它也是一个足细胞分子,与其他各种足细胞相关蛋白的关系密切而复杂,并参与信号传导,在肾脏病的发生中起重要作用。文中从CD2AP与蛋白质的关系,中医药上调CD2AP研究的现状等方面综述CD2AP相关作用的研究进展。

霉酚酸酯对大鼠糖尿病肾病及CD2相关蛋白表达的影响

目的研究霉酚酸酯(MMF)对大鼠糖尿病肾病(DN)及CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法纯种雄性SD大鼠24只,分正常对照(A)组、DN模型(B)组和MMF干预DN(C)组。饲养8周后行有关血尿生化指标和光镜组织学、透射电镜、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)CD2APmRNA表达检测。结果MMF明显减少DN大鼠24 h尿蛋白的排泄,预防血肌酐的升高。组织学显示C组大鼠肾小球面积明显减少,系膜增宽及细胞外基质积聚明显改善。电镜下B组大鼠足细胞足突增宽,部分融合,肾小球毛细血管袢基膜增厚,系膜区增宽,系膜基质增多,C组大鼠以上病变都明显减轻。CD2AP mRNA表达在B组显著高于A组和C组。结论MMF具有治疗SD大鼠DN的作用,并且在转录水平逆转肾皮质CD2AP表达上调。