人AP2β基因慢病毒表达载体的构建及其对肝癌HepG2细胞生长的影响

目的构建人AP2β基因慢病毒(lentivirus)表达载体,并检测其过表达对肝癌细胞HepG2生长的影响。方法从人乳腺文库中采用PCR技术扩增出人AP2β基因编码序列,并将其插入pCDH载体,获得pCDH-AP2β真核表达载体;将其与包装载体转染293T,包装成Lenti-AP2β慢病毒并测定病毒滴度,感染肝癌HepG2细胞,Western印迹检测病毒载体介导的AP2β蛋白的表达情况,并进行生长曲线实验研究过量表达AP2β对HepG2细胞生长的影响。结果双酶切和Western印迹表明,pCDH-AP2β真核表达质粒构建成功,包装成滴度为2.5×107PFU/ml的LentiAP2β慢病毒载体;将此慢病毒载体感染HepG2细胞,Western印迹显示,慢病毒载体成功表达AP2β,生长曲线和克隆形成实验结果表明,AP2β过表达可抑制肝癌细胞HepG2的生长。结论构建了AP2β的慢病毒表达载体LentiAP2β,在HepG2细胞中过量表达AP2β可抑制细胞的生长,该实验为进一步研究AP2β在肝癌中的功能奠定了基础。

转录激活因子AP-2β基因的克隆、表达及其抗体的制备(英文)

目的 :克隆、表达与纯化出AP - 2 β蛋白质 ,并用所表达的蛋白质制备出抗AP - 2 β的抗体。方法 :将AP- 2 β基因插入到表达载体 pGEX - 4T - 1谷胱苷肽 -S -转移酶基因下游 ,所得克隆经测序 ,以确定其阅读框码的正确性 ,然后用正确的克隆质粒转化E .coliBL2 1,用异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,而后用谷胱苷肽琼脂糖 - 4B纯化所表达的融合蛋白质。通过凝胶迁移率变动分析实验 (EMSA)测得蛋白质的生物学活性 ,所得蛋白质用于制备抗体。结果 :得到一条大约 78KD的蛋白质 ,并且成功的制备了抗体 ,所得蛋白质和抗体均具有很好的生物学活性。结论 :我们成功的表达出转录激活因子AP - 2 β并制备出抗AP - 2 β的抗体 ,为一下步对AP - 2 β的功能进行研究打下了良好的基础。