多肽AP25与多西他赛联合用药对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制活性研究

目的检测多肽AP25与多西他赛联合使用治疗实验性乳腺癌的活性是否优于单用两种药物的活性,为临床合理用药提供依据。方法建立人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,以多西他赛(10 mg·kg-1)和多西他赛(5 mg·kg-1)为阳性对照,观察AP25单用及与多西他赛联合应用对肿瘤生长的抑制作用,用金氏公式计算Q值,评价联合用药的作用效果。结果动物实验表明,AP25与多西他赛联合使用抑瘤率明显提高,AP25(20 mg·kg-1)与多西他赛(10 mg·kg-1)联合使用具有较明显的抑制MDA-MB-231肿瘤生长的作用,0.85<Q=0.99<1.15,联合作用为相加;AP25(20 mg·kg-1)与多西他赛(5 mg·kg-1)联合使用具有明显抑制MDA-MB-231肿瘤生长的作用,Q=1.18>1.15,联合作用为协同。结论多肽AP25与多西他赛联合用药明显抑制肿瘤生长,两种药物联合使用可以降低多西他赛的给药剂量,从而降低毒副作用。

抗肿瘤多肽AP25体外活性研究

目的研究抗肿瘤多肽AP25的体外活性。方法通过MTT实验、细胞迁移实验、管状结构形成实验检测AP25体外活性。结果 AP25对HUVEC、MGC-803、HeLa、HCT116、MDA-MB-231细胞增殖均有明显的抑制作用,对HU-VEC细胞迁移和管状结构形成有明显的抑制作用。结论AP25主要通过抑制内皮细胞的增殖、迁移和管状结构形成,来抑制肿瘤新生血管的生成,进而发挥其抗肿瘤活性,同时AP25也具有直接抑制肿瘤细胞生长的活性。

多肽AP25抗肿瘤活性研究

目的研究多肽AP25在组织水平和整体动物水平的抗肿瘤作用,为临床试验提供依据。方法采用大鼠动脉环和鸡胚尿囊膜实验检测AP25对血管新生的抑制作用,采用动物体内实验评价AP25抗肿瘤活性。结果大鼠动脉环实验表明多肽AP25可以抑制大鼠动脉环微血管生成,并且在0.25 mg·L-1时抑制率达到62.19%;鸡胚尿囊膜实验表明多肽AP25对血管新生有明显的抑制作用,且具有剂量依赖关系,20 mg·L-1抑制率达到80.37%;动物体内实验表明多肽AP25在裸鼠移植瘤模型上可以明显地抑制HCT116细胞的生长。结论多肽AP25对新生血管具有明显的抑制作用,主要通过抑制新生血管达到抑制肿瘤的生长,进而发挥抗肿瘤的活性。

高效液相色谱法测定多肽AP25的含量及有关物质

建立多肽AP25含量测定及有关物质检查的高效液相色谱方法。采用COSMOSIL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以0.05 mol/L磷酸二氢钠(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱;检测波长为220 nm;体积流量为1.0 mL/min;柱温为25℃;进样体积为20μL。在该色谱条件下,各有关物质峰均可与AP25主峰良好分离,理论塔板数不低于5 000,AP25浓度在0.8～1.2 mg/mL(r=0.999 6,n=5)和18～42μg/mL(r=0.999 5,n=5)范围内与峰面积呈良好线性关系;检测限和定量限分别为0.5 ng和1 ng;含量和有关物质检测方法的重复性试验RSD值分别为0.60%和0.48%(n=6),中间精密度试验RSD值分别为0.35%和0.80%(n=12)。3批原料药的含量和有关物质检测结果分别为99.56%,99.84%,99.74%和2.17%,0.98%,2.19%。本方法简便易行,灵敏度高,耐用性、专属性良好,准确稳定,可用于测定多肽AP25的含量及有关物质。

整合素阻断剂AP25单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备整合素阻断剂AP25的单克隆抗体,鉴定其效价和特异性。方法从抗原免疫BALB/c小鼠分离免疫脾细胞,通过杂交瘤技术将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选杂交瘤细胞株并进行扩大培养。采用小鼠体内诱生法制备腹水,进行纯化后得到抗AP25单克隆抗体,用ELISA和Western blot鉴定其效价和特异性。结果 ELISA检测抗AP25单克隆抗体效价可达1∶2×106,Western blot鉴定抗体特异性良好。结论获得了能够高表达抗AP25单克隆抗体的杂交瘤细胞株;腹水制备抗体,纯化后得到效价高、特异性良好的AP25单克隆抗体。